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上海市重大科技攻关项目(03DZ19231)

作品数:9 被引量:47H指数:5
相关作者:林矫矫蔡幼民傅志强刘金明冯新港更多>>
相关机构:中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所中国农业科学院上海兽医研究所中国科学院上海生命科学研究院更多>>
发文基金:上海市重大科技攻关项目国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生农业科学更多>>

文献类型

  • 9篇中文期刊文章

领域

  • 5篇生物学
  • 4篇医药卫生
  • 3篇农业科学

主题

  • 9篇血吸虫
  • 9篇日本血吸虫
  • 9篇吸虫
  • 3篇蛋白
  • 3篇疫苗
  • 3篇免疫
  • 3篇克隆
  • 3篇基因
  • 2篇童虫
  • 2篇免疫保护
  • 2篇功能分析
  • 2篇CDNA克隆
  • 2篇虫卵
  • 1篇蛋白质
  • 1篇蛋白质组
  • 1篇电泳
  • 1篇东方田鼠
  • 1篇新基因
  • 1篇信号
  • 1篇信号转导

机构

  • 6篇中国农业科学...
  • 2篇中国科学院上...
  • 2篇中国农业科学...
  • 1篇南京大学
  • 1篇西北农林科技...
  • 1篇扬州大学
  • 1篇中国农业科学...
  • 1篇安徽省血吸虫...

作者

  • 9篇林矫矫
  • 8篇蔡幼民
  • 4篇傅志强
  • 4篇冯新港
  • 4篇刘金明
  • 3篇石耀军
  • 3篇朱传刚
  • 3篇苑纯秀
  • 3篇姚利晓
  • 2篇程国锋
  • 2篇李浩
  • 2篇沈阳
  • 2篇周元聪
  • 1篇陆柯
  • 1篇陆珂
  • 1篇孙军
  • 1篇赵晓宇
  • 1篇于三科
  • 1篇孙安国
  • 1篇朱国强

传媒

  • 2篇生物工程学报
  • 1篇中国农业科学
  • 1篇Curren...
  • 1篇中国兽医科技
  • 1篇Zoolog...
  • 1篇寄生虫与医学...
  • 1篇热带病与寄生...
  • 1篇中国兽医科学

年份

  • 2篇2007
  • 4篇2006
  • 3篇2005
9 条 记 录,以下是 1-9
排序方式:
噬菌体展示日本血吸虫SSj14单抗的模拟抗原表位及其免疫保护性研究被引量:9
2006年
为获得日本血吸虫保护性单抗SSj14的模拟抗原表位,研究其对日本血吸虫的免疫保护作用。用纯化的SSj14单抗筛选噬菌体随机12肽库,对33个克隆进行ELISA验证,获得30个阳性克隆,DNA序列分析表明这30个克隆分属11个多肽序列,分析比较发现这些多肽具有“H_NQ_X_S_PF_X_X_L_A_T”的相似基序。进而选取3个阳性单克隆及混合阳性噬菌体克隆进行Western_blotting实验,证明都有良好的抗原性。用它们免疫BALBc鼠,并攻击血吸虫尾蚴,观察免疫鼠抗血吸虫感染的保护效果和IL_12的变化,结果表明:筛选获得的噬菌体阳性克隆具有良好的免疫原性,能诱导免疫鼠产生高滴度的抗血吸虫的特异性抗体;和对照组鼠相比,免疫小鼠,分别获得13.84%~52.83%的减虫率,34.17%~65.47%的肝脏减卵率以及28.89%~73.78%的粪便减卵率;三次免疫之后,和对照组相比,免疫小鼠体内IL_12水平均有升高。为发展日本血吸虫疫苗提供了新思路、新途径。
王欣之傅志强黄劭鹏朱国强蔡幼民林矫矫
关键词:日本血吸虫噬菌体展示模拟抗原白细胞介素12
日本血吸虫虫卵、童虫和雌雄成虫膜蛋白的双向电泳被引量:11
2005年
Membrane proteins were extracted from eggs, schistosomulum, adult male and female worms of Schistosoma japonicum in order to analyze the differently expressed profile by two dimensional electrophoresis. Schistosomulum and adult worms were obtained from rabbits infected with 1 500 cercariaes on 14 and 42 days after challenge, respectively. Adult male and female worms on 42 days were manually detached and stored into liquid nitrogen until use. Eggs were collected by Percoll TM from the liver of rabbits. ProteoPrep Membrane Extraction Kit TM was employed to extracted membrane proteins by reducing and alkylating with TBP and iodoacetamide from 200 mg of eggs, schistosomulums, adult male worm and female worms, respectively. Immobilized pH gradient strips with a linear pH range of 3-10 (130 mm) were rehydrated together with membrane proteins (30 μg) in 250 μl solution containing 7 mol urea, 2 mol thiourea, 2% SB3-10, 4% CHAPS, 40 mmol Tris, 30 mmol DTT, then separated on 12.5% SDS polyacrylamide gel for the second dimensional electrophoresis. Gels were stained with silver, scanned by Labscan, and analyzed using ImageMaster TM Analysis software. The 2D maps of egg, schistosomulum, adult female worm and male worm were showed 78±3、67±3、108±4 and 122±4 spots respectively. There were 35±1 spots which showed specific expression in female worm as compared with male worm, but 45±2 spots were in male worms. Most differently expressed spots between male and female worms were located in the area of 40-70 kD and pI 4-7. The large number of unique spots from schistosomulum was located in the area of alkalescence. The 2D map of for adult male worms uniquely showed 5 spots as compared with that of schistosomulum and female worm. The female worm showed 4 unique spots as compared with that of schistosomulum, egg and male worm. The unique spots between male and female worms were identified by the database of SWISS 2D-PAGE according to the molecular weight and isoelectronic point. Calreticulin 1, methyltransferase, outer memb
程国锋冯新港林矫矫石耀军陆柯周元聪蔡幼民
关键词:童虫日本血吸虫膜蛋白虫卵双向电泳SDSPAGE
日本血吸虫Sj314C10基因的获得及其DNA疫苗的构建被引量:1
2005年
利用快速cDNA末端扩增(RACE)技术结合“电子cDNA文库”筛选法,对日本血吸虫成虫期特异表达基因EST片段的全长序列进行了扩增,获得了一含完整开放性阅读框(ORF)的基因序列(GenBank中的登录号为AY847290)。经对该基因序列进行分析,表明其为日本血吸虫的一新基因,命名为Sj314C10。将该基因的蛋白编码区克隆到真核表达载体pcDNA3 中,把构建好的重组质粒转化到大肠埃希氏菌DH5α中培养;筛选阳性克隆进行序列鉴定,经分析表明与预期的结果一致。成功地构建了该基因的DNA疫苗,为该基因作为疫苗候选分子的研究奠定了基础。
杨柳冯新港苑纯秀沈阳刘金明林矫矫蔡幼民于三科
关键词:日本血吸虫DNA疫苗
日本血吸虫TEGT基因的cDNA克隆和生物信息学分析被引量:1
2006年
目的克隆日本血吸虫新基因TEGT(Sj.TEGT)的全长序列。方法根据编码日本血吸虫大陆株的EST基因片段的序列,设计5’RACE的系列引物,扩增Sj.TEGT的5’端,测序后预测该基因的全长ORF;再以此设计引物,以日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到Sj.TEGT的全长cDNA。结果从日本血吸虫中国大陆株成虫mRNA中克隆到1个TEGT相关基因,命名为Sj.TEGT基因。其编码的蛋白的分子质量大约为30ku;对其编码的氨基酸序列的分析显示其编码蛋白有6个跨膜螺旋区。结论Sj.TEGT是一个新基因,有必要对其功能进行深入研究。
朱传刚林矫矫陈建秀
关键词:日本血吸虫基因克隆
日本血吸虫真核翻译起始因子5基因的cDNA克隆和免疫保护功能分析(英文)
2005年
利用抑制削减杂交法筛选日本血吸虫雌雄虫差异基因,从中获得真核翻译起始因子5基因(eIF5)的 表达序列标。对该序列进行生物信息学分析:对其5’端进行电子延伸,获得含完整开放阅读框的cDNA序列 (AY686501)。将其亚克隆到表达载体pET-28c,进行重组表达。免疫保护效果实验表明,重组表达蛋白具有显著 抑制血吸虫卵在寄主肝脏中的沉积效果。
程国锋林矫矫孙军李浩朱传刚周元聪蔡幼民
关键词:日本血吸虫疫苗
日本血吸虫信号转导蛋白Sjwnt-4基因的克隆、表达及功能分析被引量:7
2007年
由Wnt基因家族产物与其它相关基因产物构成的Wnt信号通路,是细胞发育和生长调节的一个关键途径,对动物的发育特别是生殖系统的发育起重要的调节作用。在人类和小鼠中,Wnt4蛋白是性腺分化过程中主要调节因子,在胚胎发育中起着关键作用。利用RACE技术从日本血吸虫19d童虫中首次扩增到一个Wnt家族基因,序列分析表明该基因的完整编码框含1311bp,编码436个氨基酸,理论分子量49.6kD。同源性分析结果表明,该基因的氨基酸序列具有典型Wnt家族蛋白特征,与日本三角涡虫、人Wnt4的氨基酸序列相似性分别达43%、37%,推测为血吸虫的Wnt4基因,命名为Sjwnt4(GenBank登陆号DQ643829)。实时定量PCR分析显示该基因在14d童虫、19d童虫、31d虫体、44d雌虫及44d雄虫中均有表达,其中19d童虫中的表达量明显高于其它发育阶段,44d雌虫中的表达量明显高于雄虫。构建了该基因的原核表达载体pGEX-4T-2-Sjwnt4,应用大肠杆菌系统进行了表达,表达蛋白以包涵体形式存在,Western印迹显示表达产物能被日本血吸虫成虫粗抗原免疫血清所识别。Sjwnt4基因及其表达产物的获得,为探索Wnt信号通路对血吸虫发育、生殖的调节提供了重要基础。
陶丽红姚利晓傅志强冯新港刘金明石耀军苑纯秀蔡幼民林矫矫
关键词:日本血吸虫信号转导发育
日本血吸虫新基因SjPP的筛选、克隆及对小鼠的免疫效果被引量:10
2006年
目的筛选克隆东方田鼠血清识别的日本血吸虫靶抗原基因,并研究其免疫保护效果。方法利用东方田鼠感染血清免疫筛选日本血吸虫(中国大陆株)成虫cDNA表达文库获得阳性克隆,以5′RACE技术扩增获基因全长序列,构建含目的基因的核酸疫苗并研究在小鼠中的免疫保护效果。结果(1)获得4个日本血吸虫新的EST序列,即mfs-1(GenBank登录号BE974942)、mfs-3(GenBank登录号BE974944)、mfs-4(GenBank登录号BE974945)和mfs-5(GenBank登录号BE974946)。(2)mfs-5进行全长序列克隆,获得的日本血吸虫新基因SjPP(GenBank登录号AY902477)长1311bp,编码302个氨基酸,理论分子量为34.7kD,等电点为5.51;其氨基酸序列具有丝/苏氨酸蛋白磷酸酶(serine/threoninespecificproteinphosphatase,简称PP)的保守序列LRGNHE,并且含有该酶特异性抑制剂冈田酸的作用位点SAPNYC,与人的PP6、鼠PP6、果蝇PPⅤ等蛋白的氨基酸序列具有高度同源性,分别达72%、70%和70%。(3)成功构建核酸疫苗pCMV-Script/SjPP,免疫BALB/c小鼠诱导产生肝组织减卵率为23.91%,粪便减卵率为31.91%。结论(1)获得日本血吸虫新的抗原基因SjPP。(2)含SjPP基因的核酸疫苗在小鼠中诱导了部分免疫保护效果。
姚利晓林矫矫傅志强朱传刚李浩陆珂刘金明石耀军沈阳蔡幼民
关键词:日本血吸虫东方田鼠核酸疫苗免疫保护
日本血吸虫童虫部分差异表达蛋白的质谱分析被引量:13
2007年
应用蛋白质双向电泳技术和质谱技术对16日龄日本血吸虫童虫的可溶性蛋白进行分离、分析,得到了2 000±69个蛋白斑点,其中500±86个蛋白斑点与血吸虫雌虫和雄虫的蛋白所共有,童虫特异呈现的蛋白斑点有26±1个。对其中20个童虫特异呈现的蛋白斑点进行质谱和生物信息学分析的结果表明,它们代表了16种蛋白;对这些蛋白进行生物学功能预测的结果表明,它们可能与寄生虫的生物合成、能量代谢、信号传导和细胞构成等相关。
赵晓宇姚利晓孙安国傅志强刘金明蔡幼民林矫矫
关键词:日本血吸虫童虫蛋白质组质谱
日本血吸虫卵壳蛋白基因的克隆及真核表达载体的构建
2006年
血吸虫卵壳蛋白基因是探讨血吸虫病免疫预防的重要靶标。本研究根据已发表的多个血吸虫卵壳蛋白基因的核苷酸序列,设计合成了特异引物,体外扩增和克隆了编码日本血吸虫中国大陆株卵壳蛋白基因SjESG的cDNA,测序结果表明与已发表的卵壳蛋白基因序列有较高同源性。为进一步研究该基因的功能,将其克隆入pcDNA3中,成功构建了真核表达载体,为SjESGDNA疫苗的研究打下了基础。
张慧苑纯秀冯新港蔡幼民林矫矫
关键词:日本血吸虫克隆真核表达载体
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