国家重点基础研究发展计划(2001CB510207)
- 作品数：14 被引量：68H指数：4
- 相关作者：陈主初肖志强李萃易红李茂玉更多>>
- 相关机构：中南大学湖南师范大学南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金教育部跨世纪优秀人才培养计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学理学更多>>
- 两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳分离效果的影响被引量：4
- 2007年
- 目的评价两种样品制备方法对血清蛋白质双向凝胶电泳(2-DE)分离效果的影响,建立高分辨率、高重复性的血清2-DE图谱,为鉴定疾病相关血清蛋白质奠定基础。方法分别用热SDS法和直接溶解法处理大肠癌血清样品,采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离总蛋白质,图像软件分析后,对其中3个差异蛋白质点行基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱鉴定。结果应用热SDS法处理血清总蛋白质进行双向电泳,可获得分辨率高、重复性好的人血清双向电泳图谱。对直接溶解和热SDS法处理的蛋白样品进行3次重复性检测,凝胶的平均蛋白质点数为675±46和702±49,平均匹配点数为573±42和623±52,匹配率为85.3%和89.6%,分析3块不同胶间蛋白质点在IEF方向的位置偏差为(0.85±0.30)mm和(0.81±0.28)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.02±0.18)mm和(0.97±0.12)mm。热SDS处理的2-DE胶蛋白质点质谱可获得高质量质谱图,并可以检测到相对低丰度的血清蛋白质。结论热SDS法是一种更有效的血清蛋白质样品制备方法,我们利用热SDS法处理血清样品建立了分辨率较高且重复性好的人血清蛋白质双向凝胶电泳图谱。
- 赵亮丁彦青梁莉李欣李雪华吴丽莎
- 关键词：双向凝胶电泳蛋白质组
- 转染LCRG1基因的喉癌细胞差异蛋白质分析被引量：1
- 2006年
- 背景与目的:LCRG1基因是我室利用mRNA差异显示技术克隆的一个喉癌相关抑癌基因。先前的研究显示将LCRG1转染喉癌细胞系Hep-2,发现其具有抑制细胞增殖、软琼脂集落形成及裸鼠成瘤能力的作用。本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法筛选LCRG1抑瘤作用相关的蛋白质。方法:抽提稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)的细胞总蛋白,采用双向凝胶电泳技术分别分离其总蛋白。考马斯亮蓝染色显色,PDQuest图像分析系统分析获取的2-D胶图像,从胶中选取差异表达的蛋白质点,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱分析,最后Mascot软件搜索数据库初步鉴定蛋白质。结果:获得了重复性和分辨率较好的Hep-2/LCRG1和Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,总蛋白质点数分别为1075±43和1027±23,平均匹配率为91%。图像分析差异蛋白质点,质谱鉴定了20个差异表达的蛋白质点,其中MALDI-TOF-MS鉴定了16个,ESI-Q-TOFMS/MS鉴定了4个。对这些初步鉴定的差异蛋白质进行功能分析,发现一些与细胞代谢、转录调控相关的蛋白质。结论:建立了稳定高表达LCRG1基因的Hep-2/LCRG1和载体对照组Hep-2/pcDNA3.1(+)细胞系的双向凝胶电泳图谱,应用质谱技术识别并鉴定出一些与LCRG1抑瘤作用相关的差异表达蛋白质,为进一步研究LCRG1作用的分子机制提供新的线索。
- 章晓鹏肖志强陈主初李萃李建玲余艳辉欧阳咏梅冯雪萍张鹏飞
- 关键词：喉肿瘤HEP-2细胞比较蛋白质组双向凝胶电泳差异表达蛋白
- 肺鳞癌患者和健康人血清的差异蛋白质组学研究被引量：6
- 2007年
- 目的:比较肺鳞癌患者和健康人血清蛋白质组的差异,为筛选肺鳞癌血清分子标志物提供依据。方法:以5例健康人和5例I期肺鳞癌患者的血清为样本,采用15%的聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离血清蛋白质,Bandleader凝胶图像分析软件识别两种血清样本差异的蛋白质条带,电喷雾-四极杆-串联质谱(ESI-Q-TOFMS/MS)鉴定差异蛋白质条带中的蛋白质。Western印迹检测差异蛋白质结合珠蛋白-2(haptoglobin-2,HP-2)在肺鳞癌患者和健康人血清中的表达。结果:建立了健康人和肺鳞癌患者血清样品的一维凝胶电泳图谱,图像分析识别了4条差异蛋白质条带,质谱鉴定出29种非冗余的血清蛋白质。Western印迹证实了HP-2在肺鳞癌患者和健康人血清中的差异表达。结论:29种血清差异蛋白质为筛选肺鳞癌的血清分子标志物提供了实验依据。
- 聂赣娟李茂玉张鹏飞易红李萃段朝军陈主初肖志强
- 关键词：血清分子标志物质谱
- 肿瘤:一种蛋白质组病被引量：2
- 2010年
- 恶性肿瘤的发生是一个涉及多因素、多基因的多阶段病理过程.以往的研究主要集中在基因组和转录组分析.随着人类基因组计划的完成,肿瘤研究开始进入"后基因组时代",肿瘤蛋白质组学应运而生.蛋白质作为基因功能的主要执行者,一方面在肿瘤发生发展过程中扮演重要角色,另一方面在很大程度上决定正常细胞和肿瘤细胞之间的差异(如异型性、恶性特征等).本文提出,肿瘤是一种蛋白质组病,并根据肿瘤比较蛋白质组、表达蛋白质组、功能蛋白质组和结构蛋白质组研究进展,从肿瘤发生发展过程中蛋白质(组)表达水平及状态、蛋白质翻译后修饰、蛋白质相互作用及网络调控等三个方面进行阐述.该观点的提出,将为肿瘤发病机制的研究开辟新的领域,为肿瘤的诊断(如生物标志物筛选)和筛选(如药物新靶标)提供新的思路,具有重要的科学意义和临床应用价值.
- 李国庆肖哲锋刘健平李萃李峰陈主初
- 关键词：肿瘤蛋白质表达谱蛋白质相互作用
- 小细胞肺癌细胞系NCI-H446蛋白质表达谱的建立被引量：22
- 2004年
- 背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳技术(IPG-DALT)分离NCI-H446细胞总蛋白,凝胶银染显色,ImageMaster2D图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶平均蛋白质点数为1506±74,匹配点数为1412±56,匹配率达93.4%,三块胶蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是(0.96±0.27)mm,在SDS-PAGE方向偏差是(1.24±0.41)mm。胶内酶解-肽质指纹图分析鉴定了58个蛋白质,其中有原癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:建立了小细胞肺癌细胞系NCI-H446双向电泳参考图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。
- 李茂玉肖志强李萃吴晓英冯雪萍易红李建玲陈主初陈平梁宋平
- 关键词：NCI癌细胞系蛋白质表达谱双向凝胶电泳固相PH梯度MALDI-TOF
- 应用激光捕获显微切割技术纯化的鼻咽癌蛋白质表达谱的建立被引量：4
- 2009年
- 目的:建立鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究奠定基础。方法:应用激光捕获显微切割(laser capture microdissection,LCM)技术从NPC组织纯化NPC细胞,应用二维凝胶电泳(2-DE)分离LCM纯化NPC细胞的蛋白质,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质,利用生物信息学资源构建NPC的2-DE蛋白质组数据库。结果:建立了NPC蛋白质2-DE参考图谱,2-DE图谱共显示(1312±30)个蛋白质点,共鉴定了427个蛋白质点,包括241个非冗余蛋白质,并构建了NPC的2-DE蛋白质组数据库,这些数据可从本实验室网站(http://www.xyproteomics.org)上进行查询。结论:首次建立了LCM纯化NPC细胞2-DE蛋白质表达谱,为NPC蛋白质组学研究提供了重要的信息和资料。
- 彭芳汤参娥李茂玉李萃程爱兰李峰张鹏飞李美香肖志强陈主初
- 关键词：鼻咽癌蛋白质表达谱激光捕获显微切割二维凝胶电泳质谱
- 生物质谱在基因组学研究中的应用被引量：1
- 2005年
- 综述生物质谱用于分析核糖核酸的应用进展。概述电喷雾电离质谱(ESI-MS)和基质辅助激光解吸电离质谱(MALDI-MS)的原理及它们在核酸分析中的应用。总结质谱用于单核苷酸多态性分型分析(SNPgenotyping);对短的串联重复序列(STR)的分析;对寡核苷酸片断的序列分析等三个方面的研究成果。提出质谱用于基因组学研究存在的问题,并展望生物质谱未来的发展方向。
- 吴晶纪建国
- 关键词：基因组学生物质谱核糖核酸电喷雾电离质谱
- 人肺鳞癌组织的血清蛋白质组学的比较分析被引量：13
- 2005年
- 采用以肿瘤免疫学与蛋白质组学(proteomics)研究技术有机地结合为基础的血清蛋白质组学研究体系(serologicproteomeanalysis ,SERPA)筛选肺癌分子标志物.对10例人肺鳞癌组织,应用双向凝胶电泳(two dimensionalelectrophoresis ,2 DE)技术对同一肺鳞癌组织的细胞总蛋白同时进行电泳后获得3张相同的凝胶,其中一块2 DE凝胶经银染显色作为平行胶,其余两块2 DE凝胶经电转膜将凝胶中的蛋白质转至硝酸纤维素(NC)膜上,然后分别与肺癌患者的自身血清以及正常对照血清进行Western印迹分析,获取Western印迹反应图谱.经计算机图像分析识别差异反应的蛋白质,然后与平行胶比较找出相应的差异反应蛋白质点.获得了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常对照血清的Western印迹反应图谱;图像分析共识别36±8个差异反应的蛋白质;在平行胶上找到了匹配的差异反应蛋白质点.对2 0个差异蛋白质点进行了肽质指纹图分析,鉴定出14个与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关的肺鳞癌相关抗原.通过血清蛋白质组技术对肺鳞癌组织进行的研究,建立了分辨率较高的人肺鳞癌组织与患者的自身血清以及正常血清的Western印迹反应图谱,成功鉴定14个肺鳞癌相关抗原,为进一步筛选用于肺鳞癌诊断。
- 李萃肖志强章晓鹏陈主初吴晓英冯雪萍张鹏飞李建玲易红梁宋平
- 关键词：人肺鳞癌血清蛋白质组双向凝胶电泳MALDI-TOF-MS
- 筛选喉癌相关基因LCRG1的有效沉寂序列
- 2008年
- 目的:拟采用RNA干扰技术筛选有效的针对LCRG1基因的打靶序列。方法:首先采用PCR定点突变技术改造pSuper载体,而后利用该改造后的载体构建针对LCRG1基因的5对打靶序列的真核表达载体。将构建的重组pSuper362,398,432,789,903表达载体和pSuper空白载体分别转染He-la细胞,经抗性药物筛选获得抗性细胞克隆和池克隆;通过RT-PCR及荧光定量PCR鉴定阳性克隆,进行平板克隆集落形成试验,以检测打靶序列沉寂LCRG1基因mRNA表达水平的效果。结果:应用PCR定点突变技术改造的pSuper载体,可被BglⅡ酶切;利用RT-PCR和荧光定量PCR检测各重组载体转染细胞池克隆LCRG1mRNA的表达发现,362组,398组,432组的基因均能封闭内源性LCRG1基因表达,尤以362组为显著;鉴定362组筛选的各个抗性克隆,发现A2和A5克隆的LCRG1mRNA表达水平明显降低。平板克隆实验结果提示362组的A2,A5和池克隆的细胞增殖能力明显强于载体和空白对照组(P<0.05)。结论:成功改建了pSuper真核表达载体;362siRNA相对其他siRNA具有较好的打靶效果,这对于应用RNAi方法研究LCRG1基因的功能和其作用分子机制具有重要的指导意义。
- 段朝军蒋铁斌李萃章晓鹏李茂玉肖志强汤参娥易红陈主初
- 关键词：RNAI
- 环氧化酶2基因异常表达与大肠癌转移的关系被引量：10
- 2006年
- 目的研究环氧化酶2在人大肠癌细胞系及大肠癌组织中的异常表达与意义。方法培养不同转移能力的人大肠癌细胞系SW480和SW620细胞,收集50例大肠癌石蜡组织,50例淋巴结转移性大肠癌石蜡组织;分别用免疫组织化学、Real-timePCR的方法研究环氧化酶2在不同转移能力人大肠癌细胞系及原发人大肠癌组织和大肠淋巴结转移组织中的表达。结果环氧化酶2蛋白在SW480和SW620细胞株中均阳性表达;环氧化酶2mRNA在SW620比SW480细胞中表达增高,表达量的平均倍比关系为2.268。环氧化酶2蛋白在淋巴结转移癌组的异常表达高于原发大肠癌石蜡组织,相关性具有统计学意义(P<0.05)。结论环氧化酶2异常表达可能与大肠癌淋巴结转移相关。
- 李祖国刘腾飞谢卫兵周军余力丁彦青
- 关键词：环氧化酶2大肠癌
