国家自然科学基金(30500141)
- 作品数：8 被引量：25H指数：4
- 相关作者：程天民宗兆文李楠冉新泽粟永萍更多>>
- 相关机构：第三军医大学中国人民解放军第三军医大学第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 真皮多能干细胞移植后向全身照射大鼠骨髓优势分布的机制研究被引量：4
- 2006年
- 目的探讨静脉输注的真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)向全身照射(totalbodyirradia tion,TBI)大鼠骨髓优势分布的机制。方法RT PCR和荧光免疫化学检测骨髓中基质细胞源性细胞因子(stromal derived factor1,SDF1)的表达水平,以及dMSCs中SDF1的受体CXCR4的表达水平。Transwell培养体系中,观察SDF1对dM SCs的趋化作用。结果TBI大鼠骨髓SDF1的表达水平明显高于正常大鼠,同时dMSCs表达CXCR4。体外趋化实验发现,SDF1对dMSCs有很强的趋化作用,而使用SDF1的中和性抗体后,TBI大鼠骨髓提取液对dMSCs的趋化作用明显下降(P<0.05)。结论TBI大鼠骨髓局部上调表达的SDF1在移植dMSCs向骨髓的优势分布中有重要作用。
- 宗兆文程天民粟永萍李楠董世武艾国平冉新泽徐辉
- 关键词：真皮多能干细胞全身照射骨髓
- CXCR4基因转染促进移植dMSCs向放创复合伤大鼠创面分布的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探讨CXCR4腺病毒表达载体（Adv—CXCR4）转染的真皮多能干细胞（dMSCs）移植后可否更多地向放创复合伤大鼠创面分布，并加速创面愈合。方法3H—TdR标记Adv—CXCR4转染的dMSCs（A组）、绿色荧光蛋白腺病毒表达载体转染的dMSCs（B组）、未转染病毒载体的dMSCs（C组）后移植到放创复合伤大鼠体内，液闪法测量创面中dMSCs的含量。用生物医学图像分析仪测量伤后创面残留面积。结果从伤后5d起，A组创面中dMSCs的含量约占移植细胞总量的1．95％～3．85％，明显高于B组和C组（占移植细胞总量的1．07％～1．86％）。从伤后12d开始，A组创面残留面积明显小于B组和C组。A组创面愈合时间比B组和C组提前约1．5d。结论Adv—CXCR4转染的dMSCs在移植后可更多地分布到放创复合伤大鼠的创面，且能更快地促进创面愈合。
- 宗兆文程天民冉新泽粟永萍董世武李楠王军平艾国平李政
- 关键词：CXCR4基因转染真皮多能干细胞复合伤
- 移植dMSCs向放创复合伤创面优势分布的机制研究被引量：2
- 2006年
- 目的探讨静脉输注的真皮多能干细胞(dermal multipotent stemcells,dMSCs)向放创复合伤大鼠创面优势分布的机制。方法RT-PCR和免疫组织化学检测创面中基质细胞源性细胞因子(stromal-dereivedfactor-1,SDF-1)的表达水平,以及dMSCs中SDF-1受体CXCR4的表达水平。Transwell培养体系中,观察SDF-1对dMSCs的趋化作用。结果放创复合伤大鼠创面SDF-1的表达水平明显高于正常大鼠,同时dMSCs表达CXCR4。体外趋化实验发现,SDF-1对dMSCs有很强的趋化作用,而使用SDF-1的中和性抗体后,放创复合伤大鼠伤口液对dMSCs的趋化作用明显下降(P<0·05)。结论放创复合伤大鼠创面上调表达的SDF-1在移植dMSCs向创面的优势分布中有重要作用。
- 宗兆文程天民冉新泽李楠董世武艾国平粟永萍
- 关键词：真皮多能干细胞放创复合伤
- CXCR4腺病毒表达载体的构建及其在真皮多能干细胞中的表达被引量：4
- 2006年
- 目的构建大鼠CXCR4的腺病毒表达载体,并观察其转染真皮多能干细胞(dermalmultipotentstemcells,dMSCs)后的表达情况。方法扩增含有CXCR4的全长cDNA,然后亚克隆至穿梭质粒pAdTrackCMV中,再与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组产生含有CXCR4的骨架质粒(pAdEasy/CXCR4)。将验证正确的pAdEasy/CXCR4用PacⅠ酶切后转染293细胞,从而包装出CXCR4的腺病毒表达载体(AdvCXCR4)。用AdvCXCR4转染dMSCs,并采用RTPCR、免疫荧光细胞化学和荧光激活细胞分类计数的方法检测其表达情况。结果PCR、酶切和测序结果证明,成功地将CXCR4全长cDNA克隆到骨架质粒中,并包装出腺病毒表达载体。同时,AdvCXCR4转染dMSCs后可有效地增加dMSCs中CXCR4的表达。结论CXCR4的腺病毒表达载体的成功构建和其在dMSCs中的表达,为研究CXCR4在干细胞移植中的应用奠定基础。
- 宗兆文程天民粟永萍李楠董世武艾国平冉新泽王军平徐辉
- 关键词：CXCR4腺病毒表达载体真皮多能干细胞转染
- 磁性颗粒在干细胞移植示踪中的应用被引量：1
- 2007年
- 干细胞是近年医学研究的热点之一．并且显示了良好的应用前景。移植干细胞在体内的迁移、分布、存活、增殖和分化等生物学变化是影响其疗效的重要因素。其中．干细胞在体内的迁移和分布是其发挥作用的第一步，加强对其监测对于我们理解移植干细胞在体内的生物学变化、进而提高于细胞疗法的疗放具有重要意义。
- 宗兆文程天民
- 关键词：干细胞移植磁性颗粒移植干细胞示踪细胞疗法生物学
- 绿色荧光蛋白标记在干细胞移植中的应用被引量：7
- 2006年
- 目的:了解绿色荧光蛋白标记在干细胞移植研究中应用的进展情况。资料来源:应用计算机检索Medline1990-01/2005-11期间的相关文章,检索词为“greenfluorescentprotein,stemcell,labeling”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索重庆维普数据库、清华同方数据库和万方数据库1990-01/2005-11期间的相关文章,检索词为“绿色荧光蛋白,干细胞,标记”,并限定文章语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,并查看每篇文献后的引文。纳入标准:文章所述内容应与绿色荧光蛋白标记在干细胞移植中的应用研究相关。排除标准:明显缺乏随机对照的实验研究、重复研究或综述类文献。资料提炼:共收集到123篇相关文献,27篇文献符合纳入标准,排除的96篇文献为内容陈旧或重复。符合纳入标准的27篇文献中,关于绿色荧光蛋白的结构和功能7篇,关于绿色荧光蛋白标记干细胞的方式及其在干细胞分化、定量、示踪中的应用17篇,关于绿色荧光蛋白在细胞标记的毒副作用3篇。资料综合:绿色荧光蛋白作为标记物时主要优点有:①不需加任何底物,监测方便。②分子量较小,与目的基因融合后,对目的基因的结构功能影响小。③不影响或很少影响细胞的正常功能。④绿色荧光蛋白荧光表达稳定,可耐受一定的理化处理。绿色荧光蛋白被广泛地应用于干细胞移植的研究中。目前,常用的标记干细胞的方式有3种:质粒载体转染、病毒载体转染和绿色荧光蛋白转基因动物。结合使用定量聚合酶链反应、激光共聚焦、荧光激活细胞分类计数和激光捕获显微切割技术等技术方法,可有效地监测移植干细胞在体内的分布和分化情况,并可定量分析其在组织中的含量。结论:绿色荧光蛋白标记具有检测方便、表达稳定和不影响细胞功能等优点,从而被广泛地用于示踪移植干细胞在体内的分布、含量�
- 宗兆文程天民
- 关键词：干细胞绿色荧光蛋白质类
- 增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体构建及其在移植干细胞示踪和定量中的初步应用被引量：8
- 2006年
- 目的:构建增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体,并观察其在移植真皮多能干细胞示踪和定量中的应用。方法:实验于2004-08/2005-10在解放军第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所完成。①细菌内同源重组构建含增强型绿色荧光蛋白基因的骨架质粒,PacⅠ酶切后转染293细胞,包装出增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体。增强型绿色荧光蛋白腺病毒表达载体鉴定正确后,收集293细胞反复冻融离心收集上清,粗制病毒液感染293细胞,扩增重组病毒载体。②选取新生1d雄性大鼠1只作为供体,剪取皮肤进行真皮多能干细胞的分离培养鉴定。将第7代粗制病毒液加入生长状态良好的真皮多能干细胞,转染后5d观察绿色荧光蛋白阳性细胞数量,计数绿色荧光蛋白阳性细胞百分比。③选取60只成年Wistar大鼠作为受体,随机分为全身照射组和正常对照组,各30只。全身照射组大鼠接受总剂量为5Gy的γ射线照射,正常对照组不接受放射。两组大鼠均接受尾静脉移植的1mL增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体转染的真皮多能干细胞悬液。两组分别于照射后5d,1,2,3,4周荧光显微镜下观察真皮多能干细胞在骨髓组织中的分布情况,每个时相点6只大鼠;同时定量分析骨髓中真皮多能干细胞的含量。结果:作为受体的60只大鼠全部进入结果分析。成功地构建了增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体,并发现其可转染和标记真皮多能干细胞。增强型绿色荧光蛋白标记的真皮多能干细胞在移植后4周内在大鼠体内的分布可被有效地检测,荧光激活细胞分类结果显示全身照射组大鼠骨髓中真皮多能干细胞的含量从移植后5d～4周均明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。结论:增强型绿色荧光蛋白腺病毒载体可有效地标记真皮多能干细胞,并能很好地示踪和定量分析移植到大鼠体内真皮多能干细胞的分布情况。
- 宗兆文程天民粟永萍李楠董世武艾国平冉新泽徐辉
- 关键词：荧光抗体技术多能干细胞
- CXCR4基因转染对大鼠真皮多能干细胞生物学性状的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:观察CXCR4基因转染对大鼠真皮多能干细胞(dermal multipotent stem cells,dMSCs)分化、增殖、迁移等生物学性状的影响。方法:分别采用荧光激活细胞分类法、绘制细胞生长曲线法、细胞培养分化诱导法和Transwell小室培养体系中化学趋化法,观察CXCR4基因转染后,CXCR4阳性细胞数目以及dMSCs增殖、分化和迁移能力的变化情况。结果:CXCR4基因转染后,CXCR4阳性dMSCs数目明显高于对照组(P<0.05),dMSCs增殖能力略高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);从Transwell小室上层迁移到下层的dMSCs明显高于对照组(P<0.05)。同时,转染CXCR4基因的dMSCs可向成脂、成骨、成肌细胞方向分化。结论:CXCR4基因转染后,dMSCs中CXCR4表达增加,并有效地增强其迁移能力,且未影响dMSCs的增殖和分化能力。
- 宗兆文程天民冉新泽粟永萍李楠董世武史春梦
- 关键词：多能干细胞真皮CXCR4基因转染
