温州市科技计划项目(S2002A132)
- 作品数：10 被引量：19H指数：3
- 相关作者：杨德业黄晓燕张怀勤余祖善陈长曦更多>>
- 相关机构：温州医学院附属第一医院复旦大学上海医学院温州医学院更多>>
- 发文基金：温州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 高血压致病相关基因研究进展被引量：3
- 2006年
- 原发性高血压是是由遗传因素和环境因素共同作用而引起的多基因遗传性疾病,是导致脑卒中、冠心病、心功能不全、肾脏疾病等的主要因素。目前国内外研究者所涉及到的原发性高血压候选基因近150种,本文就血管紧张素Ⅱ,血管紧张素受体,肾素,激肽,G蛋白信号2调节基因及心钠素等候选基因的研究进展作一综述。
- 余祖善杨德业
- 关键词：原发性高血压基因
- 姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注后细胞凋亡及p53表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的 探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注后细胞凋亡及凋亡相关基因p53表达的影响。方法制作大鼠视网膜缺血再灌注模型，并随机分为假手术组（SH组）、缺血再灌注组（IR组）、姜黄素处理组（CU组）和对照组（SC组），分别于再灌注后2、6、24、72h和7d时观察大鼠视网膜和视网膜毛细血管细胞的凋亡情况，并检测视网膜Caspase-3酶的表达活性及p53基因的表达情况。结果各组模型均制作成功，细胞组织学检查可见CU组损伤明显轻于其他组。CU组视网膜和视网膜毛细血管的细胞凋亡数量均显著多于SH组（均P〈0.01），但显著少于IR组（P〈0．01）；CU组p53表达水平及Caspase-3酶活性均显著强于SH组（均P〈0.01），但显著弱于IR组（P〈0．01）。结论姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用，调控凋亡相关基因p53蛋白的表达可能是其作用机制之一。
- 王赛斌姬斌陈碧新张明英黄晓燕杨德业
- 关键词：姜黄素视网膜缺血再灌注细胞凋亡P53
- 新的高血压相关基因-Slc7a8的实验研究被引量：6
- 2007年
- 目的:探讨高血压致病相关基因。方法:提取13周龄SHR和WKY的2、3级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用含10000个基因大鼠表达谱芯片检测2组2、3级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,并用定量RT-PCR的方法排除假阳性候选基因。结果:芯片发现19个基因在SHR中上调,其中涉及分子伴侣、离子通道和小分子转运、生长因子、细胞信号转导的蛋白和核转录因子、脂蛋白等基因。用定量RT-PCR验证示Slc7a8基因的表达水平在SHR组中比WKY组上调9.3倍。结论:Slc7a8可能与高血压的形成有关,深入研究Slc7a8基因及其功能将为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。
- 洪承吕陈长曦杨德业余祖善张怀勤黄晓燕宋后燕
- 关键词：高血压基因
- 大鼠自发性高血压致病相关基因的初步筛选被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压大鼠(WKY)肠系膜动脉和肾脏组织中基因表达的差异。方法:提取成年SHR和WKY的二级肠系膜动脉和肾脏总RNA,利用高通量RNA阵列技术(RNA array)检测SHR和WKY二级肠系膜动脉和肾脏组织基因表达水平不同的基因,再用RT-PCR证实部分基因表达的改变。结果:芯片筛选出38条基因,其中上调基因19条,下调基因19条。经RT-PCR验证胰岛素样生长因子结合蛋白5和原肌凝蛋白6基因上调,锌指蛋白10和硬脂酰辅酶去饱和酶1基因下调。结论:筛选出的差异基因可能是高血压的相关基因,深入研究筛选出的相关基因及其功能,将为进一步探讨高血压病相关的致病基因打下良好的基础。
- 陈长曦余祖善杨德业洪承吕张怀勤黄晓燕林捷黄伟剑
- 关键词：高血压致病基因
- 大鼠FXYD5基因的克隆及重组腺病毒载体的构建
- 2008年
- 目的:克隆大鼠离子通道相关蛋白(FXYD5)基因全长cDNA,构建携带FXYD5基因的重组腺病毒载体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(SHR)中的功能作准备。方法:采用cDNA末端快速扩增的方法获得全长cDNA,并插入到载体pGEM-T Easy中测序分析。将FXYD5基因cDNA克隆至穿梭载体pAdTrack-CMV中,随后在BJ5183细菌中与骨架载体AdEasy-1同源重组。筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确后,重组载体磷酸钙-DNA共沉淀法转染AD293细胞,获得携带FXYD5基因的重组腺病毒。结果:大鼠FXYD5基因全长cDNA被成功地克隆;FXYD5重组腺病毒载体被成功地构建。结论:运用细菌内同源重组的方法可以在大肠杆菌中快速高效地构建腺病毒载体;FXYD5重组腺病毒载体的成功构建为探讨FXYD5的生物学功能奠定了基础。
- 李小旺方飞施翔翔黄晓燕张怀勤杨德业
- 关键词：腺病毒基因
- siRNA干扰SLC7a8对NRK-52E细胞摄取左旋多巴的影响被引量：1
- 2010年
- 目的:通过RNA干扰(RNAi)技术选择性下调高血压相关基因SLC7a8的表达,探讨对大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)摄取左旋多巴的影响。方法:设计并合成3个针对大鼠SLC7a8基因的特异性siRNA片段(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),以含非特异性编码序列的siRNA-con为对照。将上述3个片段及阴性对照通过阳离子脂质体法转染至NRK-52E内,通过流式细胞仪估算转染效率后经RT-PCR初步筛选高效率干扰片段,用Western blotting检测蛋白水平的干扰效率,采用紫外分光光度法检测空白对照组(blank)、siRNA-con转染组和SLC7a8基因特异性沉默组不同时点(6、12、24、36、48、60、72、120min)NRK-52E内左旋多巴的浓度。结果:流式细胞仪测定siRNA转染NRK-52E效率为94%,RT-PCR初步筛选结果显示siRNA-1、3干扰效率较高,Western blotting检测显示siRNA-3组在蛋白水平的干扰效率较高,而对照组siRNA-con与空白对照组(blank)的SLC7a8表达差异不明显。通过紫外分光光度法检测NRK-52E对左旋多巴的吸收结果显示干扰组不同时点(6、12、24、36、48、60、72、120min)细胞内左旋多巴浓度均低于siRNA-con转染组和空白对照组;对照组siRNA-con与空白对照组相比则无明显差异。结论:RNA干扰技术能选择性下调大鼠肾小管上皮细胞SLC7a8的表达水平;SLC7a8基因特异沉默后NRK-52E对左旋多巴的摄取在各个不同时点(6、12、24、36、48、60、72、120min)均降低。
- 张敏黄晓燕周希施翔翔黄芳张怀勤杨德业
- 关键词：RNA干扰肾小管上皮细胞左旋多巴
- HSP 70.2:新的高血压致病相关基因?被引量：1
- 2007年
- 目的探讨HSP70·2基因是否是新的高血压致病相关基因。方法从13周龄的自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压(WKY)大鼠的阻力血管(肠系膜动脉第二、三级分支)和肾脏组织中提取总RNA,与含10000个基因及EST片断的SBC-R-RC-100-13大鼠表达芯片进行杂交,找出差异表达的基因,并经RT-PCR和real-timeRT-PCR初步筛选出高血压新的相关基因。结果基因芯片在SHR组中发现19个上调基因,另外也发现19个基因表达下调,其中涉及细胞周期,直接参与代谢的酶,细胞信号转导及核转录因子等基因。RT-PCR和定量RT-PCR证实HSP70·2基因在SHR组中表达上调2·1倍(P<0·01)。结论HSP70·2基因可能和高血压相关,深入研究HSP70·2基因及其功能为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。
- 余祖善陈长曦杨德业洪承吕张怀勤黄晓燕
- 关键词：高血压致病基因
- 自发性高血压大鼠FXYD5基因表达的时空分布被引量：2
- 2009年
- 目的:研究大鼠FXYD5(FXYD domain-containingion transport regulator5)基因表达在自发性高血压大鼠(SHR)及正常血压大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)的时间与空间分布差异。方法:取4周、8周、13周及21周龄SHR的肾脏、肝脏、肠系膜二、三级动脉分支、大脑和心脏组织,以同周龄WKY作对照,采用Northern blotting方法分析FXYD5 mRNA表达丰度。结果:Northern blotting的结果显示:13周、21周龄SHR的肾脏组织FXYD5基因表达丰度较同周龄WKY低;在肺组织,除8周龄该基因的表达水平在SHR组略低于对照组外,其它周龄两组没有差别。结论:FXYD5基因在SHR中有着特异性的组织分布特点,并且在不同周龄的SHR,FXYD5基因在肾脏的表达水平不是恒定不变的,在时间上呈一钟形变化。提示FXYD5基因可能是一个高血压相关的基因,可能与高血压的发病有关。
- 方飞李小旺施翔翔黄晓燕龚永生张怀勤杨德业
- 关键词：基因自发性高血压大鼠基因表达
- 大鼠SLC7a8基因的克隆及真核表达载体的构建被引量：1
- 2011年
- 目的:克隆大鼠左旋氨基酸转运体(SLC7a8)基因cDNA的读码框(CDS),构建携带SLC7a8基因的重组真核表达载体,为进一步研究其在自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)中的功能作准备。方法:从非高血压大鼠(wistar-kyoto,WKY)肾脏组织提取总RNA,通过RT-PCR得到总cDNA,PCR法扩增,产物连接pGEM-T Easy载体测序分析正确后,再以PCR方法扩增,将其连接入真核表达质粒pcDNA3.1(+)。以PCR、双酶切和测序鉴定正确后,将重组载体pcDNA3.1(+)-SLC7a8用脂质体包裹转染大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),RT-PCR法及Western blotting法分别检测转染后SLC7a8 mRNA及蛋白表达水平。结果:成功克隆了大鼠SLC7a8基因cDNA,重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-SLC7a8构建成功,且证实转染后肾小管上皮细胞的SLC7a8 mRNA及蛋白表达均明显高于空白对照组(P<0.05)及空质粒组(P<0.05)。结论:成功克隆了SLC7a8基因,并构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-SLC7a8,能够在NRK-52E细胞中获得有效过表达,这为进一步探讨SLC7a8基因的生物学功能奠定了基础。
- 王本极黄晓燕林素周希戴晓春方俊旭杨德业
- 关键词：真核表达载体肾小管上皮细胞基因克隆
- 自发性高血压大鼠FXYD5基因的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的探讨自发性高血压大鼠新的高血压相关基因。方法从自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats,SHR)和正常血压大鼠(Wistar-Kyoto,WKY)阻力血管(肠系膜动脉第二、三级分支)和肾脏组织中提取总RNA,利用含10000个大鼠基因的芯片检测两组大鼠mRNA表达水平,找出差异表达的基因,并经RT-PCR和定量RT-PCR初步筛选出高血压新的相关基因。结果从基因芯片的检测结果发现在SHR组中19个基因表达下调,另外19个基因表达上调,其中涉及细胞周期,直接参与代谢的酶,细胞信号转导及核转录因子等基因。选择部分已知的、并可能有功能的代表基因用RT-PCR验证,结果发现FXYD5基因在SHR明显下调,定量RT-PCR验证示FXYD5基因的表达水平在SHR组比WKY组明显下调14.8倍(P<0.01)。结论从基因芯片的结果证明了SHR和WKY不同的遗传异质性。FXYD家族的FXYD5可能与高血压的形成有关,深入研究FXYD5基因及其功能为进一步了解高血压病的分子机制提供新的思路和线索。
- 陈长曦杨德业余祖善洪承吕张怀勤黄晓燕宋后燕
- 关键词：高血压致病基因
