湖南省自然科学基金(10JJ2011)
- 作品数：4 被引量：11H指数：4
- 相关作者：李瑛刘伏友孙林李军杨阳更多>>
- 相关机构：中南大学湘雅二医院新疆医科大学第一附属医院同济大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金国家自然科学基金国家中医药管理局中医药科学技术研究专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 曲尼斯特延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及机制被引量：4
- 2013年
- 目的:研究曲尼斯特延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的作用及机制。方法:建立糖尿病肾病(DKD)大鼠模型:SD大鼠随机分为正常对照组(n=6)、DKD模型组(n=8)、曲尼斯特低剂量(n=8)和高剂量治疗组(n=8)。采用高糖高脂饲料喂养联合低剂量STZ注射构建大鼠DKD模型。成模后,分别予以曲尼斯特200 mg/(kg·d)(曲尼斯特低剂量组)和400 mg/(kg·d)(曲尼斯特高剂量组)分2次灌胃。于第8周末处死大鼠,收集大鼠24 h尿液测24 h尿白蛋白排泄量,收集血测肾功能及血白蛋白;取部分肾组织置于4%中性甲醛溶液中固定,采用免疫组织化学检测肾组织补体C3a受体(C3aR),E-钙黏附蛋白(epithelial cadherin,E-Cadherin),α-SMA,纤维连接蛋白(fibronectin,FN),I型胶原蛋白(collagen I,Col I),干细胞生长因子(stem cell factor,SCF)和干细胞因子受体(c-kit)的表达以及分布;Western印迹检测肾组织E-cadherin,α-SMA,FN,Col I,SCF和c-kit蛋白的表达;RT-PCR检测肾组织FN,Col I,SCF,c-kit mRNA的表达。结果:曲尼斯特能抑制肥大细胞在DKD大鼠肾组织的浸润;DKD模型组肾小管上皮细胞E-cadherin的表达较正常对照组减少,并可见α-SMA表达,曲尼斯特可一定程度逆转这一过程;与正常对照组比较,DKD模型组肾小管间质区域Col I和FN的表达增加,曲尼斯特能剂量依赖性地抑制Col I和FN的表达;DKD大鼠肾组织SCF,c-kit蛋白及mRNA表达增加;肾组织SCF,c-kit蛋白表达与肥大细胞浸润程度及肾小管间质FN,Col I蛋白的表达呈显著正相关。曲尼斯特能抑制SCF,c-kit mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论:肥大细胞参与了DKD大鼠肾间质纤维化的发生发展,曲尼斯特可能通过阻断SCF/c-kit信号通路,抑制肥大细胞的募集而逆转DKD大鼠肾小管上皮细胞的EMT,抑制肾间质纤维化。
- 罗俊辉李瑛杨阳李军孙林段绍斌刘虹刘伏友刘玉平奚易云尤燕华李华
- 关键词：曲尼斯特糖尿病肾病肾间质纤维化肥大细胞干细胞生长因子干细胞因子受体
- 去甲斑蝥素不依赖钙调蛋白磷酸酶信号通路抑制高糖刺激肾小管上皮细胞细胞外基质的表达被引量：4
- 2010年
- 目的:在证实去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)能减轻糖尿病肾病(DN)大鼠肾间质纤维化和抑制高糖刺激的肾小管上皮细胞细胞外基质表达的基础上,观察NCTD对高糖刺激的肾小管上皮细胞钙调蛋白磷酸酶(calcineurin,CaN)通路的影响,探讨NCTD抗DN肾小管间质纤维化与其抑制CaN的关系。方法:常规培养人肾小管上皮细胞(HK-2),转染CaN siRNA,细胞分五组:(1)正常糖组(D-glucose5.5mmol/L);(2)高糖组(HG,D-glucose30mmol/L);(3)高糖+CaN siRNA组;(4)高糖+CaN siRNA+NCTD(5mg/L)组;(5)高糖+NCTD(5mg/L)组。采用Western-blot、免疫荧光和实时定量PCR,观察NCDT对HK-2细胞CaN/NFAT通路的影响,明确CaN siRNA的干扰效果。采用Western blot,检测NCTD对转染CaN siRNA后的HK-2细胞纤维连接蛋白(FN),胶原蛋白IV(Collagen IV,Col IV)及转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达的影响。结果:高糖可促进HK-2细胞CaNmRNA及蛋白的表达,NCTD可在基因及蛋白水平抑制CaN的表达(P<0.05)。免疫荧光发现CaN下游活化T细胞核因子(NFATc)在正常对照组中存在于胞质,高糖刺激后细胞核内开始表达,高糖刺激30min后发生明显的核转位,NCTD能在一定程度上抑制核转位的发生,并能减少高糖刺激后核内NFATc蛋白的表达。转染CaN siRNA后,高糖刺激后HK-2细胞中CaN mRNA以及蛋白表达均降低,而FN,Col IV以及TGF-β1蛋白水平表达都明显增强(P<0.05)。NCTD可抑制转染CaN siRNA后高糖刺激的HK-2细胞FN,Col IV和TGF-β1的表达。结论:NCTD能下调肾小管上皮细胞CaN表达,阻断CaN/NFATc信号通路;但NCTD抑制高糖刺激后肾小管上皮细胞细胞外基质的表达,与其阻断CaN/NFATc信号通路无关。
- 李瑛陈琼刘伏友彭佑铭李军孙林罗俊辉杨阳段绍斌凌光辉刘虹刘映红
- 关键词：去甲斑蝥素肾小管间质纤维化细胞外基质
- 去甲斑蝥素对高糖刺激的HK-2细胞FN,Col Ⅳ和TGF–β1 mRNA及蛋白表达的影响被引量：5
- 2012年
- 目的：观察去甲斑蝥素（NCTD）对高糖刺激的HK-2细胞外基质和TGF-β1表达的影响。方法：常规培养HK-2细胞，无血清DMEM培养基同步培养24h，细胞分为正常葡萄糖组（C，D-glucOSe5．5mmol／L）、甘露醇对照组（M，5．5mmol／LD—glucose＋24．5mmol／Lmannitoll、高糖组（HG，30mmol／LD—glucosel、高糖＋NCTD干预组（30mmol／LD-glucose＋0．5～40mg／LNCTD）。台盼蓝排斥实验检测NCTD对高糖刺激的细胞毒性。MTT法检测NCTD对高糖刺激的细胞增殖的影响。收集培养6，24，48h后细胞总RNA及蛋白，用RT．PCR检测细胞FN，Col1V和TGF-β1mRNA的表达，采用Western印迹检测FN，ColIV和TGF-β1蛋白的表达。结果：不同浓度NCTD作用72h后，浓度超过5mg／L的NCTD对高糖环境下的HK．2细胞有明显的毒性。RT-PCR和Western印迹结果显示：30mmol／LD-葡萄糖可引起HK．2细胞FN，Col1V和TGF-β1mRNA及蛋白水平的升高（P〈0．05），而5mg／LNCTD可抑制高糖刺激的FN，ColIV和TGF-β1的表达（P〈O．05）。相同渗透浓度的D-甘露醇组对上述指标均无影响（P〉O．05）。结论：NCTD能下调HK-2细胞FN，ColIV及TGF-β1的表达。
- 陈琼李瑛罗俊辉杨阳李军孙林肖力许向青彭佑铭刘伏友
- 关键词：去甲斑蝥素纤粘连蛋白
- 去甲斑蝥素抑制单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间充质转分化的实验研究被引量：6
- 2012年
- 目的:利用单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠模型,观察去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对肾小管上皮细胞间质转分化的影响。方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)和UUO+NCTD治疗组(NCTD组),每组6只。采用单侧(左)输尿管结扎方法,建立梗阻性肾小管间质纤维化大鼠模型,Sham组只游离输尿管而不结扎。术后14d处死动物,取结扎侧肾脏,同时处死Sham组大鼠,取出肾组织。采用免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)与转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白的mRNA表达的变化。结果:免疫组化、Western Blot及RT-PCR均显示,与Sham组比较,UUO组肾组织α-SMA和TGF-β1的mRNA表达升高、E-cadherin蛋白和mRNA表达降低(P<0.05);NCTD能抑制UUO大鼠肾组织α-SMA和TGF-β1表达的上调,上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论:NCTD具有抑制UUO大鼠肾小管上皮-间充质转化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1的过表达有关。
- 孙岩李瑛孙林刘健凌光辉刘映红周循刘伏友
- 关键词：去甲斑蝥素转化生长因子Β1
