国家自然科学基金(30701129)
- 作品数：6 被引量：44H指数：4
- 相关作者：谈文峰徐凌霄张前德郭敦明王芳更多>>
- 相关机构：南京医科大学江苏省人民医院南京中医药大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂肪因子脂联素及其受体在类风湿关节炎炎性关节中高表达被引量：8
- 2009年
- 目的研究脂肪因子脂联素（AD）及其受体1，2（AdipoR1，R2）在类风湿关节炎（RA）患者关节液和滑膜组织中的表达。方法酶联免疫吸附试验（ELISA）检测23例RA和23例骨关节炎（OA）患者关节液中AD水平，实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Western—blot法分析AD，AdipoR1，AdipoR2在10例RA和10例OA患者滑膜组织中的表达。结果RA关节液中AD含量约高于OA的2倍（P〈0．05）。RA滑膜组织中AD、AdipoR1mRNA表达明显高于在OA中的表达（P〈0．05），但两者AdipoR2表达差异无统计学意义。RA滑膜组织中AD和AdipoR1蛋白表达明显高于在OA中的表达，且AdipoR1表达明显高于AdipoR2（P〈0．05）；AdipoR2蛋白表达在RA和OA中差异无统计学意义。结论RA炎性关节液和滑膜组织中AD和AdiDoRl高表达，可能参与RA病理过程。
- 王芳谈文峰张缪佳郭敦明刘晓华沈友轩柯瑶何韶衡
- 关键词：类风湿脂联素脂联素受体
- 类风湿关节炎炎性关节中高水平脂联素促进白细胞介素-6单核细胞趋化因子-1和核因子-κB受体活化因子配体表达被引量：6
- 2010年
- 目的 研究类风湿关节炎（RA）炎性关节中高水平脂联素（AD）表达的意义.方法 酶联免疫吸附试验（ELISA）测定关节液中AD及白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α、单核细胞趋化因子（MCP）-1和基质金属蛋白酶（MMP）-9等促炎因子/趋化因子的含量,并分析AD与其相关性.双重免疫标记分析RA滑膜中AD在滑膜成纤维细胞（SFLs）、T淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和肥大细胞的表达.ELISA测定重组AD因子刺激SFLs后培养上清液中细胞因子含量变化.实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（real-time PCR）分析AD和IL-6共刺激对人滑膜细胞系MH7A中核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）mRNA表达影响.3组间采用多变量方差分析,2组比较采用Student＇s t检验.Mann-Whitney U检验,相关性分析采用Spearman检验.结果 RA关节液中AD与IL-6含量呈正相关（r=0.27,P=0.03）.AD与成纤维细胞双重免疫标记呈阳性反应.以重组AD因子30g/ml刺激SFLs 24 h后,培养上清液中IL-6和MCP-1分泌量与刺激前相比分别增加了11.4倍和8倍（P〈0.05）.AD和IL-6共刺激后,MH7A中RANKL mRNA表达显著增加（82±26）.结论 炎性关节中高水平AD可促进IL-6、MCP-1和RANKL表达,其可能在RA慢性炎症和骨侵蚀过程中发挥重要作用.
- 谈文峰徐凌霄王芳郭敦明刘婷何韶衡张缪佳
- 关键词：类风湿白细胞介素6单核细胞化学吸引蛋白质类
- 左归丸含药血清对间充质干细胞向软骨分化过程中骨粘连蛋白基因表达的影响被引量：2
- 2013年
- 目的研究左归丸含药血清对间充质干细胞向软骨分化过程中骨粘连蛋白基因(SPARC)表达的影响。方法诱导间充质干细胞向软骨分化,诱导同时以左归丸含药血清刺激细胞。分别在在0、7、14、21d通过Real-time PCR检测左归丸含药血清对诱导前后SPARC mRNA表达的影响。构建SPARC启动子报告载体并转染骨髓间质细胞系,双荧光素酶试剂盒检测左归丸含药血清SPARC启动子转录活性的影响。结果与空白对照组和单纯诱导组相比,在诱导第21天时,左归丸能明显促进诱导细胞中SPARC mRNA的表达(P<0.05)。与空白组比,当予以左归丸含药血清刺激后,SPARC基因启动子转录活性能增强近1倍(P<0.05)。结论左归丸含药血清能促进间充质干细胞向软骨分化过程中SPARC基因表达,可能主要是通过增强SPARC基因转录活性。
- 甘可徐凌霄王芳张缪佳谈文峰张前德
- 关键词：间充质干细胞软骨细胞骨粘连蛋白
- 补肾方骨青颗粒对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响被引量：4
- 2013年
- 目的探讨补肾方骨青颗粒对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。方法体外诱导破骨前体细胞系RAW264.7向破骨细胞分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察破骨细胞数目,图像分析计算骨吸收陷窝面积,荧光定量RT-PCR检测骨青颗粒对破骨细胞骨吸收功能标志性基因水平。结果与对照组相比,骨青颗粒可显著抑制TRAP染色阳性细胞的产生,减少破骨细胞骨吸收陷窝的面积,明显降低破骨细胞骨吸收功能标志性基因[组织蛋白酶K(Ctsk)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)]mRNA的表达。结论骨青颗粒可显著抑制破骨细胞的分化及骨吸收功能。
- 甘可冯小可郭婕谈文峰张前德
- 关键词：破骨细胞骨吸收
- 左归丸含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化中碱性磷酸酶含量的影响被引量：22
- 2011年
- 目的:研究左归丸含药血清对间充质干细胞骨向分化过程中碱性磷酸酶含量变化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养间充质干细胞,连续进行3次差速贴壁法纯化间充质干细胞。常规诱导组以β-甘油磷酸钠、地塞米松、维生素C诱导间充质干细胞骨向分化,实验组在常规诱导组基础上加以左归丸含药血清。使用茜素红染色钙结节、碱性磷酸酶染色鉴定诱导成功。分别在0,7,14,21 d用比色法检测细胞中碱性磷酸酶含量。结果:全骨髓贴壁法和差速贴壁法联合使用可得到较为均一间充质干细胞。用比色法测得碱性磷酸酶含量随着诱导时间延长而增加。结论:大鼠间充质干细胞经药物诱导后可以分化为成骨细胞。左归丸含药血清能够促使诱导过程中碱性磷酸酶含量表达增加。
- 徐凌霄高俊张前德
- 关键词：骨髓间充质干细胞成骨细胞碱性磷酸酶
- 骨髓间质干细胞向软骨细胞定向分化过程中基因表达谱变化被引量：4
- 2013年
- 目的运用基因芯片分析骨髓间质干细胞（MSCs）向软骨细胞定向分化过程中基因表达谱变化。方法抽取正常骨髓分离出MSCs，诱导向软骨细胞分化。同时提取诱导后0、7、14d细胞RNA，运用Affymetrix全基因组芯片比较不同诱导时间点基因表达差异；通过实时定量聚合酶链反应（Real-timePCR）验证差异表达基因。结果MSCs诱导第7天与第0天比较：表达基因涉及的生物过程主要集中细胞通讯（31．25％）和细胞发育（25．00％）等；而诱导第14天时差异表达基因涉及的生物过程主要与代谢相关：细胞代谢（62．50％），基础代谢（62．50％），大分子代谢（56．25％）。进一步进行基因功能分析显示，MSCs诱导7、14d与第0天比较，差异表达基因主要集中在编码软骨基质蛋白基因、基质金属蛋白酶、生长因子、细胞结构细胞发育、转录因子、信号分子、整合素和趋化因子等相关基因。实验显示诱导早期（0～7d）微环境变化集中在促进细胞增殖、分化和发育；诱导晚期（7～14d）微环境变化主要表现在参与维持代谢和软骨细胞表型稳定。Real—timePCR进一步证实SPARC、CCL25和CCL4基因表达在诱导7d明显上调，基质金属蛋白酶-t1（MMP．11）、金属蛋白酶组织抑制因子-3（TIMP-3）和肿瘤坏死因子相关受体因子5（TRAF5）基因表达在第14天达到高峰，这些基因有可能作为诱导分化过程中早期和晚期分子标志物。结论微环境分子网络改变调控MSCs向软骨细胞定向分化。
- 郭敦明曹晓建王芳谈文峰
- 关键词：间充质干细胞软骨细胞分化基因芯片
