广东省医学科学技术研究基金(A2005228)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学广州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
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- 载阿霉素葡聚糖纳米粒的制备及其对肝癌细胞的杀伤作用被引量：2
- 2009年
- 目的制备载阿霉素葡聚糖纳米粒（DOX／DEX-PLA），观察其药物缓释规律，探讨其对人肝癌细胞的杀伤作用。方法以双乳化剂蒸发法制备DOX／DEX—PLA载药纳米粒，透射电镜观察纳米粒形态，分光光度法计算载药率，体外药物释放实验考察纳米粒对DOX的缓释作用。噻唑蓝（MTT）比色法观察对肝癌细胞的体外杀伤作用，动物实验观察其体内抑瘤效应。结果DOX／DEX—PLA纳米微粒呈球形，粒径约83nm，药物包封率约67．1％。体外释放实验提示，纳米制剂中约50％的药物持续缓慢释放，可持续达7d；DOX纳米制剂及DOX裸药均抑制HepG2细胞生长，两者抑瘤率相当（51．3％比50．7％，P〉0．05），而DEX-PLA纳米载体对HepG2细胞生长无抑制作用。体内抑瘤实验显示，DOX纳米制剂可抑制肝癌细胞抑制瘤的生长，抑瘤率达68．56％，优于DOX裸药（48．17％）。结论DOX／DEX—PLA纳米粒可有效抑制肝癌细胞的生长。
- 黄颖烽古维立李志花陈汝福周嘉嘉周泉波郭宁
- 关键词：葡聚糖阿霉素肝细胞癌
- 重组pDC316-MCMV/hNIS真核表达质粒的构建及在肿瘤细胞的功能被引量：4
- 2007年
- 【目的】克隆人的钠/碘同向转运体(hNIS)基因可编码序列,并研究其在非甲状腺肿瘤细胞内的功能表达。【方法】利用逆转录和聚合酶链反应(RT-PCR)从毒性弥漫性甲状腺肿(又称Graves病)病人的甲状腺组织中扩增得到NIS的可编码区基因,并克隆到T载体,测序后亚克隆到腺病毒载体穿梭质粒pDC316载体上,获得重组真核表达质粒载体pDC316-MCMV/hNIS。采用脂质体转染的方法,把pDC316-MCMV/hNIS重组质粒(实验组)或pDC316空质粒(对照组)分别导入到胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和卵巢癌细胞株SK-OV-3细胞,转染后48h采用RT-PCR方法检测转染细胞内的hNIS mRNA水平,转染后第2、3、4天分别检测肿瘤细胞对125I的吸收功能。【结果】序列分析结果证实克隆片段与文献报道的hNIS基因cDNA序列完全一致。实验组转染后48h,在CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞及SK-OV-3细胞内均能检测到hNIS mRNA高水平表达,对照组基本无hNIS mRNA表达。转染后第3天细胞吸碘达到高峰,实验组CAPAN-Ⅱ细胞、PANC-1细胞和SK-OV-3细胞对125I的吸收量分别比对照组高24倍、17倍和13倍。【结论】从Graves病人的甲状腺组织中克隆的hNIS基因转染肿瘤细胞后,能使肿瘤细胞发挥高水平吸碘功能,为进一步运用放射性核素体内靶向治疗非甲状腺肿瘤奠定了基础。
- 周泉波陈汝福李志花周嘉嘉唐启彬陈积圣
- 关键词：逆转录聚合酶链反应基因转染碘放射性同位素
- 纳米载体介导热诱导启动子调控内皮抑素基因治疗肝细胞癌被引量：1
- 2009年
- 目的探讨加热诱导调控下纳米载体介导内皮抑素（Endo）基因治疗对肝癌细胞HepG2的体内外杀伤作用。方法双酶切法构建热诱导启动子（HSP70B）调控Endo基因的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70-Endo／EGFP。溶剂挥发法制备载DNA的葡聚糖接枝聚乳酸纳米粒，透射电镜观察载DNA纳米粒的形态，并介导转染HepG2细胞，转染24h后予以37℃、39℃、41℃、43℃、45℃加热诱导30min，荧光显微镜和流式细胞术检测不同温度下EGFP表达，ELISA检测转染细胞上清Endo蛋白浓度，MTT法检测热诱导后Endo对HepG2和ECV304细胞生长的影响，动物实验观察热诱导后Endo对肝癌移植瘤的抑制作用。结果载DNA纳米粒呈圆形或椭圆形，粒径约90～120nm，转染效率约30．65％。低温加热可增强HepG2细胞中Endo／EGFP表达，43℃组EGFP表达强度达37℃组的3．3倍。43℃热诱导后转染细胞上清中Endo浓度为（177±28）μg／L，高于不加热组（41±10）μg／L。Endo抑制ECV304的生长，72h时热诱导后细胞抑制率为96．3％，对HepG2细胞的生长却无影响。体内实验显示热诱导后Endo显著抑制肝癌移植瘤的生长，肿瘤抑制率为58．5％，高于不加热组（34．9％）。结论纳米载体可介导Endo基因转染HepG2细胞，低温加热可增强HepG2细胞内Endo基因的表达和分泌，抑制肝癌移植瘤的生长。
- 周嘉嘉陈汝福李志花周泉波唐启彬贺晓玉卢红伟郭宁
- 关键词：肝细胞癌基因治疗内皮抑素纳米粒
- MUC1启动子驱动人钠/碘共转运体基因靶向表达于胰腺癌细胞的研究
- 2007年
- 目的克隆人 Mucin (MUC1)黏蛋白的启动子序列,并研究其驱动人钠/碘共转运体(hNIS)基因在胰腺癌细胞内的靶向性表达功能。方法利用巢式 PCR 方法从人胰腺癌细胞株CAPAN-Ⅱ细胞中扩增出 MUC1启动子。采用基因重组方法构建质粒 pDC316-MUC1/hNIS。采用脂质体转染的方法把 pDC316-MUC1/hNIS 导入到 MUCI 阳性的人胰腺癌细胞株 CAPAN一Ⅱ、PANC-1和MUC1阴性的人宫颈癌细胞株 HeLa,转染后48h 采用 RT-PCR 方法及免疫组化方法检测转染细胞内的 hNIS mRNA 水平和蛋白表达,转染48h 后检测肿瘤细胞内 NIS 对125碘吸收功能。结果扩增的MUC1启动子核心调控区序列与参考序列一致。重组 pDC316-MUC1/hNIS 转染后48h,hNIS 蛋白在CAPAN-Ⅱ、PANC-1细胞阳性表达,而在 Hela 细胞内不表达。pDC316-MUC1/hNIS 转染后仅在CAPAN-Ⅱ、PANC-1细胞内检测到高水平吸碘,分别是 pDC316-MUC1转染组的7和12倍。结论MUC1启动子能驱动 NIS 基因在 MUC1阳性的肿瘤细胞内靶向功能表达,为进一步在体内运用放射碘靶向治疗胰腺癌奠定了基础。
- 周泉波陈汝福李志花潘秋辉周嘉嘉唐启彬陈积圣
- 关键词：基因疗法胰腺肿瘤
- 重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70-Endo／EGFP的构建及在HepG2细胞的表达
- 2009年
- 目的构建热休克蛋白70（HSP70）启动子调控内皮抑素（Endo）基因的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70－Endo／EGFP，观察其在HepG2细胞中的表达规律。方法用聚合酶链反应（PCR）法体外扩增HSP70启动子（350bp）；用EcoRI、SalI双酶切法切取质粒pSP—Endo／EGFP中Endo／EGFP，克隆到pcDNA3．1（＋）中获得重组质粒pcDNA3．1（＋）／HSP70-Endo／EGFP。脂质体介导转染HepG2细胞，转染24h后予以37、39、41、43、45℃加热诱导30min，荧光显微镜和流式细胞术检测EGFP的表达，逆转录（RT）－PCR法检测细胞内EndomRNA的表达；ELISA法检测转染细胞上清中Endo蛋白浓度。结果合成HSP70启动子序列测序结果与GeneBank中AL671762所提供序列完全一致。低温加热可增强HepG2细胞中Endo／EGFP表达，43℃组EGFP表达强度达37℃组的3．3倍。43℃组EndomRNA表达水平高于不加热组。43℃组上清Endo蛋白浓度为（177±28）μg/L，高于不加热组（43±11）μg/L。结论成功构建HSP70启动子调控Endo基因的重组质粒，低温加热可增强HepG2细胞中Endo基因的表达。
- 陈汝福李志花周嘉嘉唐启彬周泉波吴畏郭宁彭宁福
- 关键词：热休克蛋白
- 腺病毒介导钠/碘泵基因靶向治疗胰腺癌被引量：1
- 2007年
- 目的观察0.8 kb的Mucin 1黏蛋白(MUC1)启动子驱动人钠/碘同向转运体(hNIS)基因在胰腺癌细胞靶向表达,评估其吸收碘的能力及结合放射碘治疗胰腺癌的效果。方法采用双质粒脂质体共转染方法获得复制缺陷型腺病毒Ad/MUC1/hNIS。Ad/MUC1/hNIS体外感染细胞,通过免疫荧光染色方法及细胞^(125)I的吸收试验检测hNIS在细胞的靶向表达及吸碘功能。构建鼠Capan-2胰腺癌模型,瘤内注射病毒后,结合^(131)I治疗,观察对移植瘤生长的抑制作用。结果hNIS仅在MUC1阳性的CAPAN-2和SW1990细胞的胞膜靶向表达,且有高的^(125)I吸收能力,分别较对照组提高20.5和13倍。Ad/MUC1/hNIS感染的肿瘤结合^(131)I治疗能抑制肿瘤生长,肿瘤体积减小到原来的83%。结论0.8 kb的MUC1启动子能驱动hNIS基因在MUC1阳性的胰腺癌细胞靶向表达,结合^(131)I治疗后能抑制胰腺癌的生长。
- 周泉波陈汝福李志花田芬周嘉嘉陈积圣
- 关键词：胰腺肿瘤碘放射性同位素基因治疗
- 结肠靶向吲哚美辛前药的合成及其对结肠癌肝转移的抑制效应被引量：1
- 2010年
- 目的合成菌群触发型结肠靶向吲哚美辛前药，评价其体内外释药特性与抑制结肠癌肝转移的效应。方法合成吲哚美辛一直链淀粉酯（IDM—AMs），通过傅里叶变换红外光谱（FrrIR）和核磁共振波谱（NMR）观察其结构表征。通过体外胃肠道模拟，筛选出具有结肠靶向潜能的前药IDM．AM一3。比较原药组、前药组和对照组大鼠灌胃后不同时点外周血和门静脉血的药物浓度和药代动力学特点。建立裸鼠结肠癌肝转移模型，观察IDM．AM一3对裸鼠结肠癌肝转移的抑制效果。结果共合成6种不同载药量的IDM—AMs，其中IDM—AM-3在模拟胃液（4h）、小肠环境（6h）和结肠环境（36h）中的释放率分别为1．3％、9．3％和95．3％。药代动力学检测结果显示，IDM—AM-3较IDM吸收明显滞后，门静脉血达峰时间[Tmax（11．35±2．45）h]、平均滞留时间[MRT，（22．27±0．52）h]和t1/2[（16．74±4．04）h]显著延长，峰血药浓度[C…，（9．69±2．40）mg／L]和药时曲线下面积[AUC00-1，（236．7±13．1）mg·L^-1·h]明显降低，外周血AUC0-4[（142．8±5．9）mg·L^-1·h]较门静脉血低（均P〈0．01）。抑瘤实验结果显示，与IDM比较，IDM—AM一3能显著降低结肠癌裸鼠肝转移瘤数目（P〈0．05）。结论结肠靶向IDM—AM-3具有门静脉缓释特点，为结肠靶向释药系统应用于门静脉缓释治疗提供了部分实验依据。
- 彭宁福杨立群陈汝福蔡祥黎乐群李志花周泉波周嘉嘉江志鹏
- 关键词：吲哚美辛直链淀粉结肠癌肝转移结肠定位释药
