国家自然科学基金(81270519)
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- 大鼠肝脏前体细胞通过直接共培养抑制肝星状细胞的活化
- 2013年
- 目的观察大鼠肝脏前体细胞系(WB-F344)对肝星状细胞系(HSC-T6)活化及细胞外基质的影响。方法将慢病毒-GFP空白载体转染的HSC-T6与WB-F344按1∶1与1∶2比例直接共培养3 d,使用流式细胞仪对其进行分选,慢病毒-GFP空白载体转染的HSC-T6单独培养作为对照,观察HSC-T6活化指标及细胞外基质相关指标表达的变化。结果经流式细胞仪检验慢病毒-GFP空白载体转染HSC-T6的效率可达近90%;与WB-F344直接共培养3 d后,HSC-T6的细胞形态与对照组相比无差别;同时利用GFP对各组HSC-T6细胞分选后,经流式细胞仪检验纯度可达94%;对分选后的细胞进行分析发现,直接共培养组HSC-T6细胞活化标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在基因水平(1∶1与1∶2组分别是对照组的0.66与0.61倍,P<0.05)和蛋白水平(1∶1与1∶2组分别是对照组的0.61倍与0.25倍,P<0.05)的表达均下降;HSC-T6细胞的细胞外基质标记物I型胶原(Col-I)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达与对照组比较差异无统计学意义。结论 WB-F344细胞可以抑制HSC-T6细胞的活化,但在一定时间内对其细胞外基质的表达没有影响。
- 孙亚朦杨爱婷王萍丛敏刘天会赵文姗贾继东尤红
- 关键词：细胞活化细胞外基质肝星状细胞肝前体细胞
- TGFβ1诱导的肝脏前体细胞上皮-间质转换在逆转过程中可影响星状细胞活化
- 2015年
- 目的通过收集TGFβ1刺激过的前体细胞条件培养基,观察其对HSC的影响。方法收集TGFβ1预处理的前体细胞条件培养基,培养HSC细胞48 h,观察HSC活化程度及细胞外基质相关指标的变化。结果经TGFβ1刺激后的前体细胞形态明显变大变圆,胞质比例明显增加,核质比减少。去除TGFβ1刺激后,发现TGFβ1刺激超过24 h,前体细胞的上皮-间质转换发生逆转,表现为α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达量下降,24 h、36 h及48h分别为对照组的1.31倍(P>0.05)、0.97倍(P=0.027)、1.08倍(P=0.058)。与对照组相比,TGFβ1刺激后前体细胞的条件培养基对HSCs的细胞形态无明显差别。进一步分析发现,TGFβ1刺激前体细胞6h后,其条件培养基促使星状细胞α-SMA及细胞外基质标志物金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)在蛋白及基因水平上(分别为对照组的4.12倍及2.64倍)的表达;然而刺激超过24h上述作用相反,在蛋白水平表现为α-SMA表达降低而TIMP-1的表达无明显变化,在基因水平α-SMA及TIMP-1均呈降低趋势(24 h、36 h、48 h分别为对照组0.81倍及0.98倍、0.96倍及0.61倍、0.63倍及0.76倍)。结论去除TGFβ1的刺激后,其诱导的上皮-间质转换可发生逆转,并在逆转过程中可影响星状细胞的活化。
- 赵文姗杨爱婷孙亚朦贾继东尤红
- 关键词：肝前体细胞星状细胞条件培养基转化生长因子-Β1TGFΒ1
