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HIF-1α对间充质干细胞SDF-1/CXCR4的调控作用研究被引量：1: 2014年; [目的]探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)对间充质干细胞基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(chemokine receptor 4,CXCR4)的调控作用。[方法]贴壁法培养ICR小鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs);采用RNA干扰技术用SuperFectinTMⅡ转染HIF-1αsiRNA于MSCs;实验分为五组:常氧组、缺氧组、转染Control siRNA组、转染HIF-1αsiRNA常氧培养组、转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组;RT-PCR检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA表达水平;Western blotting检测HIF-1α、SDF-1α、CXCR4蛋白表达水平。[结果]同常氧组比较,缺氧组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平提高(P<0.05);同转染Control siRNA组比较,转染HIF-1αsiRNA常氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05);同缺氧组比较,转染HIF-1αsiRNA缺氧培养组HIF-1α、SDF-1α、CXCR4 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。[结论]缺氧可使MSCs的HIF-1α、SDF-1α、CXCR4的表达提高,常氧与缺氧条件下抑制HIF-1α的表达可使SDF-1α、CXCR4的表达降低,HIF-1α在间充质干细胞中对SDF-1/CXCR4有调控作用。; 周丽萍余勤刘丽珍刘伟胡韶君; 关键词：缺氧诱导因子-1Α 间充质干细胞基质细胞衍生因子-1Α CXC趋化因子受体4

脯氨酸羟化酶抑制剂DMOG动员的大鼠外周血间充质干细胞的多向分化潜能研究: 2017年; 目的:探讨脯氨酸羟化酶抑制剂—二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG)动员后大鼠外周血间充质干细胞(PB-MSCs)的多向分化潜能。方法:SD大鼠腹腔注射DMOG 40 mg·kg-1,分离扩增PB-MSCs,流式细胞术检测其表面抗原;诱导分化培养法研究PB-MSCs成骨、成软骨、成脂、成神经分化潜能。结果:PB-MSCs表面阴性表达造血系标记CD34(2.16±1.60)%、CD45(0.82±0.55)%,阳性表达CD90(98.66±0.77)%;成骨分化检测有钙结节出现,硝酸银染色发现细胞成黑色颗粒状;成软骨分化检测发现细胞核偏移,甲苯胺蓝染色细胞外基质成紫色,核成蓝色;成脂分化检测发现细胞中出现大量"脂滴",油红O染色成红色;成神经检测中,细胞出现轴突,免疫荧光蛋白检测巢蛋白(Nestin)表达阳性,胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达阴性。结论:DMOG动员后培养的外周血细胞为MSCs,且具有成骨、成软骨、成脂、成神经分化的潜能。; 胡传钦胡韶君周丽萍林德菊黄风景余勤; 关键词：间充质干细胞动员剂免疫表型多向分化

逆转录病毒方法建立小鼠诱导性多能干细胞的实验研究被引量：3: 2013年; [目的]采用逆转录病毒法转染P2代ICR的小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF),建立小鼠诱导性多能干细胞(inducedpluripotent stem cell,iPS cell,iPS细胞)。[方法]本实验采用293T细胞进行逆转录病毒包装,将分别携带来源于人的Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4转录因子的4种逆转录病毒液共转染ICR小鼠的MEF,并在转染过程中添加维生素C、丙戊酸钠来提高小鼠iPS细胞的诱导效率,通过碱性磷酸酶染色、RT-PCR方法检测建立的细胞株。[结果]转染的MEF在1周左右时间出现明显克隆,克隆传代的细胞经碱性磷酸酶染色呈紫红色,RT-PCR检测结果显示细胞株中的Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog 5种多能性相关的基因都得到明显表达。[结论]转染的MEF在1周左右时间出现明显克隆,小鼠iPS细胞的一些表面标志如碱性磷酸酶得到表达,Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog 5种多能性相关基因也都得到明显表达,表明已经建立小鼠iPS细胞。; 单威余勤王标刘丽珍刘森泉付珊刘伟周丽萍; 关键词：IPS细胞 MEF 逆转录病毒

脯氨酸羟化酶抑制剂对小鼠间充质干细胞的动员作用被引量：3: 2013年; [目的]探讨脯氨酸羟化酶抑制剂——二甲基乙二酰基甘氨酸(dimethyloxaloylglycine,DMOG)对小鼠间充质干细胞(mouse mesenchymal stem cells,mMSCs)的动员作用。[方法]ICR小鼠随机分为对照组及3个DMOG动员剂量组(20、40、80mg·kg-1)。不同剂量的DMOG每天一次在固定的时间段腹腔内注射入ICR小鼠,对照组给予相同体积的生理盐水。采用流式细胞术与成纤维细胞集落形成单位法检测不同浓度DMOG处理后小鼠外周血与骨髓中MSCs数量,Western blotting法检测骨髓细胞中HIF-1α、SDF-1α及VEGF蛋白的表达,ELISA法检测骨髓上清及外周血清中SDF-1α及VEGF蛋白的浓度。[结果]流式细胞术与成纤维细胞集落形成单位法检测发现不同剂量的DMOG处理7d后小鼠外周血与骨髓中MSCs数量较对照组显著增加(P<0.05),且CD45-CD90+细胞群比例升高(P<0.05)。同时Western blotting法及ELISA法检测发现小鼠骨髓HIF-1α、SDF-1α表达上调,VEGF浓度升高(P<0.05)。[结论]DMOG对小鼠间充质干细胞具有动员作用,可能与通过上调HIF-1α,从而调控其下游相关通路有关。; 刘伟余勤刘丽珍周丽萍胡韶君; 关键词：缺氧诱导因子-1Α HYPOXIA INDUCIBLE

HIF-1信号通路在介导DMOG动员MSCs中的作用被引量：5: 2015年; 目的探讨HIF-1及下游SDF-1α/CXCR4和VEGF/VEGFR通路在介导DMOG动员MSCs中的作用机制。方法将雄性SD大鼠,随机分为五组:生理盐水对照组、DMOG组、YC-1组、AMD3100组、SU5416组。分别采用CFU-F法与流式细胞术检测大鼠骨髓和外周血中MSCs的数量;ELISA法检测骨髓上清及外周血清中SDF-1α及VEGF蛋白浓度;Western blotting法检测骨髓细胞中HIF-1α、SDF-1α及VEGF蛋白表达水平。结果同NS组比较,DMOG组CFU-Fs数量显著增加,且CD45-CD90+细胞群比例增加(P<0.05);同DMOG组比较,YC-1组、AMD3100组、SU5416组CFU-Fs数量均显著减少,且CD45-CD90+细胞群比例降低(P<0.05);同DMOG组比较,YC-1组HIF-1α浓度及蛋白表达显著降低(P<0.05),AMD3100组SDF-1α浓度及蛋白表达显著降低(P<0.05),SU5416组VEGF浓度及蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 DMOG可能通过上调HIF-1α,从而调控其下游SDF-1α/CXCR4通路与VEGF/VEGFR通路诱导MSCs的动员。; 胡韶君余勤刘丽珍葛婷婷; 关键词：缺氧诱导因子-1Α 基质细胞衍生因子-1Α

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国家自然科学基金(81270566)