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根癌农杆菌介导mBt886Cry3Aa转化菊花及对菊天牛毒杀作用被引量：2: 2011年; 【目的】将对鞘翅目害虫有毒杀作用的基因mBt886Cry3Aa转入菊花,并测定转基因菊花对靶标害虫—菊天牛的毒杀效果,为防治鞘翅目害虫提供新途径。【方法】以菊花为材料,确定茎段最适分化培养基和不定芽最佳生根培养基,卡那霉素最适筛选浓度,头孢噻肟钠最适抑菌浓度,通过农杆菌介导法完成mBt886Cry3Aa的遗传转化,利用转基因菊花与人工饲料混合对菊天牛2龄幼虫饲喂进行室内生物测定。【结果】经卡那霉素筛选和PCR检测,最终得到7株转基因菊花;选取长势健壮的4株转基因菊花混合人工饲料喂养菊天牛2龄幼虫,结果表明菊天牛2龄幼虫取食转基因菊花后的死亡率与对照幼虫(CK)死亡率差异显著。【结论】室内生物测定表明转基因菊花对菊天牛2龄幼虫具有较强的毒杀作用。; 王沛周洲苏丽娟尹新明; 关键词：菊花 BT毒蛋白基因生物测定

菊花“绿鹦哥”遗传转化系统的研究: 为对菊花进行抗虫基因遗传转化研究,本文确定了选择标记抗生素卡那霉素对菊花‘绿鹦哥’茎段分化和无菌苗生根抑制的最适浓度,并探讨了除菌抗生素头孢噻肟钠对‘绿鹦哥’茎段分化影响的安全浓度。试验结果表明30 mg.L-1的卡那霉...; 王沛周洲尹新明; 关键词：菊花茎段抗生素; 文献传递

毒杀天牛基因mBt886cry3a转化小黄菊研究被引量：2: 2009年; 毒蛋白编码基因Bt886cry3Aa对小黄菊进行了遗传转化,转化植株经过PCR和总DNA狭缝杂交验证,得到转基因小黄菊4个样品株。对菊天牛2龄幼虫的生物测定表明:4个样品株毒杀活性明显高于对照,校正死亡率分别为:45.89%、39.12%、35.42%和22.41%。mBt886cry3a转基因植株表现出较强的天牛毒杀活性,为天牛等钻蛀性害虫的防治提供了研究基础。; 周洲尹新明卢孟柱江志伟王沛; 关键词：毒蛋白

怀菊组织培养与快速繁殖被引量：3: 2011年; 目的建立怀菊的组织培养与快速繁殖体系。方法以茎段、叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素6-BA和NAA,研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响,选择分化率高的快速繁殖培养条件。结果怀菊茎段、叶盘最适分化培养基分别为MS+6-BA 2 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1和MS+6-BA 1 mg·L-1+NAA 0.05 mg·L-1;小苗的最佳生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg·L-1,生根率达100%。结论以怀菊茎段、叶片为外植体均建立了高效的组织培养和快繁体系。; 周洲陈双臣陈迪新尹新明; 关键词：芽再生移栽

家蚕核型多角体病毒ORF 75基因的生物信息学分析被引量：1: 2007年; 通过对家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori,nucleopolyhedrovirus:BmNPV)ORF 75基因核苷酸序列进行生物信息学分析,BmNPVORF 75基因位于病毒基因组70 485 bp和71 264 bp之间,编码259个氨基酸残基的多肽,预测分子相对质量为30.8 kDa,等电点为7.67,分子式为C1409H2157N351O390S19;蛋白在大肠杆菌内的半衰期大于10 h;酸性氨基酸(Asp+Glu)占10.5%,碱性氨基酸(Arg+Lys)占10.8%;蛋白的不稳定指数为42.67,是不稳定蛋白.利用Prosite数据库扫描,查到4类9个蛋白修饰位点.通过Blast搜索氨基酸同源序列发现,BmNPVORF 75同源蛋白存在于所有测序的鳞翅目昆虫杆状病毒中,不存在于其他非鳞翅目昆虫杆状病毒中.同源序列比对结果,BmNPVORF75蛋白的氨基酸序列与苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica MNPV)ORF92之间的同源性达到100%,应为相同基因.依照BmNPVORF75同源基因序列相似性,对13种昆虫杆状病毒进行进化树构建分析,其中,BmNPVORF75与薄荷灰夜蛾多粒包埋型核型多角体病毒(Rachiplusia ouMN-PV)ORF89基因进化距离很近,同源性较高.; 安世恒尹新明江志伟胡鹏郭征杨永青; 关键词：家蚕核型多角体病毒生物信息学分析

不同质量浓度抗生素对菊花‘绿鹦哥’茎段组织培养的影响被引量：4: 2010年; 研究确定了选择标记抗生素卡那霉素(Kanamycin:Kan)对菊花‘绿鹦哥’茎段分化和无菌苗生根抑制的最适质量浓度,并探讨了除菌抗生素头孢噻肟钠(Cefotaxime:Cef)对‘绿鹦哥’茎段分化影响的安全质量浓度.试验结果表明,30 mg.L-1的卡那霉素能够完全抑制菊花茎段的分化,10 mg.L-1的卡那霉素可以完全抑制无菌苗的生根;700 mg.L-1的头孢噻肟钠不影响菊花茎段外植体不定芽的再生,随着头孢噻肟钠质量浓度的升高,菊花茎段不定芽出现玻璃化现象.; 王沛周洲尹新明郭征; 关键词：菊花抗生素头孢噻肟钠诱导不定芽分化率

菊花‘绿鹦哥’的组织培养和快速繁殖被引量：7: 2009年; 以菊花‘绿鹦哥’茎段、叶盘为外植体,选用MS培养基为基本培养基,附加激素6-BA和NAA,研究不同激素浓度组合对外植体愈伤诱导及不定芽分化的影响。结果表明:菊花‘绿鹦哥’茎段最适芽诱导分化培养基分别为MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.1 mg/L;小苗的最佳生根培养基为1/2 MS+NAA 0.1 mg/L,生根率可达100%。; 周洲李永丽姜玲王沛尹新明; 关键词：芽再生茎段移栽

家蚕核型多角体病毒ORF 75基因的克隆及表达被引量：2: 2007年; 根据GenBank发表的序列(L33180)设计引物,利用PCR技术扩增了编码家蚕核型多角体病毒(Bombyxmori Nucleopolyhedrovirus,BmNPV)ORF75基因的DNA片段,将其连接至pMD18-T载体上,获得了该基因成熟蛋白阅读框序列.利用设计的酶切位点将目的基因从克隆载体上切下.表达质粒pGEX-4T-2经BamHI/XhoI双酶切,与目的片断连接,得到重组表达质粒pGEX/Bm75.将重组表达质粒pGEX/Bm75转化入大肠杆菌BL 21中,经IPTG诱导表达后,12%SDS-PAGE分析表明产生57 kDa左右的特异蛋白质条带.对表达产物进行Westernblotting分析,结果表明,pGEX/Bm75经IPTG诱导产生的57 kDa蛋白条带与抗体发生了很强的交叉反应,融合蛋白得到了表达.; 尹新明安世恒江志伟胡鹏; 关键词：家蚕核型多角体病毒克隆

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