辽宁省教育厅青年基金(05L433)
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
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- 相关机构：沈阳军区疾病预防控制中心沈阳药科大学吉林大学更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- Vgb在大肠埃希菌中表达及生物活性的研究被引量：1
- 2010年
- 目的将vgb克隆到大肠埃希菌表达载体pQE-30中,研究vgb表达产物对细胞摄氧能力的影响。方法利用PCR和基因重组技术克隆vgb与大肠埃希菌表达质粒pQE V,大肠埃希菌转化采用CaCl2法,VHb活性分析采用CO示差光谱法。结果克隆了vgb和重组质粒pQE V,vgb基因在大肠埃希菌中获得表达,在A420 nm处达到典型吸收峰。结论 vgb在大肠埃希菌中表达产物加强了对氧的摄取能力,对解决细胞高密度发酵培养中氧需矛盾、促进代谢产物的产率具有非常重要的应用价值。
- 邢安辉王洪军尹旭辉王立强于宁孙艳张锐
- 关键词：血红蛋白基因糖多孢红霉菌高密度发酵
- 透明颤菌血红蛋白基因在红色糖多孢菌株中表达及对红霉素产量的影响被引量：6
- 2007年
- 目的利用已含有血红蛋白基因(vgb)的红色糖多孢基因工程重组菌,探讨vgb表达产物对重组糖多孢红霉菌提高红霉素产率的影响。方法用SDS-PAGE、Western blot方法鉴定血红蛋白,用葡萄糖浓度与总蛋白质含量比较原始菌株与重组菌株的差别。结果红色糖多孢基因工程重组菌与原始菌株比较,重组菌株发酵过程葡萄糖浓度的变化出现在第二时段(约38h),原始菌株达到了0.4g/L,而重组菌株只有0.25g/L;第三时段原始菌株出现了游离葡萄糖浓度高峰而重组菌株未出现。在两个菌株中生物物质浓度[以总蛋白质(g/L)表示]存在不同,重组菌株比原始菌株约低27%。红霉素效价,原始菌株和重组菌株分别为3.98和5.15g/L,相当于重组菌株提高红霉素体积产率约29%。结论重组红色糖多孢菌表达了透明颤菌血红蛋白,提高了红霉素产率,对解决抗生素工业和基因工程菌高密度发酵有良好的应用前景。
- 吴益民王洪军孙艳吴琼冯立张志强杨青杨国平
- 关键词：透明颤菌血红蛋白基因红色糖多孢菌基因重组
- vgb在红色糖多孢菌表达及生物活性的研究被引量：3
- 2007年
- 利用基因工程技术对红色糖多孢菌进行改造,提高红霉素产率。用PCR技术克隆vgb,采用电穿孔法与红色糖多孢发酵菌染色体整合,鉴定采用Western blot与Southern blotting分析。VHb活性分析采用一氧化碳(CO)差示光谱法,红霉素效价测定采用管碟法。结果克隆了含vgb的红色糖多孢菌表达质粒(pBlueV),筛选了重组红色糖多孢菌株。与原始菌株比较,重组菌株细胞发酵密度分别为1.37与2.82,红霉素效价分别为3.8与5.1,相当于重组菌株提高红霉素体积产率约29%。重组红色糖多孢发酵菌提高了红霉素产率,对解决抗生素工业和基因工程菌高密度发酵有良好的应用前景。
- 吴益民王洪军孙艳王立强张志强冯立杨青
- 关键词：血红蛋白基因红色糖多孢菌红霉素高密度发酵
- 培养基对透明颤菌生长的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:为了从环境中分离透明颤菌(Vitreoscilla),对培养基和生长条件进行了优化。方法:采用富集培养的方法,对透明颤菌生长的培养基成份进行了筛选试验。结果:在培养温度为32±2℃,50ml/500ml三角瓶,pH 7.8,醋酸钠浓度为0.02%,摇床转速120r/min条件下,透明颤菌生长最佳培养基是:酵母粉0.7%,蛋白胨0.3%。结论:透明颤菌在上述培养基中生长12h可达到高峰。
- 王洪军尹旭辉杨姝明孙艳吴益民张志强冯立杨国平
- 关键词：透明颤菌培养基
- 透明颤菌理化特性的研究
- 2010年
- 为研究透明颤菌在微生物发酵工业生产中的应用,本文对透明颤菌的理化特性进行了检测分析。透明颤菌的分离采用培养基(PYA)富集培养与形态观察法,采用分光光度计、光扫描与CO示差光谱确定透明颤菌的生理生化性质。透明颤菌在蛋白胨0.4%、酵母0.6%、乙酸钠(NaAc)0.02%、pH7.8、34℃,150 r/min时可获得较大生长速率;NaAc浓度为1%、pH7.5～8.0时菌体生长最快。透明颤菌在稳定期血红素含量约为每克湿菌中11 nmol左右,样品在5 000 r/min离心后出现血红蛋白的吸收峰。本文明确了透明颤菌的分离培养条件,并确定了理化性质,为在发酵工业生产中应用透明颤菌奠定了参考依据。
- 王立强王洪军孙艳冯立张志强吴益民
- 关键词：透明颤菌血红蛋白
- 表达vgb的糖多孢红霉菌载体构建与活性鉴定
- 2007年
- 目的为了在糖多孢红霉菌(Sac.erythraea)中表达透明颤菌(Vitreoscilla)血红蛋白基因(vgb),发挥其在贫氧环境下与氧结合形成氧合态,而改变限氧时细胞原有的代谢方式,将vgb克隆于糖多孢红霉菌表达载体中。方法利用PCR技术克隆vgb,利用基因重组技术构建含有vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒,电穿孔法将vgb转化置糖多孢红霉菌中,鉴定采用SDS-PAGE电泳。vgb在重组糖多孢红霉菌表达产物的生物活性检测用Western blotting分析表示。结果克隆了含有vgb的重组糖多孢红霉菌表达质粒(pBlueV),分子量6.033 kb,筛选了重组糖多孢红霉菌株,重组菌株表达的血红蛋白能与1∶300的VHb抗体呈显色反应。结论vgb在糖多孢红霉菌中获得了表达,这对继续研究生产红霉素的工程菌改造,解决工业发酵工程菌高密度培养具有良好的应用前景。
- 王洪军吴益民孙艳杨姝明王立强冯立杨青张志强
- 关键词：糖多孢红霉菌基因重组
