天津市自然科学基金(013802511)
- 作品数：15 被引量：126H指数：8
- 相关作者：李明春邢来君卜云萍胡国武王广科更多>>
- 相关机构：南开大学天津中医学院云南大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 根癌农杆菌介导深黄被孢霉△^6-脂肪酸脱氢酶基因转化大豆及其转基因植株再生被引量：6
- 2003年
- 采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功的将深黄被孢霉△6 脂肪酸脱氢酶基因导入大豆。从发芽 5～ 7d的大豆无菌苗切取子叶节外植体 ,经农杆菌浸染和共培养后 ,在含 50mg L卡那霉素的选择培养基上培养 2～ 4周后 ,从子叶节处诱导出抗性不定芽。将不定芽转移到伸长培养基上 ,4～ 6周后长至 2～ 3cm高的再生苗。再将再生苗切下转入生根培养基 ,2～ 6周生根。生根后的再生植株经逐步锻炼移入花盆中 ,部分移栽成活的T0 植株能正常开花结荚。从T0 植株上收获T1种子 ,按株系种植。T0 和T1代经PCR检测和DNA分子杂交分析 。
- 卜云萍王广科胡国武孙红妍任勇李航李明春邢来君
- 关键词：大豆△^6-脂肪酸脱氢酶基因转基因植株
- 深黄被孢霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因在大豆中的表达被引量：29
- 2004年
- 为在传统的油料作物大豆中产生γ 亚麻酸 ,从深黄被孢霉中克隆的Δ6 脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI12 1连接 ,构建了重组质粒pBMICL6 ,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功的将该基因导入到栽培大豆吉林 35、吉林 4 3、吉林 4 7、绥农 10、绥农 14和黑农 37等品种中 ,获得一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析 ,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。Northern杂交结果表明该基因在转基因大豆的mRNA水平上获得表达。对转基因大豆种子进行脂肪酸成分分析 ,结果表明Δ6 脂肪酸脱氢酶基因获得表达 ,产生了γ 亚麻酸 ,其含量最高可达 2 7 0 6 7% ,这是国内外深黄被孢霉Δ6
- 李明春卜云萍王广科胡国武邢来君
- 关键词：△^6-脂肪酸脱氢酶基因大豆农杆菌介导深黄被孢霉
- Δ~6-脂肪酸脱氢酶对n-6和n-3途径中脂肪酸底物的偏好被引量：5
- 2004年
- 添加α 亚麻酸作为底物 ,经半乳糖诱导 ,在含有少根根霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的酿酒酵母总脂肪酸中检测到十八碳四烯酸的生成 ;同时添加亚油酸和α 亚麻酸时 ,检测到γ 亚麻酸和十八碳四烯酸生成 ,而且十八碳四烯酸的含量是γ 亚麻酸含量的 3 81倍 ,表明在酿酒酵母中少根根霉Δ6 脂肪酸脱氢酶不仅能催化α 亚麻酸生成十八碳四烯酸 ,而且偏好n 3途径中的底物α 亚麻酸。同样 ,在改变少根根霉Δ6 脂肪酸脱氢酶基因的转译起始密码子周边序列后所构建的转基因酵母中 ,也得到类似的结果 。
- 张琦李明春孙颖任勇孙红妍马海庭邢来君
- 关键词：少根根霉酿酒酵母Γ-亚麻酸偏好
- 高山被孢霉△~6-脂肪酸脱氢酶基因在大豆中的表达被引量：7
- 2004年
- 将从高山被孢霉中克隆的△6-脂肪酸脱氢酶基因与植物表达载体pBI121连接,构建了重组质粒pBMICL6,采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将该基因导入到栽培大豆吉林35、吉林43、吉林47、绥农10、绥农14和黑农37等品种中,获得了一批转基因植株。经PCR检测和Southern杂交分析,证明外源基因已导入并整合到大豆的基因组中。Northern杂交结果表明,该基因在转基因大豆的mRNA水平上获得表达。通过气相色谱(GC-MS)对大豆种子进行脂肪酸成分分析,发现转基因大豆产生了γ-亚麻酸,其含量最高可达25.165％。
- 卜云萍李明春胡国武邢来君
- 关键词：高山被孢霉△^6-脂肪酸脱氢酶大豆基因表达
- 利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列被引量：12
- 2006年
- 用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As3.2806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。
- 王德培孙伟李明春魏东盛张颖慧邢来君
- 以潮霉素B抗性为选择标记的深黄被孢霉原生质体转化被引量：18
- 2007年
- 利用亚硝基胍（MNNG）诱变方法筛选了一株深黄被孢霉潮霉素B敏感型菌株M6-22-4。采用PEG介导的方法,将含有E.coli潮霉素B抗性标记的PD4质粒转入敏感株M6-22-4原生质体,并在潮霉素B浓度为400μg/mL的选择培养基上筛选转化子,获得了1.6~2.8个转化子/μg质粒DNA的转化频率。稳定性实验表明,质粒线性化后所获得的转化子在PDA培养基上传代10代以后,转接到选择平板上有31.6%仍具有HmB抗性;随机挑选了3个转化子,通过PCR方法检测到潮霉素抗性基因的存在,Southern杂交发现,潮霉素抗性基因已经以1-2拷贝数整合到深黄被孢霉M6-22-4染色体上,这是深黄被孢霉转化系统的首次报道。
- 张学炜王笑梅李明春魏东盛陈雪邢来君
- 关键词：深黄被孢霉潮霉素抗性原生质体
- 少根根霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆和表达被引量：12
- 2004年
- 根据真菌Δ6 脂肪酸脱氢酶保守的氨基酸序列设计简并引物进行RT PCR ,获得一个 5 93bp的cDNA片段 ,再根据获得的部分序列设计基因特异性引物 ,通过cDNA末端扩增技术 (RACE)获得该cDNA的 3′和 5′序列 ,从而得到全长为 14 82bp的cDNA序列。序列分析结果表明 ,该序列具有一个长度为 1377bp、编码 4 5 8个氨基酸的开放阅读框 ,所编码蛋白质的大小为 5 2kD。与报道的Δ6 脂肪酸脱氢酶一样 ,推测的氨基酸序列具有膜整合脂肪酸脱氢酶特异性的 3个组氨酸保守区和疏水结构 ,在其氨基酸序列的N 末端具有类似于细胞色素b5的血红素结合区。该序列为一个新的编码Δ6 脂肪酸脱氢酶的基因 ,为了验证其功能 ,把开放阅读框序列RAD6亚克隆到表达载体 pYES2 0 ,构建重组表达载体pYRAD6 ,并转化到酿酒酵母的缺陷型菌株INVScl进行表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱 /质谱 (GC MS)分析表明 ,该序列在酿酒酵母中获得表达。所编码的酶具有Δ6 脂肪酸脱氢酶活性 ,能将外源性的底物亚油酸转化为γ 亚麻酸 ,γ 亚麻酸的含量占酵母总脂肪酸的 3 85 %。
- 张琦李明春孙颖马海庭任勇邢来君
- 关键词：少根根霉△^6-脂肪酸脱氢酶Γ-亚麻酸酿酒酵母
- Δ^(12)-脂肪酸脱氢酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：7
- 2004年
- 把高山被孢霉 (Mortierellaalpina)和深黄被孢霉 (Mortierellaisabellina)的Δ1 2 脂肪酸脱氢酶基因亚克隆到大肠杆菌表达载体pET2 1a中 ,获得重组表达载体pMACL1 2和pMI CL1 2 ,并用氯化钙方法将重组表达载体转化到大肠杆菌BL2 1 (DE3)中。筛选阳性克隆进行培养 ,然后分离其细胞膜蛋白 ,并构建体外表达体系 ,同时加入外源性底物油酸进行表达。经气相色谱 (GC)分析表明 ,分别有 1 7 87%和 1 7 60
- 李明春李航张琦张飚邢来君
- 关键词：亚油酸大肠杆菌被孢霉
- 雅致枝霉Δ~6-脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达被引量：9
- 2006年
- 根据真菌Δ6-脂肪酸脱氢酶基因保守的组氨酸Ⅱ区和Ⅲ区附近保守序列设计兼并引物进行RT-PCR,得到雅致枝霉(Thamnidium elegans)As3.2806Δ6-脂肪酸脱氢酶基因459bp部分cDNA序列,然后通过快速扩增cDNA末端技术(RACE)向两端延伸得到1504bp的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因全长cDNA序列。序列分析表明有一个1377bp、编码459个氨基酸的开放阅读框TED6。推测的氨基酸序列与已知其他真菌的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的氨基酸序列比对,具有3个组氨酸保守区、2个疏水区及N末端细胞色素b5融合区。将此编码区序列亚克隆到酿酒酵母缺陷型菌株INVSc1的表达载体pYES2.0中,构建表达载体pYTED6,并在酿酒酵母INVSc1中异源表达。通过气相色谱(GC)和气相色谱/质谱(GC-MS)分析表明,该序列在酿酒酵母中获得表达,产生γ-亚麻酸(GLA)的含量占酵母总脂肪酸的7.5%。证明此序列编码的蛋白能将外加的亚油酸转化为γ-亚麻酸,是一个新的有功能的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(GenBank,AY941161)。
- 王德培李明春魏东盛张颖慧邢来君孙伟
- 关键词：Γ-亚麻酸酿酒酵母
- 深黄被孢霉△~6-脂肪酸脱氢酶基因导入大豆被引量：13
- 2003年
- 采用农杆菌介导的大豆子叶节转化系统成功地将深黄被孢霉△6 -脂肪酸脱氢酶基因导入大豆。从发芽 5 - 7d的大豆无菌苗切取子叶节外植体 ,经农杆菌浸染和共培养后 ,在含 5 0mg L卡那霉素的选择培养基上培养 2 - 4w后 ,从子叶节处诱导出抗性不定芽。将不定芽转移到伸长培养基上 ,4 - 6w后长至 2 - 3cm高的再生苗。再将再生苗切下转入生根培养基 ,2 - 6w生根。生根后的再生植株经逐步锻炼移入花盆中 ,部分移栽成活的T0 植株能正常开花结荚。从T0 植株上收获T1 种子 ,按株系种植。T0 和T1 代经PCR检测和DNA分子杂交分析 。
- 卜云萍王广科胡国武孙红妍任勇李航李明春邢来君
- 关键词：深黄被孢霉大豆农杆菌介导法
