国家自然科学基金(30771931)
- 作品数：16 被引量：33H指数：3
- 相关作者：胡四海余敏君张愉快戴志兵陈敏更多>>
- 相关机构：南华大学永州职业技术学院中国疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖南省教育厅科研基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 淋球菌外膜蛋白的研究进展被引量：2
- 2009年
- 淋病奈瑟菌是人类性传播疾病淋病的病原菌，简称淋球菌。主要引起泌尿生殖系统粘膜的急性或慢性化脓性感染。近年研究发现，淋球菌外膜蛋白在致病过程及宿主免疫反应中起着重要作用。淋球菌的感染率相当高，并可导致反复感染，这与其逃避宿主防御系统的机制较完善有关。菌体表面主要抗原成分外膜蛋白抗原等，
- 陈敏胡四海
- 关键词：淋球菌外膜蛋白致病作用免疫学功能
- 粘膜佐剂LTB优化的抗淋病ltB-nspA融合基因疫苗鼻饲免疫效果研究被引量：2
- 2010年
- 目的:用真核重组质粒pcDNA3.1(-)/ltB-nspA鼻饲免疫小鼠,探索粘膜佐剂LTB辅佐NspA所诱发的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答水平。方法:对真核重组质粒行PCR及双酶切鉴定后大量制备,经鼻饲途径免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA法检测血清中NspA特异性IgG抗体水平及小鼠生殖道灌洗液中NspA特异性sIgA抗体水平;MTT法检测脾淋巴细胞增殖水平,ELISA双抗体夹心法检测脾淋巴细胞培养上清IFN-γ含量。结果:融合基因pcDNA3.1(-)/ltB-nspA组小鼠生殖道灌洗液中sIgA(A450:0.316±0.045)明显高于pcDNA3.1(-)/nspA单基因组(P<0.05)和其它对照组(P<0.01);小鼠血清中IgG(A450:0.643±0.156)水平、脾淋巴细胞刺激指数(SI:1.65±0.32)和脾淋巴细胞诱生的IFN-γ(160.56±25.67pg/ml)水平均明显高于pcDNA3.1(-)/ltB、空质粒pcDNA3.1(-)和PBS对照组(P<0.01)。结论:pcDNA3.1(-)/ltB-nspA融合基因疫苗经鼻饲免疫,能够诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫应答和细胞免疫应答;粘膜佐剂LTB可辅佐NspA诱导小鼠产生更高水平的生殖道粘膜免疫。
- 王健胡四海戴志兵胡耀华张愉快余敏君
- 关键词：淋球菌融合基因疫苗免疫效果
- 黏膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位优化的淋病奈瑟菌孔洞蛋白B核酸疫苗的构建及其诱导小鼠的免疫应答被引量：1
- 2011年
- 目的分析黏膜佐剂大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位（LTB）辅佐的淋病奈瑟菌孔洞蛋白B（PorB）核酸疫苗诱导小鼠的免疫应答水平。方法PCR法扩增目的基因porB、ltB、ltB-porB，分别构建3种相应的pcDNA3．1（一）真核重组表达载体，经PCR、双酶切及基因测序鉴定后转染Hela细胞，用细胞免疫荧光法鉴定质粒的蛋白表达。将核酸疫苗经鼻饲免疫雌性BALB／c小鼠，检测体液免疫及细胞免疫应答水平，同时用免疫组织化学法检测porB、ltB、ltB-porB基因在小鼠鼻黏膜内的表达。组间均数比较采用方差分析。结果构建的真核重组质粒均能在Hela细胞内及小鼠鼻黏膜组织内表达。核酸疫苗免疫组小鼠的生殖道灌洗液PorB特异性sIgA及血清porB特异性IgG水平明显高于对照组（P〈0.01；P〈0.05），且ltB-porB融合基因组特异性sIgA明显高于porB组（P〈0.05）；pcDNA3.1（一）／porB组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ、IL-4和脾淋巴细胞刺激指数（SI）分别为（170.04±23.89）pg／mL、（114.68±14.27）pg／mL和1.68士0.19，pcDNA3.1（一）／ltB-porB组分别为（161.42±27.50）pg／mL、（124.16±19.04）pg／mL和1.73±0.28，均高于对照组pcDNA3.1（一）和PBS，差异均有统计学意义（P〈O.01；P〈0.05），高于对照组pcDNA3.1（一）／ttB，差异均有统计学意义（均P〈0.05），但两核酸疫苗免疫组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论所构建的核酸疫苗分别在Hela细胞及小鼠鼻黏膜组织内获得了表达，经黏膜途径免疫能诱导小鼠产生较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫应答，尤其是黏膜免疫应答；证实黏膜佐剂LTB可辅佐PorB诱导小鼠产生高水平的生殖道黏膜免疫。
- 陈敏胡四海王玉峰戴志兵张愉快余敏君李忠玉朱翠明陆春雪
- 关键词：奈瑟球菌淋病佐剂大肠埃希菌肠毒素类疫苗
- 淋病奈瑟菌感染动物模型研究进展
- 2009年
- 淋病奈瑟菌容易感染人,却难以感染所有常用实验动物,因此长期以来一直缺少合适的实验动物模型,严重限制了淋病奈瑟菌的研究进展。雌激素有一定的抗炎作用,利用雌激素处理小鼠,建立淋病奈瑟菌实验感染模型,有助于淋病奈瑟菌感染机制的研究、疫苗的开发和研制、以及抗淋病药物的筛选与评价。
- 王玉峰胡四海
- 关键词：淋病奈瑟菌淋病小鼠动物模型
- 淋病奈瑟菌nspA与ltB融合基因的表达及其免疫活性被引量：1
- 2010年
- 目的表达LTB-NspA重组融合蛋白,鼻饲免疫雌性Balb/c小鼠,分析重组融合蛋白的免疫活性,为研制抗淋球菌蛋白疫苗提供实验依据。方法转化并鉴定pET30a/ltB-nspA原核重组质粒后,在E.coliBL21中表达重组融合蛋白。鼻饲途径免疫雌性Balb/c小鼠,检测NspA特异性体液免疫和细胞免疫水平。结果 LTB-NspA融合蛋白组生殖道黏膜产生的NspA特异性sIgA水平和血清IgG水平随免疫时间呈上升趋势,第6周sIgAA450nm达0.689,明显高于NspA组和LTB、蛋白溶解液(solution buffer)对照组(P<0.01);第6周血清中产生的特异性IgGA450nm值达0.734,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01);LTB-NspA组脾淋巴细胞刺激指数(SI)为1.63,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01);LTB-NspA组小鼠脾淋巴细胞经特异性抗原NspA刺激后,培养上清中IFN-γ和IL-4含量明显升高,分别达142.23pg/ml和86.14pg/ml,明显高于LTB和Solution Buffer对照组(P<0.01)。但LTB-NspA与NspA两组间血清IgG水平、SI、IFN-γ和IL-4水平差异不显著(P>0.05)。结论 LTB-NspA重组蛋白诱导小鼠产生了较高水平的特异性体液免疫和细胞免疫;首次证实黏膜佐剂LTB可辅佐NspA诱导小鼠产生高水平的生殖道黏膜免疫。
- 胡耀华胡四海戴志兵王健黄智勇张愉快余敏君陆春雪
- 关键词：淋病奈瑟菌重组蛋白免疫活性
- 淋病奈瑟球菌脂寡糖的研究进展
- 2011年
- 脂寡糖是淋病奈瑟菌的致病因素之一,它可以介导淋球菌粘附和侵入宿主细胞,并在淋球菌逃避宿主免疫防御机制中发挥重要作用。近年来,国内外学者对脂寡糖的研究取得了不少进展,这为淋病疫苗的研究提供了一个新的方向。
- 闫晓亮胡四海
- 关键词：脂寡糖淋病奈瑟菌淋病疫苗
- 淋球菌孔蛋白PorB致病机制研究进展
- 2011年
- 奈瑟菌属孔蛋白作为免疫佐剂在B细胞和其他抗原提呈细胞活化中发挥作用。PorB能镶嵌在宿主细胞膜和线粒体膜上,引起线粒体一系列变化,导致宿主细胞发生病变。PorB通过TLR2转导其效应,可与补体抑制剂C4b结合蛋白结合,拮抗补体介导的杀伤作用。PorB活化细胞的转录因子NF-κB,可增加宿主细胞抗凋亡因子的表达。淋球菌PorB作为主要外膜蛋白,其致病性一直都是国内外研究的热点。
- 张小娟胡四海
- 关键词：线粒体膜电位补体抗凋亡因子
- 壳聚糖纳米粒介导基因转染的影响因素及改性修饰被引量：2
- 2010年
- 壳聚糖带正电荷,可与带负电荷的DNA结合形成纳米级的多聚复合物(纳米粒)。作为一种基因载体,壳聚糖对DNA具有很好的结合和保护作用,对生物体无毒、相容性好,被广泛应用于基因转染及基因预防和治疗中。壳聚糖的主要缺点是转染效率较低,但对其进行改性或修饰后,有可能提高其转染效率。
- 李艳红胡四海
- 关键词：壳聚糖纳米粒基因转染影响因素
- 淋球菌nspA和大肠杆菌ltB融合基因的构建、表达及鉴定被引量：9
- 2008年
- 通过基因工程的方法构建奈瑟氏淋球菌表面蛋白A(Neisseria gonorrhoeae surface protein A,nspA)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(B subunit of Escherichia coli heat-labile enterotoxin,ltB)融合基因的原核表达载体,对其进行表达与鉴定,为后续融合蛋白LTB-NspA的生物活性分析及其作为淋球菌粘膜免疫疫苗的研究奠定基础。用PCR法从标准菌株分别扩增出nspA、ltB基因,用重组PCR法通过接头将ltB与nspA融合,将其插入pEG30a中,转入BL21中表达。经测序、SDS-PAGE和Western blot分析,证实成功构建了ltB-nspA融合基因的原核表达载体,并在BL21中表达。ltB-nspA融合基因的成功表达,为进一步研究其生物活性及淋球菌粘膜免疫疫苗的研究奠定了一定基础。
- 秦勇胡四海张愉快余敏君唐莹刘刚
- 关键词：克隆基因融合
- 淋病奈瑟菌感染动物实验模型的探讨被引量：1
- 2011年
- 淋病奈瑟菌是人类淋病的病原菌,人类是自然界淋病奈瑟菌的唯一宿主,人类极易被感染,可却难以感染常用的实验动物,而淋病奈瑟菌的研究必须做大量的动物实验。由于合适的实验动物的缺乏,淋病奈瑟菌的研究受到严重阻碍。雌激素有抗炎作用,能使阴道黏膜增厚并且促使上皮细胞增生。如果将雌鼠用雌激素处理,然后用其建立奈瑟淋球菌实验动物感染模型,相信对今后研究奈瑟淋球菌将起到积极的作用,这其中包括奈瑟淋球菌的感染机制,疫苗的开发以及抗菌药物的使用。本文对此作一综述。
- 王健胡四海
- 关键词：淋病奈瑟菌生殖道感染动物模型
