浙江省教育厅科研计划项目(20060727)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
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- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省医药卫生科学研究基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- SDH全基因的拼接及原核表达
- 2009年
- 目的:构建闭联异松树脂醇二脂脱氢酶(SDH)全基因片段与原核表达质粒载体,在大肠杆菌中进行表达。方法:将SDH3′端和5′端序列通过PCR方法拼接获得全基因后,然后将其插入到相应的原核表达质粒载体PGEX-6p-1中,形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导其表达蛋白,再用SDS-PAGE电泳检测表达结果。结果:成功的将SDH基因片段拼接成全基因,并将其构建入原核表达载体PGEX-6p-1中。测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变。经1.5mmol/LIPTG诱导后获得与预测大小(29.253kDa)完全一致的目的蛋白即闭联异松树脂醇二脂脱氢酶蛋白,并测得在37℃、250r/min的实验条件下的最佳诱导时间为4h。结论:成功获得了重组质粒并在大肠杆菌中较好的诱导表达得到了闭联异松树脂醇二脂脱氢酶的蛋白。
- 涂继方汪旭珍徐莉
- 关键词：原核表达原核载体
- 八角莲内闭联异松树脂醇二酯脱氢酶全基因的克隆及分析被引量：4
- 2009年
- 目的:通过末端快速扩增(RACE)技术获得临安地区八角莲内闭联异松树脂醇二酯脱氢酶基因的全序列,探讨八角莲内异松树脂醇二酯脱氢酶基因的序列特点。方法:以浙江省临安地区八角莲为材料,根据同源序列法分别进行3′末端RACE和5′末端RACE,获得闭联异松树脂醇二酯脱氢酶基因的全序列。结果:以八角莲属的八角莲为材料获得闭联异松树脂醇二酯脱氢酶全基因序列为国际首次报道。此cDNA全长序列991bp,5′端非翻译区42bp,3′端非翻译区112bp。开放阅读框编码278个氨基酸,分子量为29253.3道尔顿,等电点为6.328。提交GeneBank序列号为EU573789。RT-PCR初步分析发现该酶的mRNA产物在茎内含量丰富。氨基酸序列比对表明闭联异松树脂醇二酯脱氢酶的物种差异性较大。结论:获得八角莲内闭联异松树脂醇二酯脱氢酶全基因。
- 徐莉丁志山周云凯陶雪芬
- 关键词：八角莲逆转录PCR
