国家自然科学基金(30900155)
- 作品数：8 被引量：11H指数：2
- 相关作者：严兴荣杨艳红许春丽丁向彬谢鑫更多>>
- 相关机构：西北大学第四军医大学唐都医院天津农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省教育厅规划基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 不同交配时间对小鼠胚胎收集和发育的影响被引量：1
- 2012年
- 【目的】探索不同交配时间对小鼠胚胎收集和胚胎发育的影响,为小鼠的超排研究提供参考。【方法】对小鼠进行超数排卵,分别于注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)后9,10,11,12,13,14和15h,在输卵管膨大部收集卵母细胞,研究排卵情况;将超排雌鼠与雄鼠合笼,分别于合笼后2,4,6,8,10和12h观察小鼠是否见阴道栓,研究小鼠交配时间;为了控制小鼠的交配时间,将超排雌鼠分别于注射hCG后0,2,4,6,8,10,12,14,16和18h与雄鼠合笼,每个时间点合笼后2h观察交配情况,于注射hCG后98h从子宫角收集囊胚,统计胚胎收集率,观察胚胎发育情况。【结果】小鼠排卵主要集中于注射hCG后12～14h,交配时间主要在注射hCG后的前6h。人为控制交配时间发现,注射hCG后4,6,8,10和12h的交配率均较高,较高的胚胎收集率出现在注射hCG后8,10和12h;囊胚发育率在注射hCG后4h(56.0%)和8h(54.5%)较高;扩张囊胚发育率在注射hCG后12h(68.2%)和16h(58.0%)显著高于其他时间点(P<0.05)。【结论】交配时间影响小鼠交配成功率、胚胎收集率和胚胎发育;超数排卵后12h交配可提高小鼠的胚胎收集率和胚胎发育率。
- 田静赵刚钟刚毅郭建鑫谢鑫崔继红杨艳红李立文陈富林严兴荣
- 关键词：小鼠超数排卵交配时间胚胎发育
- 羚牛骨髓间充质干细胞的分离培养与鉴定
- 2022年
- 分离鉴定羚牛骨髓间充质干细胞,为开展羚牛细胞治疗与体细胞核移植的深入研究提供有效载体。分离培养来源于羚牛骨髓的间充质干细胞;通过染色体G显带技术进行核型分析;利用流式细胞技术检测细胞表面标记物;通过定向诱导培养探究细胞的分化潜能。结果表明,羚牛骨髓间充质干细胞能够维持正常核型,对间充质干细胞特异性表面标记CD105、CD73、CD90、CD166、CD44呈阳性,对CD14(单核细胞和巨噬细胞标记物),CD19(b细胞标记物),CD34(造血干细胞标记物),CD45(泛白细胞标记物)和HLA-DR均呈阴性,具有成脂、成骨与成软骨多向分化潜能。表明成功分离羚牛骨髓间充质干细胞并对其表面抗原与分化潜能进行鉴定,为羚牛生物多样性保护与内源物种间充质干细胞的应用研究奠定基础。
- 贾佳郭含星王娟娟罗伟强耿阳阳高梦溪王君建潘广林贾康胜严兴荣
- 关键词：羚牛间充质干细胞核型分析诱导分化
- 应用凝集素芯片检测系统性红斑狼疮红细胞膜表面糖链变化被引量：5
- 2014年
- 应用凝集素芯片检测系统性红斑狼疮患者红细胞膜表面糖链表达类型。分别取患者和健康人血液作为实验组和对照组,用低渗液处理红细胞使其破碎,离心制备血影,利用凝集素芯片特异亲和性捕获血影表面糖链,激光扫描仪检测凝集素信号,根据凝集素特异性得到细胞膜表面糖链表达变化。结果表明实验组在凝集素位点ECA、WFA、SBA、UEA-Ⅰ呈现阳性(p<0.01)且在ConA、PTL-Ⅰ、DBA等凝集素位点信号值上调,在STL、SJA、LCA、GSL-Ⅰ、LEL凝集素位点信号值下调(p<0.05)。根据凝集素亲和特异性显示,系统性红斑狼疮患者红细胞膜表面Gal、GlcNAc、Fuc等糖链结构表达均增加。为系统性红斑狼疮的研究增添理论依据。
- 梁少楠李宇恒许春丽姚伟楠于汉杰严兴荣
- 关键词：系统性红斑狼疮红细胞
- 小鼠孤雌激活来源囊胚线粒体基因表达
- 2015年
- 为了探索孤雌胚胎和正常体外受精胚胎线粒体基因表达的差异,本研究用ICR小鼠孤雌和正常受精胚胎为研究对象。孤雌和正常受精的胚胎分别发育至2-细胞期和囊胚期的比率,用q PCR方法检测囊胚线粒体基因Cox2、tom40、tim23和cytochrome C,以及多能性囊胚质量相关基因Oct4、Sox2和nanog的表达水平。结果发现孤雌激活不影响小鼠卵母细胞的卵裂(95%vs 97.6%,p>0.05),但影响胚胎发育到囊胚(39.4%vs 75%,p<0.05),孤雌囊胚细胞线粒体Cyto C和Cox2显著高于体外受精组(p<0.05);正常受精囊胚多能性基因Oct4和nanog表达水平显著高于孤雌组(p<0.05),但Sox2表达水平显著低于孤雌组(p<0.05)。本研究表明孤雌激活可影响胚胎线粒体和细胞基因表达水平。
- 许春丽许婉璐霍莉慧李晶晶王爽郝俊冯秀亮严兴荣
- 关键词：孤雌胚胎线粒体小鼠体外受精
- 秦川牛胎儿成纤维细胞表达A-FABP基因条件的优化和鉴定
- 2012年
- 为了向转基因牛提供过表达A-FABP的供核细胞,本研究从NCBI中查找牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(Albert,A-FABP)基因全长cDNA序列,通过简并密码子的方法设计特异性引物。A-FABP基因通过公司合成,与pEGFP-C1载体连接形成重组质粒pEGFP-C1-A-FABP。分离获得3株秦川牛胎儿成纤维细胞(battle embryonic fibroblast,BEF),分别用DMEM和D/F12进行培养,随机选择一株细胞优化外源基因转染条件。用优化的条件转染这3株细胞,800μg/mLG-418进行筛选,挑取单克隆,获得稳定转染A-FABP的细胞株。PCR和RT-PCR检测细胞A-FABP基因的表达。结果显示,D/F12比DMEM能促进细胞的增殖(p<0.05);细胞在高糖DMEM的转染效率显著高于D/F12(p<0.05);2株胎儿成纤维细胞(1雄1雌)获得5株稳定表达的细胞,其中4株来源于雌性细胞。结果证明细胞培养基、性别和细胞系影响牛A-FABP转基因效率。
- 严兴荣杨艳红丁向彬葛秀国郭宏谢鑫崔继红李立文陈富林
- 关键词：胎儿成纤维细胞A-FABP转基因
- 两种激活处理促进小鼠孤雌胚胎原核形成被引量：4
- 2010年
- 不同人工处理方法激活哺乳动物卵母细胞的机理相似,但其激活效率存在差异。本研究以昆明(KM)、129/Sv×KM F1和C3H×KM F1雌鼠来源的卵母细胞为对象,利用氯化锶(SrCl2,Sr2+)联合细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)(Sr2++CB)和离子霉素(ionomycin,Ion)联合6-二甲胺基嘌呤(6-dimethylaminopurine,6-DMAP)(Ion+6-DMAP)两种激活方法处理下对比分析不同品系小鼠卵母细胞的激活效率,并以卵母细胞原核形成率、原核数量和孤雌胚胎体外发育来评价两种激活剂的激活效率。研究结果表明,Ion+6-DMAP激活卵的1原核比率显著高于2原核(p<0.05),Sr2++CB激活卵的2原核比率显著高于1原核(p<0.05);KM、129/Sv×KM F1和C3H×KM F1各组孤雌胚胎卵裂率和激活率没有显著差异(P>0.05),但129/Sv×KM F1和C3H×KM F1囊胚发育率显著高于KM组(p<0.05)。3种小鼠品系的卵母细胞用Sr2++CB处理的孤雌胚胎发育率显著高于Ion+6-DMAP。结果证明,Sr2++CB处理小鼠卵母细胞的激活效率明显优于Ion+6-DMAP;129/Sv×KM F1和C3H×KM F1的孤雌胚胎体外发育率显著高于KM小鼠,为研究小鼠遗传背景影响孤雌胚胎发育的机理提供参考。
- 严兴荣陈冬梅华进联雷安民杨艳红都慧聪窦忠英
- 关键词：小鼠卵母细胞孤雌激活原核胚胎发育
- 三种方法对细胞周期诱导效率的比较
- 2014年
- 比较两种处理方法对细胞周期调控的影响,本研究用饥饿法,胸腺嘧啶处理法和饥饿法结合胸腺嘧啶法诱导胎儿成纤维细胞进入G1/G0期。诱导两周后,收集3种方法来源的细胞用流式细胞技术、细胞活力检测、real-time PCR和核型分析检查细胞诱导效率、细胞活力、成纤维细胞特异基因的表达水平和核型情况。结果表明,实验组细胞G1/G0期比率显著高于对照组(p<0.05);实验组中,饥饿联合药物诱导法比饥饿法和药物法稍高,但未达显著水准。实验组与对照组细胞核型正常,均为40条染色体,性染色体为XX。细胞活力和显示,对照组比试验组稍高,但差异不显著(p>0.05);FGF4、FGF2及Sox2的基因表达水平在各组间差异不显著(p>0.05)。这些结果表明,实验组3种方法对细胞特性没有显著影响,饥饿结合药物诱导可适当提高细胞诱导效率,为相关研究提供参考。
- 冯秀亮刘淑娟段艳萍王爽郝俊严兴荣
- 关键词：胎儿成纤维细胞细胞周期
- 慢病毒介导的牛生长素基因对小鼠胚胎发育的研究被引量：1
- 2013年
- 生长素是促进动物生长发育所必需的激素之一。本研究探索牛生长激素(bovine growth hormone,bGH)对小鼠胚胎发育的影响。将牛生长激素基因连接到慢病毒载体(Lenti-CMV-EF1-eGFP)形成Lenti-CMV-bGH/EF1-eGFP,重组病毒经293T细胞包装后直接感染小鼠胚胎和G1胚胎干细胞(embryonicstemcells,ESCs)。阳性表达的胚胎经体外培养,发育到囊胚期的胚胎进行胚胎移植,为直接感染组。感染的小鼠G1胚胎干细胞注射到正常昆明白小鼠囊胚制作嵌合胚胎后进行胚胎移植,为嵌合体组。分别解剖3只妊娠15d的直接感染组和嵌合组的小鼠,观察受体小鼠妊娠情况。结果发现,在1-细胞期感染胚胎,感染效率可达(74.7±6.7)%,在2-细胞期连续感染,感染效率为(79.4±5.7)%,两组感染方法的效率没有显著差异(P>0.05)。1次和2次感染胚胎发育和正常胚胎之间没有显著差异((87.6±3.5)%,(85.4±6.3)%VS(83.0±5.5)%,P>0.05)。所有移植的胚胎没有发育到足月,解剖妊娠15d的小鼠,发现直接感染组没有妊娠,嵌合组胎盘发育正常,但胚胎部分已经死亡和被吸收。因此,本研究证明bGH对小鼠附着前胚胎发育没有影响,但影响小鼠胚胎附着后的发育。这为后期bGH的研究提供参考。
- 严兴荣丁向彬葛秀国郭宏张军林李永亮杨艳红
- 关键词：胚胎发育转基因生长素
