国家教育部博士点基金(20090204110009)
- 作品数：1 被引量：5H指数：1
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- 猕猴桃GalUR表达与抗坏血酸积累的关系被引量：5
- 2011年
- 通过RT-PCR从美味猕猴桃(Actinidia deliciosa)果实中克隆了D-半乳糖醛酸还原酶(GalUR)全长cDNA序列,并分析其序列特征,进行原核表达,制备特异抗体,分析其mRNA及蛋白表达水平与果实发育过程及不同组织中抗坏血酸(AsA)合成和积累的关系。结果表明:克隆的GalURcDNA(GenBank登录号为GU339035)包含的最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为990bp,编码329个氨基酸残基,预测分子量为37kD,与报道的草莓等其他植物GalUR具有较高的相似性。构建的pET-32a(+)-GalUR载体在大肠杆菌BL21(E.coliBL21)中异源表达后,获得了主要以包涵体存在约58kD的融合蛋白GalUR-His(His约21kD)。以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GalUR蛋白发生特异反应。对猕猴桃可溶性蛋白杂交显示,猕猴桃体内GalUR蛋白的分子量约37kD。在猕猴桃不同组织和发育过程中,GalUR表达水平与AsA含量表现为高度一致,但前体饲喂发现,与L-半乳糖相比,D-半乳糖醛酸并不能有效促进猕猴桃AsA的合成。这些结果表明以单体形式存在的GalUR与猕猴桃AsA合成有着密切关系,但它可能并不是猕猴桃AsA积累的主要调控环节。
- 李明军刘军梁东郭春苗马锋旺
- 关键词：猕猴桃原核表达维生素C
