国家自然科学基金(39870710)
- 作品数：18 被引量：65H指数：6
- 相关作者：王健民章卫平居小萍张雨生翟勇平更多>>
- 相关机构：第二军医大学南京军区南京总医院中国医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划上海市卫生局“百人计划”更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- D-氨基酸氧化酶基因在K562细胞中的表达及其介导的细胞毒性作用的研究被引量：4
- 2001年
- 目的 探讨逆转录病毒介导的红色酵母D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因在K5 6 2细胞中的表达及其功能。方法 将DAAOcDNA克隆至逆转录病毒载体pLSN中 ,构建了载体pLDAAOSN ,经ΦNXA细胞包装后 ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,以重组逆转录病毒感染K5 6 2白血病细胞 ,G418筛选出抗性克隆 ,命名为KDAAO 。PCR、原位杂交分析外源基因整合和表达 ,并以不同浓度的D 丙氨酸 (D Ala)处理KDAAO 细胞。结果 重组逆转录病毒载体中含有完整的DAAO基因。包装细胞产生了高滴度病毒 (5 .2× 10 6cfu ml)。DAAO基因已整合至KDAAO细胞基因组中 ,并在mRNA水平表达。D Ala能明显杀伤KDAAO 细胞。结论 DAAO D Ala自杀基因系统可以进一步用于肿瘤的基因治疗研究。
- 翟勇平王健民周虹张雨生
- 关键词：逆转录病毒载体细胞株K562细胞细胞毒性作用基因治疗
- 丁胱亚磺酰亚胺增强DAAO/D-Ala系统杀伤K562e细胞作用的研究被引量：1
- 2002年
- 目的:研究了丁胱亚磺酰亚胺(BSO)增强D-氨基酸氧化酶(DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)自杀基因系统在白血病基因治疗中的作用。方法:应用逆转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K562e单克隆细胞K_(DIGC),用PCR、原位杂交对DAAO基因修饰的K_(DfGC)进行鉴定。应用MTT法检测D-Ala对BSO预处理过的K_(DfGC)细胞的杀伤作用。结果:PCR和原位杂交分析证明DAAO基因已整合至细胞基因组中,并在mRNA水平上表达。D-Ala作用24h,K_(DfGC)细胞的半数抑制浓度(C_(50))为10.21mmol/L,K_(DfGC)+BSO的IC_(50)为7.92mmol/L,两者的95％可信区间不重叠。结论:BSO可增强DAAO/D-Ala系统杀伤K652e细胞作用。
- 翟勇平王健民张雨生吕书晴
- 关键词：丁胱亚磺酰亚胺白血病细胞D-氨基酸氧化酶白血病
- 可变数串联重复序列检测异基因外周血造血干细胞移植后植活证据的研究被引量：6
- 2000年
- 目的 从血型、染色体核型、DNA可变数串联重复序列 (VNTR)几个方面进行对比研究以更好地评估异基因移植后的植入状态及其与疾病复发的关系。方法 采用聚合酶链反应 (PCR)方法扩增D17S30、D1S80、ApoB3个不同位点的多态性 ,对 15例白血病患者异基因外周血造血干细胞移植 (allo PBSCT)后的嵌合状态进行检测 ,对其中 7例异性间移植和 3例血型不合移植又分别进行了染色体核型分析和全套血型分析。结果 经VNTR检测 ,allo PBSCT后 15天有 11例呈供体型嵌合状态 ,4例呈混合型嵌合状态。 7例异性间移植者经染色体核型分析证实为完全嵌合状态。 3例ABO血型不一致者在移植后出现混合血型 ,最早 1例移植后 2个月转变为供体的血型 ,有 1例移植后 7个月持续呈混合状态。结论 PCR扩增VNTR片段评估allo PBSCT后的嵌合状态具有方法简便、灵敏度高的优点 ,特别适合供受体间性别、血型、HLA配型完全相同的异基因造血干细胞移植。
- 王建增王健民章卫平童书鹏周虹
- 关键词：造血干细胞移植白血病
- D-氨基酸氧化酶/D-丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨被引量：7
- 2002年
- 目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并用酚红氧化法测定培养上清 H2 O2 和 L owry法测定细胞蛋白数量 ,流式细胞仪测定细胞 GFP的荧光强度。结果 :在 2 5 m mol/ L D-Ala作用下 2 4 h即可完全杀死 KDf Gd细胞 ,当 D- Ala为 2 0 mmol/ L 时延长作用时间至 4 8h,杀伤率由 6 4 %增加至 96 .8% ,而D- Ala≤ 15 mm ol/ L 时杀伤率增加不明显。低于 2 0 m mol/ L,D- Ala对 K5 6 2 e几乎无杀伤作用。培养上清的 H2 O2 变化与杀伤转基因细胞作用相一致。 结论 :DAAO/ D- Ala系统可能是通过产生 H2 O2 发挥杀伤转基因 K5 6 2
- 翟勇平王健民张雨生吕书晴
- 关键词：D-氨基酸氧化酶过氧化氢白血病
- DAAO/D-Ala系统对高致瘤性K562e细胞体外杀伤效应及其机制的研究被引量：8
- 2002年
- 目的 研究D 氨基酸氧化酶 (DAAO) /D 丙氨酸 (D Ala)自杀基因系统在基因治疗中的应用。方法 应用逆转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K5 6 2e单克隆细胞KDfGC,用PCR、原位杂交技术对DAAO基因修饰的KDfGC细胞进行鉴定 ;通过细胞形态、活细胞计数观察细胞生物学特性 ;应用MTT法检测D Ala对KDfGC、不同比例DAAO表达阳性与阴性混合细胞的杀伤作用 ;用酚红氧化法测定培养上清H2 O2 水平。结果 PCR和原位杂交分析证明DAAO基因已整合至细胞基因组中 ,并在mRNA水平表达。KDfGC与未转基因的原肿瘤细胞相比 ,生长速度差异无显著性。 12 .5mmol/LD Ala作用 2 4h即可杀死近 90 %的KDfGC细胞 ,而且D Ala达到一定有效浓度杀伤效率可成倍提高。上清的H2 O2 产生水平与杀伤转基因细胞作用相一致。KDfGC与不同比例的K5 6 2e细胞混合时 ,被 15 .0mmol/LD Ala杀死的细胞比例不超过KDfGC细胞的比例。结论 DAAO/D Ala系统可有效杀伤K6 5 2e白血病细胞 。
- 王健民翟勇平张雨生周虹韩凤来
- 关键词：基因表达K562细胞系杀伤效应
- 细胞因子在急性移植物抗宿主病中的作用被引量：10
- 2000年
- 急性移植物抗宿主病 (aGVHD)是异基因造血干细胞移植的主要并发症 ,严重限制其应用。细胞因子网络在aGVHD的发病中起重要作用 ,其作用机制在小鼠模型中已经得到清楚的阐述 ,而人类aGVHD的发病机制尚需进一步探讨。动态监测移植后血清细胞因子sIL 2R ,TNF α和IFN γ等的表达或检测移植前细胞因子的基因表达可以对aGVHD进行预测 ,从而有助于采取针对性的预防措施。GVHD有移植物抗白血病作用 (GVL)。GVHD和GVL是可分的。细胞因子IL 2 ,IL 12 ,IL 11,KGF和G
- 居小萍王健民
- 关键词：细胞因子急性移植物抗宿主病移植物抗白血病
- 可溶性白细胞介素2受体在急性移植物抗宿主病诊断中的意义被引量：5
- 2002年
- 目的 研究造血干细胞移植后细胞因子及其受体水平的变化与急性移植物抗宿主病(aGVHD)的关系 ,以探讨预测aGVHD的临床指标。方法 30例血液病患者行异基因造血干细胞移植 ,采用双夹心酶联免疫吸附法 (ELISA)动态监测血清中可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)、白细胞介素 6、白细胞介素 8、干扰素及肿瘤坏死因子水平的变化。结果 30例患者均获得造血重建 ,10例发生Ⅰ度GVHD ,5例发生Ⅲ～Ⅳ度GVHD ;sIL 2R在发生aGVHD组于移植后第 2周上升 ,第 3周达峰值 ,其升高早于aGVHD症状的出现 ,与疾病的严重程度显著相关 ,随症状的缓解而下降 ;其它细胞因子水平的变化不显著 ,与aGVHD的发生无明显关系。结论 造血干细胞移植后aGVHD的发生伴随某些细胞因子水平的变化 ,sIL 2R在aGVHD症状出现前明显上升 。
- 居小萍王健民章卫平童书鹏许燕群龚胜蓝
- 关键词：移植物抗宿主病细胞活素类SIL-2R
- 小鼠T细胞HS-Vtk基因转移及其对GCV敏感性的实验研究被引量：3
- 2000年
- 冯曹波王健民章卫平周虹
- 关键词：移植物抗宿主病T细胞基因转移
- D-Ala对转染DAAO基因的K562e细胞移植瘤的杀伤效应被引量：2
- 2002年
- 以高致瘤性K5 6 2e细胞和表达DAAO基因的KDfGC细胞建立裸鼠移植瘤模型 ,D 丙氨酸 (D Ala)腹腔注射 ,持续 3周 ,观察D Ala对移植瘤的治疗作用以及肿瘤、裸鼠重要脏器的病理变化。结果显示 ,经D Ala治疗 ,转基因肿瘤抑制率为 5 3 8% ,未转基因肿瘤抑制率为 0 3%。治疗组KDfGC细胞瘤体出现围绕血管分布的坏死。心、肝、肾治疗组与对照组均无明显病理改变。说明在体内DAAO+的K5 6 2e能被D Ala有效杀伤 。
- 翟勇平王健民吕书晴张雨生
- 关键词：移植瘤动物实验
- D-氨基酸氧化酶基因重组逆转录病毒载体的构建及表达被引量：1
- 2001年
- 目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将重组逆转录病毒感染K5 6 2白血病细胞 ,G418筛选出抗性克隆 ,命名为KDAAO。PCR、原位杂交分析外源基因整合和表达 ,观察 5 0mm/LD 丙氨酸对KDAAO杀伤作用。结果 :经酶切鉴定和DNA测序证明重组逆转录病毒载体中含有完整的DAAO基因。包装细胞产生了高滴度病毒 (5 .2× 10 6CFU/ml)。PCR、原位杂交分析证明DAAO基因已整合至KDAAO基因组中 ,并在mRNA水平表达。初步观察到D 丙氨酸能明显杀伤KDAAO。结论
- 翟勇平王健民周虹张雨生
- 关键词：逆转录病毒载体白血病细胞系D-氨基酸氧化酶
