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胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2甲基化状态检测: 2009年; 目的:应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2启动子区域5′端CpG岛甲基化状况,探讨Caveolin-1基因甲基化在胃癌发生发展中的作用.方法:收集30例胃癌组织和6例距肿瘤5cm以上的癌旁正常胃组织,运用标准蛋白酶K消化、酚-氯仿抽提法提取组织中基因组DNA,采用CpGenome DNA Modification Kit对DNA进行修饰后以甲基化特异性引物及非甲基化引物进行PCR,通过琼脂糖凝胶电泳及产物测序判定结果.结果:6例癌旁正常胃组织Caveolin-1基因外显子2启动子区域5′端CpG岛均为甲基化阴性.30例胃癌组织中有27例甲基化阳性,甲基化率为90%(27/30).其中16例胃癌组织(53.3%)仅有甲基化引物扩增出目的条带,表现为完全甲基化;11例胃癌组织(36.7%)甲基化与非甲基化引物均扩增出目的条带,表现为部分甲基化.统计结果显示胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2启动子区域甲基化率显著高于癌旁正常胃组织.结论:胃癌组织中存在Caveolin-1基因外显子2启动子区域高甲基化,且可能参与胃癌的早期过程.; 何欣刘斌邢传平哈小琴董亮钱震刘茗露苏勤军顾立萍; 关键词：CAVEOLIN-1基因甲基化甲基化特异性PCR

甲基化特异性PCR技术的质量控制及改进被引量：1: 2008年; 目的:改进甲基化特异性PCR(MSP)技术并控制实验质量.方法:采用改进的MSP法检测正常胃粘膜及胃癌组织中caveolin-1基因的甲基化状况.运用饱和酚-氯仿抽提法提取DNA,其中石蜡包埋组织连续切片厚度为8μm;采用热启动PCR:反应体系为25μL、变性温度设定为95.5℃、循环数设定为30.结果:新鲜组织较石蜡包埋组织更适于MSP实验,但福尔马林固定石蜡包埋组织同样可用于MSP实验,并且8μm厚的石蜡包埋组织能获得较完整的DNA链.热启动PCR效果良好:25μL体系敏感性优于50μL体系,95.5℃可以使含CpG岛的DNA链解链更完全,30个循环足以扩增小于150bp的目的片段.结论:采用改进的MSP技术,可获得较好的DNA模板,提高实验的灵敏度和成功率,更适于甲基化的研究.; 顾立萍刘斌邢传平黄小玲高自芳苏勤军钱震董亮; 关键词：甲基化胃肿瘤

胃癌组织中Dnmt1与caveolin-1表达的关系被引量：4: 2009年; 目的探讨正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中Dnmt1及caveolin-1的表达以及二者间的关系。方法应用免疫组化SP法检测20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及70例胃癌组织中Dnmt1、caveolin-1的表达状况。结果在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中Dnmt1蛋白阳性表达率呈递增趋势,组间差异极显著（χ^2=34.710,P〈0.01）;而caveolin-1蛋白呈递减趋势,组间差异亦极显著（χ^2=41.806,P〈0.01）。Dnmt1蛋白阳性表达率在性别、年龄、溃疡的大小、有无脉管转移和浸润深度各组间差异不显著（P〉0.05）,而在有无淋巴结侵犯组间差异显著（P〈0.05）;caveolin-1蛋白阳性表达率在性别、年龄各组间阳性表达率差异不显著,而在有无淋巴结转移、浸润深度、有无脉管转移组间阳性表达率差异显著（P〈0.05）。Dnmt1与caveolin-1蛋白表达呈负相关（rs=-0.929,P〈0.05）。结论caveolin-1基因在胃癌组织中的沉默可能由Dnmt1高表达引起的该基因高甲基化而产生,在胃癌发生、发展中可能具有重要作用。; 刘斌顾立萍邢传平高自芳苏勤军钱震董亮; 关键词：胃癌小窝蛋白-1 免疫组化

胃癌组织中Dnmt1的表达及其临床病理意义被引量：8: 2008年; 目的:探讨胃癌组织中Dnm t1蛋白的表达及其临床病理意义。方法:应用免疫组化SP法检测了20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及70例胃癌组织中Dnm t1蛋白的表达状况。结果:Dnm t1蛋白阳性表达率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌各组间呈递增趋势,差异有统计学意义(χ2=34.710,P<0.01);低分化腺癌较高分化腺癌组织阳性表达信号明显增强,但在不同分化程度各组间Dnm t1蛋白阳性表达率无显著性差异(P>0.05);胃癌组织中Dnm t1蛋白阳性表达与性别、年龄、溃疡的大小、有无淋巴结转移和浸润深度等临床病理特征无关(P>0.05),而与有无脉管侵犯有关(P<0.05)。结论:Dnm t1蛋白表达显著升高可能是胃癌发生、发展的重要原因,Dnm t1蛋白可成为早期诊断胃癌的有效指标。; 顾立萍刘斌邢传平高自芳苏勤军钱震董亮; 关键词：胃癌免疫组织化学

Caveolin-1基因mRNA和蛋白在胃癌组织的表达被引量：16: 2007年; 目的:通过研究Caveolin-1mRNA及蛋白在胃不同病变组织中的表达,对mRNA及蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数间的关系进行分析.方法:25例正常胃黏膜、65例不典型增生胃黏膜及71例胃癌组织,采用免疫组化SP法检测蛋白的表达情况;依据GenBank中Caveolin-1基因序列(NC-000007),设计并合成全长21bp的寡核苷酸探针,运用原位杂交技术对Caveolin-1mRNA的表达进行检测.结果:Caveolin-1mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞浆中的阳性表达率呈递减趋势,阳性率分别为:92.0%,83.1%,38.2%和88.0%,83.1%,28.2%.Caveo-lin-1mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移组、有无脉管侵犯组内表达率的差异有统计学意义(P<0.05),在年龄及性别组内表达率的差异无统计学意义(P>0.05).Caveolin-1mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.967,P<0.05).结论:Caveolin-1mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、胃癌中阳性表达率均逐渐降低,两者在不同病变组织中表达的一致性提示该基因在癌组织中的低表达发生于转录或以上水平的抑制.; 刘斌杨育生邢传平高自芳顾立萍钱震董亮苏勤军; 关键词：胃肿瘤 CAVEOLIN-1基因免疫组织化学原位杂交

胃癌组织中Dnmt1基因mRNA和蛋白的表达被引量：1: 2009年; 目的:探讨正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌组织中Dnmt1基因mRNA及蛋白的表达以及两者之间的关系.方法:应用原位杂交技术及免疫组化SP法检测20例正常胃黏膜、40例不典型增生胃黏膜及60例胃癌组织中Dnmt1基因mRNA及蛋白的表达状况.结果:Dnmt1 mRNA在正常胃黏膜腺上皮中基本呈阴性表达(除部分增生的小凹上皮),其阳性率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌三组间呈递增趋势,组间有统计学差异(P<0.01).Dnmt1蛋白在正常胃黏膜腺上皮中基本呈阴性表达(除部分增生的小凹上皮和淋巴细胞),其阳性率在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌三组间呈递增趋势,组间有统计学差异(P<0.01).Dnmt1 mRNA和蛋白的阳性表达与年龄、性别、肿物的大小、浸润深度、有无脉管转移等临床病理特征无关,而与有无淋巴结转移有关(P<0.05).Spearman等级相关分析显示Dnmt1蛋白与mRNA表达呈正相关(rs=1.000,P<0.01).结论:Dnmt1在胃癌组织中的高表达与胃癌的发生、发展及淋巴结转移密切相关.; 刘斌顾立萍邢传平苏勤军高自芳钱震董亮; 关键词：胃肿瘤免疫组织化学染色原位杂交

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甘肃省自然科学基金(3ZS061-A25-094)