国家质检总局科技计划项目(2006IK007)
- 作品数：3 被引量：18H指数：3
- 相关作者：王权曾晓华李安平陈志强常小斌更多>>
- 相关机构：中国农业科学院上海兽医研究所湖南农业大学上海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目上海市科技兴农重点攻关项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 动物源性食品中弓形虫Nested PCR-RFLP分子检测技术的建立被引量：7
- 2007年
- 目的 为了建立一种快速、特异、灵敏检测动物源性食品中弓形虫的技术。方法根据原虫rDNA的部分序列，找出弓形虫和新孢子虫共同保守DNA片段，设计套式PCR两对引物，以Ultra Pure^TM基因组DNA快速提取试剂盒提取弓形虫和新孢子虫DNA为模板，初步建立了检测两种虫体的NestedPCR技术。将纯化的Nested PCR产物成功地克隆到pGEM-T-easy载体中，经鉴定、测序并进行同源性分析。结果 Nested—PCR的外、内引物对两种虫体rDNA基因均能进行扩增，长度分别在800～900bp、400～500bp之间。内引物扩增DNA序列与公布的同种虫体DNA序列同源性较高，弓形虫和新孢子虫分别达99.1％、97．2％，但它们两者之间差异较大，同源性仅为86．6％。用软件寻找能区别两者基因序列差异的酶切位点，挑选内切酶进行RFLP实验，结果表明新孢子虫NestedPCR扩增片段能被Vspl酶切。同时进行该分子检测技术的特异性和敏感性试验，实验证明该NestedPCR能对弓形虫和新孢子虫rDNA基因进行特异性的扩增，而对其它原虫基因未能扩增出任何片段；该Nested-PCR能检测出100个弓形虫速殖子／g猪肉。结论 本实验建立NestedPCR检测方法不仅可用于检测动物性食品中弓形虫，而且能明确区分弓形虫和新孢子虫。
- 王权王巧全潘淑娟陈志强陈永军常小斌李健
- 关键词：弓形虫新孢子虫套式PCR
- 巢式PCR-RFLP法检测奶牛隐孢子虫及虫种鉴定被引量：6
- 2008年
- 采进口奶牛粪样200份,收集每份样品中的卵囊液,采用巢式PCR检测隐孢子虫(Cryptosporidium)18S rRNA基因,并用RFLP进行虫种鉴定,将目的片段克隆到pEGM-T easy vector,测序并进行同源性分析以进一步佐证虫种鉴定结果。结果表明,进口奶牛隐孢子虫阳性率为3.5%(7/200),514bp的目的片段不能被EcoT14 Ⅰ酶切。测序分析表明,获得的18S rRNA基因序列与NCBI上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)相应序列同源性高达99.4%~100%,与安氏隐孢子虫(C.andersoni)同源性仅为91.1%。说明进口牛粪样中检测出的隐孢子虫为微小隐孢子虫。
- 曾晓华陈铁桥王权李建李安平
- 关键词：隐孢子虫奶牛粪便
- Rea1-time qPCR检测安氏隐孢子虫卵囊方法的建立及应用被引量：5
- 2009年
- 根据GenBank公布的安氏隐孢子虫SSU rRNA基因序列设计1对引物和TaqMan探针,建立了基于Taq-Man探针检测安氏隐孢子虫的实时荧光定量PCR方法,并对奶牛粪便进行了检测。结果显示,设计的探针对检测安氏隐孢子虫具有很高的特异性;质粒DNA和卵囊的检测阈值分别达到5个拷贝和10个卵囊,奶牛粪便阳性率为21.15%(11/52)。建立的安氏隐孢子虫TaqMan荧光定量PCR检测方法简便、快速,特异性强,敏感度高,可用于安氏隐孢子虫的快速定量检测。
- 李安平王权黄克和朱志宏王赞江袁耀明曾晓华
- 关键词：实时荧光定量PCRSSURRNATAQMAN探针安氏隐孢子虫
