四川省教育厅青年基金(10ZB095)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：成都医学院贵阳医学院更多>>
- 发文基金：四川省教育厅青年基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗胱抑素C鸡卵黄IgY抗体的制备及鉴定
- 2013年
- 目的:制备高效价、高特异性的抗人胱抑素C鸡卵黄IgY抗体,并对其基本特性进行分析和鉴定。方法:以人胱抑素C为抗原免疫产蛋的罗曼鸡,采用水稀释-盐析法提取及纯化IgY抗体,采用蛋白质定量、SDS-PAGE、West ern印迹和ELISA法对IgY抗体进行分析和鉴定。结果:免疫后14 d即可从鸡冠血中检测出抗胱抑素C的特异性抗体,抗体效价在28 d达最高峰(1∶32 000),并可维持2个月以上;收集高效价时的免疫鸡蛋,制备鸡卵黄抗体IgY;还原性SDS-PAGE显示抗体IgY为相对分子质量分别为65×103和21×103的2条带,抗体纯度可达92%,得率为每个鸡蛋36.5 mg,抗体检出敏感度为15.63 ng/mL;Western印迹证明该抗体具有高度特异性。结论:制备了抗胱抑素C的高效价、高特异性IgY抗体。
- 傅龙章李敏惠潘克俭邹珂珂杨菌李艳超黄杰叶启迪马玲玲杨平
- 关键词：IGY抗体胱抑素C
- 适于Pythium sp.GY1938菌株蛋白质组学研究的总蛋白快速制备方法
- 2012年
- 为建立一种以灭蚊真菌Pythium sp.GY1938菌丝体为原材料的快速制备总蛋白的方法,分别采用7种方法对菌丝体进行破壁处理,于镜下观察比较破壁的效果,再通过SDS-PAGE蛋白质电泳和考马斯亮蓝染色分析,比较各种方法对细胞破壁后释放蛋白质效果的差异。结果显示,以石英沙作为助磨剂的液氮研磨法制备总蛋白效果最佳,蛋白显带最多,也最清晰;该方法还兼具快速、简便、经济等优点,是该真菌菌丝体蛋白制备的首选方法,为其后续蛋白质组学研究奠定基础。
- 余琳黄杰傅龙章宋丽萍李敏惠杨平
- 关键词：总蛋白
- 丝状真菌Pythium sp.GY1938菌株蛋白图谱染色方法的比较及优化被引量：2
- 2011年
- 目的探索制备灭蚊丝状真菌Pythiumsp.GY1938菌株菌丝体可溶性蛋白图谱的最佳染色方案。方法采用不同的破壁方法制备Pythiumsp.GY1938菌丝体可溶性蛋白,并通过SDS-PAGE进行蛋白质电泳分离,进一步采用考马斯亮蓝R-250染色法、Vorum银染法、EMBL银染法、Blum银染法4种染色方案分别进行凝胶染色,对不同染色方案的染色效果进行分析和比较。结果对于Pythiumsp.GY1938菌丝体可溶性蛋白样品中的中、高分子质量蛋白(≥44ku),考马斯亮蓝R-250的染色效果较好,且简单、快捷;对于低分子质量(<44ku)的可溶性蛋白,Vorum银染法染色效果较好;Blum银染法和EMBL银染法的染色效果均不理想。结论考马斯亮蓝R-250染色法和Vorum银染法均可应用于Pythiumsp.GY1938菌丝体可溶性蛋白图谱的制备,前者适合对中、高分子质量蛋白染色,后者适合对低分子质量蛋白染色。
- 杨平钟剑雷帆余琳杨思思李敏惠
- 关键词：考马斯亮蓝染色银染
- 胱抑素C的IgG-和IgY-ELISA检测体系的建立与评价被引量：2
- 2012年
- 目的建立适用于检测人胱抑素C(Cystatin C)的IgG与IgY双抗体夹心ELISA检测体系。方法以人Cystatin C作为抗原免疫产蛋的罗曼鸡和新西兰兔,纯化抗Cystatin C的鸡抗体IgY和兔抗体IgG,并分别建立三种ELISA夹心检测体系,I:捕捉抗体IgG+检测抗体IgY+抗鸡IgY酶标抗体;Ⅱ:捕捉抗体IgG+检测抗体IgY+兔F(ab')2抗鸡酶标抗体;Ⅲ:捕捉抗体IgY+检测抗体IgG+抗兔IgG酶标抗体。通过比较Cystatin C的最低检测浓度和阴性对照的OD值评价三种夹心法的灵敏度和特异性。结果体系I的Cystatin C最低检测浓度为7.5ng/mL(阴性对照OD值为0.737),体系Ⅱ的Cystatin C最低检测浓度为13ng/mL(阴性对照OD值为0.313),体系Ⅲ的Cystatin C最低检测浓度为10ng/mL(阴性对照OD值为0.31)。结论成功建立了Cystatin C的双抗体夹心ELISA检测体系,体系I的灵敏度最高但其特异性差,体系Ⅱ和Ⅲ的检测灵敏度和特异性均较好,可以用于Cystatin C的检测。
- 蒋洪娇李敏惠邹强王琦吴永琴吴啟洪邓未刘雯雯杨艳玲代爽杨平
- 关键词：IGY抗体IGG抗体胱抑素C酶联免疫吸附试验
- 用SDS-PAGE和Vorum银染法比较真菌菌丝体破壁效果被引量：2
- 2011年
- 目的:研究不同处理方法对丝状真菌Pythium sp.GY1938菌丝体破壁效果的差异。方法:采用7种方法对真菌菌丝体进行破壁处理,将制备的胞内可溶蛋白质样品通过SDS-PAGE和Vorum法银染处理,比较不同破壁方法处理后蛋白质释放效果的优劣。结果:方法VI(石英砂、液氮、研磨)的破壁效果最好,蛋白质的分离效率和提取质量最高。结论:方法VI适合于丝状真菌Pythium sp.GY1938蛋白组学研究中目的蛋白的提取。
- 李敏惠潘克俭宋丽萍钟文英邹珂珂杨平
- 关键词：丝状真菌PYTHIUM破壁银染
- 五种破壁方法提取贵阳腐霉Pythiumguiyangense总RNA效果的比较被引量：2
- 2011年
- 为了探索提取贵阳腐霉Pythiumguiyangense菌株总RNA简便而有效的方法，我们分别采用石英沙研磨、超声波破碎、液氮研磨、液氮加石英沙研磨和溶菌酶消化5种方法破碎真菌细胞壁，再用市售RNAsimpletotal RNAkit试剂盒提取总RNA，最后通过对提取物进行琼脂糖凝胶电泳定性、紫外比色定量及PCR检测来评价各种破壁方法的优弊。结果显示液氮加石英沙研磨破壁法提取的真菌总RNA在5种方法中效率最高，OD260／OD280=2．093±0．264，RNA浓度为（0．134±0．021）μg／μL，RNA制备效率为（26．76±4．10）μg／g菌丝体，并且该方法操作简便，重复性最好，是制备P．guiyangense菌株总RNA的首选破壁方法。
- 杨平陈慧娟钟文英邓未黄杰李敏惠
- 关键词：破壁总RNA
- 一种适于简并PCR的Pythium sp.GY1938基因组DNA制备方法被引量：6
- 2012年
- 目的探索适用于Pythiumsp.GY1938菌株简并PCR的基因组DNA模板制备方案。方法采用微波法、石英沙法、氯化苄法、CTAB法、尿素法提取DNA,并通过特异PCR和简并PCR评价各种方案的优弊。结果 5种方法制备的DNA含量差异无统计学意义(F=2.355,P>0.05);DNA制备效率相近;特异性PCR结果一致,但氯化苄法制备的DNA经简并PCR扩增出的条带较多,目的条带更清晰。结论 5种方法均适于特异性PCR所需DNA模板的制备,但氯化苄法更适于Pythiumsp.GY1938菌株简并PCR模板DNA的制备。
- 杨平黄杰余琳邓未傅龙章李敏惠
- 关键词：真菌基因组简并
- 灭蚊真菌Pythium sp.GY1938“菌丝体-1/4KPYG_2凝胶剂”的剂型研制与应用被引量：1
- 2012年
- 目的探索灭蚊真菌Pythiumsp.GY1938菌株凝胶剂剂型的制备方案。方法根据蚊虫的变态发育特点和Pythiumsp.GY1938菌株的生物学特性,结合保藏、运输和使用的便捷性,以含海藻糖抗逆保护剂的1/2KPYG2定型固体培养基为载体、以菌丝体为活性物质,加工制成"菌丝体-1/4KPYG2凝胶剂"新剂型,在实验室和模拟野外环境下观察其灭蚊效果。结果在实验室和模拟野外环境,每100ml水体使用2块1.51.5×1.0cm3凝胶剂,7d致倦库蚊幼虫致死率均可达到28%。4～8℃条件下凝胶剂品相稳定,储存6个月药效无明显变化。结论 Pythiumsp.GY1938菌株"菌丝体-1/4KPYG2凝胶剂"具有杀灭蚊幼虫作用。该凝胶剂生产工艺简单,独立包装,贮存方便,使用时不需要专用器械,拆开包装袋直接投放或捏碎后投入水体中,不污染环境,具有较好的应用前景。
- 李敏惠潘克俭苏晓庆杨平
- 关键词：菌丝体凝胶剂型
