国家自然科学基金(30528008)
- 作品数：3 被引量：9H指数：1
- 相关作者：李刚陈慧高鑫张学光卢斌峰更多>>
- 相关机构：苏州大学匹兹堡大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人Tim-3基因克隆及其转基因细胞的构建
- 2011年
- 目的克隆人Tim-3基因,并构建含有该目的基因的重组真核表达载体,获得稳定表达人Tim-3分子的L929基因转染细胞。方法采用RT-PCR方法从人外周血T淋巴细胞中克隆出Tim-3基因,通过双酶切(XhoI,Sa-lI)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染L929细胞,72 h后加入G418进行筛选,挑选出能稳定表达Tim-3蛋白的L929细胞株。结果构建了用于表达的含Tim-3基因的重组真核表达载体,经脂质体转染L929细胞,继而经RT-PCR和流式细胞术表型检测,筛选出稳定表达人Tim-3蛋白的L929转基因细胞。结论构建了含人Tim-3基因重组真核表达载体和稳定表达人Tim-3蛋白的细胞株,为该基因功能的后续研究和单克隆抗体的研制奠定了基础。
- 高鑫李刚陈慧汪家敏张光波卢斌峰张学光
- 关键词：TIM-3基因基因转染真核表达T细胞
- 4NQO诱发C57BL/6小鼠舌癌及食管鳞状细胞癌模型的建立被引量：8
- 2010年
- 目的为探讨化学诱导舌癌和食管癌的作用及可能机制,利用化学致癌剂4硝基喹啉1氧化物(4NQO)建立C57BL/6小鼠的舌癌和食管癌模型。方法 100μg/ml、50μg/ml、10μg/ml的4NQO通过饮水法作用于C57BL/6小鼠,实验期间通过肉眼和组织学观察病变过程。结果随着摄入4NQO浓度的增加,小鼠在同一时期的发病率也随之增加,病变加重,同时随着服用时间的延长,病情逐渐加剧。在实验过程中,可以观察到舌和食管的病变经历了单纯性上皮增生—异常增生—原位癌—浸润性癌这样一个经典的鳞状上皮细胞癌的病变过程。当服用100μg/ml4NQO16周,到第28周时可观察到浸润性癌的病理症状。结论采用4NQO饮水法成功建立了C57BL/6小鼠舌癌和食管癌动物模型,为研究口腔鳞状上皮细胞癌和食管鳞状上皮细胞癌提供了有价值的动物模型。
- 陈慧高鑫李刚王凤鸣孙静刘柳卢斌峰张学光
- 关键词：舌癌食管鳞状细胞癌C57BL/6小鼠动物模型
- 人白细胞介素-22的克隆及原核表达被引量：1
- 2010年
- 目的克隆hIL-22成熟链基因并在大肠杆菌表达体系中进行有效表达。方法采用反转录PCR以及巢式PCR的方法克隆得到hIL-22基因。将hIL-22基因装入PQE3.0载体构建重组载体hIL-22/PQE3.0,继而转化宿主工程菌株M15。经异丙基B-D硫代半乳糖苷诱导表达产生hIL-22/His重组蛋白并纯化。重组蛋白经电泳分析和Westernblot验证。结果成功地克隆和构建了hIL-22/PQE3.0载体,转化的工程菌经过诱导表达18kd的hIL-22成熟链,利用亲和层析得到了纯化的重组蛋白。结论成功获得hIL-22/His重组蛋白,为下一步研究人IL-22在肿瘤细胞中的作用奠定了物质基础。
- 李刚高鑫陈慧王凤鸣卢斌峰张学光
- 关键词：重组蛋白原核表达
