江苏省自然科学基金(BK2012146)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
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- 嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的构建及表达
- 2013年
- 目的 构建嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的慢病毒表达质粒,并研究该嵌合抗原受体在T细胞中的表达.方法 利用常规分子克隆技术将编码Igκ信号肽、抗G250单链抗体及信号结构CD8-28BBZ的编码序列拼接起来,并将得到的融合基因片段插入慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen中,采用酶切及测序鉴定.慢病毒感染T细胞后,通过荧光显微镜、Western blot、流式细胞术检测G250-CD8-28BBZ在T细胞中的表达.结果 双酶切及测序结果显示重组质粒pLVX-G250-CD8-28BBZ构建正确;慢病毒感染后的T细胞能发出绿色荧光;T细胞表达的G250-CD8-28BBZ分子大小正确;慢病毒感染2周后,G250-CD8-28BBZ在T细胞中的阳性表达率为45.2%.结论 成功构建了嵌合抗原受体G250-CD8-28BBZ的慢病毒表达质粒,该嵌合抗原受体能够在T细胞内高效稳定表达.
- 张青李彩红杨洁李慧忠裴冬生郑骏年
- 关键词：肿瘤免疫治疗G250慢病毒
- 乳腺癌转移抑制基因1通过金属蛋白酶组织抑制因子-2/基质金属蛋白酶-2途径抑制胶质瘤细胞侵袭被引量：7
- 2013年
- 目的 探讨抑癌基因乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）影响胶质瘤细胞侵袭的机制.方法 将真核表达质粒pEGFP-BRMS1和对照质粒pEGFP-N2分别转入人胶质瘤U251和U87细胞中,Western blot技术检测BRMS1蛋白表达,人工基底膜侵袭实验检测细胞侵袭能力,明胶酶谱实验检测胶质瘤细胞分泌基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的活性,Western blot检测金属蛋白酶组织抑制因子-2（TIMP-2）及MMP-2蛋白表达.结果 与对照组比较,转染pEGFP-BRMS1质粒24 h后U251和U87细胞侵袭力分别下降了43％和52％,差异均有统计学意义（P＜0.01）；转染BRMS1可以明显抑制2种胶质瘤细胞分泌MMP-2活性；pEGFP-BRMS1可以通过上调TIMP-2的表达从而抑制MMP-2蛋白表达.结论 BRMS1可以通过增加TIMP-2表达进而抑制MMP-2的表达,打破TIMP-2/MMP-2平衡,最终抑制胶质瘤细胞侵袭能力.
- 李中林梅鹏金白津时梅林李连涛范月超郑骏年
- 关键词：胶质瘤金属蛋白酶组织抑制因子-2基质金属蛋白酶-2
- 乳腺癌转移抑制基因1对胶质瘤细胞黏附和迁移的影响及其机制被引量：2
- 2013年
- 目的 探讨乳腺癌转移抑制基因1（BRMS1）在胶质瘤细胞黏附和迁移中的作用和机制.方法 脂质体介导真核表达质粒pEGFP-BRMS1和对照质粒pEGFP-N2转入人胶质瘤U251和U87细胞中,Western blot技术检测BRMS1蛋白的表达.黏附实验和迁移实验检测细胞黏附和迁移能力.Western blot检测磷酸化黏着斑激酶（FAK） （p-FAK）和磷酸化酪氨酸激酶（Src）（p-Src）蛋白的表达.结果 与对照组比较,转染pEGFP-BRMS1质粒24 h后U251和U87细胞中BRMS1蛋白表达显著增高;细胞黏附能力分别下降60％和65％;细胞穿越Transwell小室能力分别下降64％和68％,差异均有统计学意义（P＜0.01）;转染BRMS1后两种细胞p-FAK和p-Src表达量明显减少.结论 BRMS1通过减少p-FAK/p-Src表达抑制胶质瘤细胞黏附和迁移能力.
- 李中林梅鹏金白津时梅林李连涛范月超郑骏年
- 关键词：乳腺癌转移抑制基因1胶质瘤迁移
