博士科研启动基金(ZMKD2013-016)
- 作品数：4 被引量：14H指数：4
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- 猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗不同保存条件下的稳定性研究被引量：4
- 2015年
- 目的研究猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组双歧杆菌(Bb)疫苗在不同保存条件下的稳定性。方法分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4BTSOL18电转入长双歧杆菌(B.longum),获得阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEXTSO45W-4B-TSOL18/B.longum,分别置于不同条件下保存,取出菌液,抽提质粒,电泳检测,进行稳定性分析。结果阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum分别在常温下、4℃、-20℃、-80℃、-196℃(液氮中)分别保存48h、1周、1月、2月,抽提质粒,电泳发现阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/B.longum、pGEX-TSOL18/B.longum和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/B.longum在液氮中、-80℃、-20℃中比较稳定,而在普通的室温环境下,很快发生质粒丢失现象。结论猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因的重组Bb疫苗低温保存最稳定,常温最差,这为猪带绦虫重组Bb疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫稳定性
- 猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum的构建及鉴定被引量：7
- 2014年
- 通过全基因合成猪带绦虫TSOL18基因,将该基因定向克隆至大肠埃希菌-双歧杆菌穿梭表达载体pGEX-1λT中,构建重组质粒pGEX-TSOL18,电穿孔法将该质粒导入长双歧杆菌(Bifidobacterium longum),构建猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum,并通过酶切、PCR和测序鉴定。全基因合成了393 bp的TSOL18基因片段。酶切、PCR和测序鉴定结果证明猪带绦虫双歧杆菌表达系统pGEX-TSOL18/B.longum构建成功。
- 周必英刘美辰贺莉芳
- 关键词：猪带绦虫双歧杆菌TSOL18重组菌
- 猪带绦虫重组双歧杆菌疫苗人工传代后的稳定性研究被引量：5
- 2014年
- 目的研究猪带绦虫TSO45W-4B基因、TSOL18基因和TSO45W-4B-TSOL18融合基因重组双歧杆菌(Bb)疫苗人工传代后的稳定性。方法分别将猪带绦虫重组质粒pGEX-TSO45W-4B、pGEX-TSOL18和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转入长双歧杆菌(Bifidobacteria longum),获得阳性菌株pGEX-TSO45W-4B/Bl、pGEX-TSOL18/Bl和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/Bl,分别经人工传代10次后抽提质粒,进行PCR鉴定和稳定性分析。结果经PCR鉴定,从第7代开始,pGEX-TSOL18/Bl菌株出现质粒丢失的现象,随着培养时间的延长,质粒丢失现象越来越严重,第8代,第9代均出现丢失现象。而pGEX-TSO45W-4B/Bl菌株从第8代开始出现质粒丢失现象,随后的第9代,第10代也陆续出现丢失现象。pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/Bl菌株相对稳定,但从第10代开始,开始出现了质粒丢失现象。结论重组质粒转化菌pGEX-TSO45W-4B/Bl、pGEX-TSOL18/Bl和pGEX-TSO45W-4B-TSOL18/Bl人工培养时分别从人工传代培养第8代、第7代和第10代开始出现质粒丢失现象,可稳定遗传7代、6代和9代,显示具有不同程度的遗传稳定性,这为猪带绦虫重组Bb疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫传代稳定性
- 猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达被引量：6
- 2014年
- 目的在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18电转化入长双歧杆菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达情况。结果酶切、PCR和测序证实,重组质粒pGEX-TSO45W-4B-TSOL18成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为55kD,与预期结果相一致。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论猪带绦虫TSO45W-4B-TSOL18融合基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。
- 周必英刘美辰杨凤娇
- 关键词：猪带绦虫长双歧杆菌
