江苏省博士后科研资助计划项目(0802032C)
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
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- 相关机构：南京军区南京总医院江苏大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原
- 2011年
- 目的用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原,用于侵袭性曲霉病(IA)的诊断标志物及疗效监测。方法 YEPG培养基培养14 d的真菌分泌蛋白质进行二维电泳(2-DE)分离,用抗曲霉抗体阳性的IA确诊患者混合血清进行免疫印迹,再用质谱分析及生物信息学方法鉴定阳性反应点。结果 2-DE、免疫印迹结果显示,确诊IA患者血清与分泌蛋白质中多种抗原反应强烈。40个蛋白质点被抗体阳性IA患者血清识别。对40个蛋白质点质谱分析,成功鉴定了39个免疫反应阳性的蛋白质点,代表17种蛋白质,包括分泌型二肽基肽酶V(DppV)、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶、硫氧还蛋白还原酶、醛脱氢酶、果糖二磷酸醛缩酶、3-羟丁酰辅酶A脱氢酶等。在鉴定出的17种蛋白质中,有2个为已知抗原,15个首次报道为免疫原性蛋白质。有7种免疫原性蛋白质显示有多个蛋白质点。且在新发现的免疫原性蛋白质中,2号蛋白质(共13个蛋白质点)免疫反应最强,鉴定结果为硫氧还蛋白还原酶。结论免疫蛋白质组学技术是筛选病原体免疫优势抗原的一种有效方法,此次鉴定的抗原可能是潜在的疾病标志物,但还需进一步地实验加以评估。
- 史利宁李芳秋孔小祥王仕钦黄梅邵海枫
- 关键词：烟曲霉侵袭性曲霉病分泌蛋白2-DE
- 抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT抗体对侵袭性曲霉病的诊断价值被引量：3
- 2013年
- 目的建立检测抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT(TRG)抗体的ELISA法,评价其对侵袭性曲霉病(IA)的诊断价值。方法选择非中性粒细胞缺乏症IA患者42例、中性粒细胞缺乏症IA患者34例、血培养为其他真菌或细菌的非IA患者155例及体检健康者200例作为研究对象。用重组TRG作为包被抗原建立检测血清抗TRG抗体的ELISA法,检测研究对象血清抗TRG抗体水平,并与半乳甘露聚糖(GM)试验比较。建立兔IA模型观察抗TRG抗体产生的情况。结果 ELISA法检测抗TRG抗体的cut off值为0.514。非中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.827(0.571,1.234),抗TRG抗体阳性率为81.0%(34/42);中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.445(0.250,0.924),阳性率为41.2%(14/34)。非中性粒细胞缺乏症IA患者、中性粒细胞缺乏症IA患者组血清抗TRG抗体水平高于健康人+非IA患者对照组[0.191(0.134,0.293)],U分别为2 669.5、855,P均<0.01。对于非中性粒细胞缺乏症IA患者,抗TRG抗体ELISA检测法的敏感性高于GM试验(81.0%vs 52.3%,χ2=6.72,P<0.01);对于中性粒细胞缺乏症IA患者,GM试验的敏感性高于抗TRG抗体ELISA检测法(85.3%vs 41.2%,χ2=6.72,P<0.01)。2者联合检测,可使诊断非中性粒细胞缺乏症和中性粒细胞缺乏症IA的敏感性分别提高至88.1%(37/42)和91.2%(31/34)。血清抗TRG抗体在IA初期阶段持续升高,抗真菌治疗有效后,抗TRG抗体水平逐渐降至正常。兔IA模型显示感染烟曲霉1周后即出现抗TRG抗体,且抗体滴度快速增高。结论抗TRG抗体是辅助诊断非中性粒细胞缺乏症IA患者的潜在的标志物。
- 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋
- 关键词：侵袭性曲霉病中性粒细胞缺乏症
- 巨噬细胞在烟曲霉感染中的作用被引量：8
- 2009年
- 近年来,烟曲霉成为引起免疫力低下患者高病死率的一种条件性致病真菌,其已引起重视。巨噬细胞是机体固有免疫的主要成分,在抗烟曲霉感染中发挥着重要作用。文中就巨噬细胞在烟曲霉感染中的特点作一综述。
- 吴丹李芳秋
- 关键词：巨噬细胞天然免疫受体细胞因子
- 烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析被引量：6
- 2011年
- 目的克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。方法用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coliJM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),筛选重组表达质粒。用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。结果构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。结论成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。
- 史利宁邵世和李芳秋孔小祥王仕钦陆静芬黄梅邵海枫
- 关键词：烟曲霉硫氧还蛋白还原酶基因克隆原核表达
- ELISA法检测曲霉半乳甘露聚糖的影响因素被引量：5
- 2010年
- 史利宁李芳秋
- 关键词：半乳甘露聚糖ELISA法影响因素曲霉鼠单克隆抗体免疫反应性
- 用侵袭性曲霉病患者血清筛选特异性反应的烟曲霉蛋白质被引量：2
- 2011年
- 目的用对烟曲霉蛋白质反应阳性的侵袭性曲霉病(IA)患者血清筛选免疫反应性最强的烟曲霉蛋白质用于免疫蛋白质组分析。方法 TCA/丙酮沉淀法制备烟曲霉分泌蛋白及菌体蛋白质作为包被抗原,用ELISA法筛选确诊IA患者血清,反应阳性的血清进一步与烟曲霉分泌蛋白及菌体蛋白质进行免疫印迹,筛选免疫反应最强的蛋白质。结果 11例确诊的IA患者中,6例血清抗体阳性。用此血清进行免疫印迹分析显示,烟曲霉分泌蛋白质的免疫反应性在反应强度及反应数量上均优于菌体蛋白质。在4种不同培养基的分泌蛋白中,YEPG分泌蛋白的免疫反应性最强,有免疫反应的蛋白条带数量最多。结论用YEPG培养烟曲霉14d的分泌蛋白质免疫反应性最强,且免疫反应条带最多,拟用于免疫蛋白质组学分析,进一步筛选特异性烟曲霉抗原。
- 史利宁邵世和李芳秋周万青孔小祥王仕钦黄梅邵海枫
- 关键词：烟曲霉菌体蛋白分泌蛋白免疫反应性
