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榆树黄化病植原体的分子检测与鉴定被引量：14: 2008年; 利用植原体16S rRNA基因的通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2对山东泰山上发生的榆树(Ulmus par-vifolia)黄化病感病植株总DNA进行巢式PCR扩增,得到了约1.2 kb的特异性片段,从分子水平证实了榆树黄化病的病原(EY-China)为植原体。将扩增到的片段测序,并进行一致性和系统进化树分析。结果表明,该分离物属于植原体榆树黄化组(CandidatusPhytoplasma ulmi),与该组成员16S rRNA序列的一致性均在98.2%以上,其中与16SrⅤ-B亚组中的纸桑丛枝(Paper mulberry witches’-broom)和枣疯病(Jujube witches’-broom)植原体一致性最高,达到99.4%,在系统进化树中与该亚组成员聚类到同一个分支,说明该分离物属于植原体16SrⅤ-B亚组。本研究首次对在中国引致榆树黄化病的植原体进行了分子检测,并通过核酸序列分析将其鉴定到亚组水平。; 朱天生潘一展崔廷涛高瑞李向东朱水芳; 关键词：植原体 RRNA基因巢式PCR 系统进化分析

荆条丛枝病植原体的分子检测及鉴定: 2009年; Chaste tree(Vitex negundo var.heterophylla)witches’-broom was a new disease found in Mountain Taishan and the neighboring region.Phytoplasmal cells could be easily observed in the phloem sieve elements of diseased plants under electron microscope.The 16S rRNA gene of phytoplasma associated with this disease(CTWB)was amplified with nested-PCR with the universal primer pairs R16mF2/R16mR1 and R16F2n/R16R2.An amplified fragment of ca.1.2 kb was sequenced and subjected to identity and phylogenetic analyses.Phytoplasma CTWB shared identities of more than 99.0% with members of Aster yellows group(16SrI)in 16S rRNA genes.It had the highest identity of 99.8% with phytoplasmas associated with Maize bushy stunt(subgroup 16SrI-B),and clustered into a common branch with phytoplasmas of the subgroup in the phylogenetic tree constructed with 16S rRNA genes.These results indicated that CTWB belonged to subgroup B of Candidatus Phytoplasma asteris(16SrI-B).; 崔廷涛潘一展高瑞邵云华李向东时呈奎赵文军朱水芳; 关键词：荆条植原体丛枝病 RRNA序列巢式PCR

兰花褐斑病菌实时荧光PCR检测被引量：7: 2010年; 兰花褐斑病菌(Acidovorax avenaesubsp.cattleyae)是兰花上一种重要进境检疫性有害生物,可通过植株和种子远距离传播,其传染性强,对兰花危害性大。根据核糖体ITS序列设计了TaqMan-MGB探针并建立了实时荧光PCR检测方法。该方法能够特异性检测兰花褐斑病菌,所有供试的目标菌株检测结果均为阳性,而其它28个对照菌株(含同属内其它种及avenae种下其它亚种)均为阴性。利用该方法从发病兰花植株总DNA中检测到该病菌。本方法灵敏度高,检测极限达9×10-9μg DNA,操作方便快速,结果可靠,适合于口岸兰花的进出境检疫及兰花种苗健康质量控制。; 丁翠珍赵文军寸东义陈红运朱水芳; 关键词：TAQMAN-MGB探针实时荧光PCR

长针科线虫2种传毒种类和3种非传毒种类分子鉴定和亲缘分析被引量：1: 2009年; 裂尾剑线虫Xiphinema diversicaudatum和逸去长针线虫Longidorus elongatus是植物病毒的重要传毒线虫，具有重要的经济意义，被我国列入进境植物检疫性有害生物名单．通过对上述2种检疫性线虫和中国云南不同地区3种长针科线虫共7个种群rDNA的内转录间隔区（ITS）进行PCR扩增和测序，分别获得1400～2100bpPCR产物片段，通过与Genbank上5种8种群的ITS区序列进行分析，结果发现裂尾剑线虫与包括逸去长针线虫等在内的其他4种线虫的同源性仅有55％，逸去长针线虫与3种长针科非传毒线虫的同源性仅为56％．同种不同种群间的rDNA—ITS的基因变异分别从0～10％不等．; 杜宇段禄华周剑和万忠曹云华李斌陈光勇寸东义; 关键词：分子鉴定

赤羽病胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：12: 2009年; 采用双抗体夹心免疫层析技术,研制了适合田间快速试验的赤羽病胶体金免疫层析试纸条。纯化赤羽病毒单克隆抗体3A和2C,用柠檬酸钠还原法制备胶体金标记纯化后的单抗作为标记抗体。分别将羊抗鼠IgG和纯化后的单抗包被于NC膜上作为质控带和检测带,以检测被检样品中的赤羽病毒(akabane virus,AKAV)。试验结果表明,所研制的试纸条敏感性较高(为10TCID50),特异性较强,还具有快速、稳定、简便等特点,适合基层动物防疫检疫部门尤其是进出境动物检疫机构进行赤羽病大批量、田间快速初筛,对赤羽病快速诊断具有重要的意义。; 杨素陈博文沙才华廖秀云秦爱建王继华彭运平刘晓云; 关键词：赤羽病胶体金免疫层析法

中华鳖虹彩病毒单克隆抗体的制备及其抗原表位的初步分析被引量：5: 2009年; 以纯化的中华鳖虹彩病毒为抗原免疫Balb／C小鼠，取免疫鼠脾细胞经杂交融合获得了8个能稳定分泌抗中华鳖虹彩病毒特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单克隆抗体亚级份分析结果表明，Mab2A4属IgA，Mab8E1是IgG2a，其他的6株单抗Mab1D3、Mab2H1、Mab3A1、MaMB5、Mab5E1和Mab6F2均为IgG1。酶联免疫吸附剂测定（ELISA）分析表明，8株单抗均能特异性地识别中华鳖虹彩病毒，与EPC、CO、FHM等宿主细胞不产生交叉反应，腹水抗体的ELISA效价在10^5～10^6。IFA分析表明，8株单抗中仅Mab5E1没有免疫荧光反应特性，其余7株单抗均能对染毒病灶产生特异性的荧光染色。中和试验结果证实8株单抗均没有中和病毒的特性。应用Western—blotting进行中华鳖虹彩病毒的抗原表位初步分析，结果显示：Mab1D3和Mab2A4分别识别分子量为84ku和35ku中华鳖虹彩病毒结构蛋白，Mab3A1能够同时识别分子量分别为14ku和16ku的两条多肽，说明这3株单抗结合位点是非构象依赖性抗原决定簇，其余单抗不具备Western—blotting反应特性。这些结果提示上述单抗对中华鳖虹彩病毒抗原特异、灵敏，可用于中华鳖虹彩病毒的检测和结构蛋白分析。; 朱春华刘荭刘晓东杨金先郑在予林天龙; 关键词：中华鳖虹彩病毒单克隆抗体抗原

番茄环斑病毒单克隆抗体的制备及检测被引量：5: 2009年; 将纯化的番茄环斑病毒(Tomato ringspot virus,ToRSV)制剂免疫BALB/c小鼠,末次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了2株分泌ToRSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为1H8、1D4。用间接ELISA方法对所获得的2个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG1亚类。间接ELISA效价测定结果1H8为1:105,1D4为1:106。TAS-ELISA实验结果表明此2株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的从德国引进的番茄环斑病毒分离物、从美国ATCC引进的番茄环斑病毒分离物PV-100、PV-174、PV-239发生特异性反应,而不与同属其它3种病毒:烟草环斑病毒(Tobacco ringspot virus,TRSV)、南芥菜花叶病毒(Arabis mo-saic virus,ArMV)、马铃薯黑环斑病毒(Potato black ringspot virus,PBRSV)发生反应。; 李桂芬马洁魏梅生朱水芳; 关键词：番茄环斑病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株

中华鳖虹彩病毒的纯化及分析被引量：1: 2009年; 为制备高纯度的中华鳖虹彩病毒，分析其免疫相关抗原，采用3种方法纯化中华鳖虹彩病毒粒子并对其结构蛋白进行了初步分析。结果表明：差速离心法回收的样品中病毒纯度差、密度低，在电镜下不易观察到病毒粒子；病毒培养物经冻融、磁力搅拌、超声处理后，进行差速离心可提高病毒的回收率，但超声处理易造成病毒结构破坏；病毒培养物经离心浓缩、匀浆、磁力搅拌处理，再通过差速和蔗糖密度梯度二步离心纯化后，在蔗糖密度为30％～40％、40％～50％和50％～60％之间分层的样品中均可观察到病毒粒子，其中，蔗糖密度为50％～60％之间回收的病毒粒子纯度最高，且结构完好。SDS—PAGE分析表明，纯化病毒至少含20条蛋白条带，分子量为50kDa的核衣壳蛋白是中华鳖虹彩病毒的高丰度蛋白。Western-blot分析结果证实大多数蛋白条带能被鼠抗中华鳖虹彩病毒高免血清特异性地识别。; 朱春华刘荭杨金先刘晓东郑在予林天龙; 关键词：虹彩病毒中华鳖纯化

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“十一五”国家科技支撑计划(2006BAK10B06)

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