国家重点实验室开放基金(GREKF09-05)
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
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- 发文基金：国家重点实验室开放基金国家自然科学基金“十二五”国家科技计划农村领域更多>>
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- 基于蛋白质相互作用网络挖掘物种内的功能相似蛋白质被引量：2
- 2011年
- 本文基于图论(graph theory)思想挖掘功能相似蛋白质。将蛋白质相互作用网络(protein-protein interaction network,PPI)转化为图,使用1-hop方法把相互作用网络拆分为子图。应用最短路径法,依次把拆分得到的每一个子图与所有子图进行两两比对,寻找最优比对结果,挖掘物种内有相似功能的蛋白质。应用该方法对构建的人类蛋白质相互作用网络进行比对,共挖掘到1081对功能相似蛋白质。该方法的特点是数据量偏小、较可靠。计算结果中还出现了一些序列相似度较低、用序列比对的方法难以挖掘到的功能相似蛋白质。通过对结果的分析可以发现,趋同进化和同源有时很难区分。本实验的全部数据、程序和结果可在网站http://bina.biositemap.com上查询。
- 宋宝兴桑青王芬张德礼
- 关键词：同源蛋白质相互作用网络
- 猪新基因BCL-G_L的克隆与原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：3
- 2010年
- 目的:克隆猪的BCL-GL基因,进行原核表达,并制备出其多克隆抗体。方法:以提交NCBI的人的BCL-GL基因序列为种子序列,对猪的ESTs数据库进行比对拼接,得到contig序列。根据这个序列设计克隆引物,以猪脾脏总RNA反转录得到的cDNA为模板,PCR得到克隆序列。克隆序列经测序验证后,连接到原核表达载体pET-32a,构建成重组表达载体pET32a-BCL-GL,然后将重组载体转化到大肠杆菌BL21进行诱导表达。经His-标签融合蛋白纯化试剂盒纯化得到纯化蛋白制备豚鼠多克隆抗体。结果:抗体ELISA效价为1∶800,Western blot反应特异性良好。结论:成功地克隆了猪BCL-GL基因,并进行了原核表达,制备了特异性豚鼠抗BCL-G血清,为进一步研究其功能奠定基础。
- 蒋朋飞曹金锁柳超赵海平张德礼
- 关键词：克隆原核表达多克隆抗体
- 猪XCL1蛋白纯化、多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定
- 2011年
- 目的:纯化获得体外表达猪his-XCL1的重组蛋白,制备多克隆抗体并研究其对淋巴细胞增殖的影响。方法:首先,采用HiTrapTM Chelating HP纯化方法,SDS-PAGE检测重组蛋白纯化情况,Western blot检测重组蛋白表达情况。再免疫动物制备多抗血清,双向琼脂扩散试验、间接ELISA检测多克隆抗体效价,MTT法检测猪XCL1对淋巴细胞增殖的影响。结果:当结合缓冲液的浓度为40 mmol/L,洗脱缓冲液500 mmol/L时,SDS-PAGE电泳可观察到有单一目的条带,Western blot显示重组蛋白成功表达,双向琼脂扩散试验证实抗原抗体的结合比为1∶8,间接ELISA检测到抗体水平达到1∶12 800。重组蛋白XCL1能促进淋巴细胞的增殖,而此实验制备的多克隆抗体可以阻断这种效应。结论:体外表达的重组蛋白具有生物活性,制备的多克隆抗体为研究XCL1在猪体中的功能提供科技资料。
- 吴耀丽温俊歌孙岩张德礼
- 关键词：多克隆抗体间接ELISAMTT
