浙江省自然科学基金(399125)
- 作品数：3 被引量：7H指数：2
- 相关作者：陈莉丽严杰孙伟莲庄春燕吴梦婕更多>>
- 相关机构：浙江大学医学院附属第二医院浙江大学温州医科大学更多>>
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- 牙龈卟啉单胞菌临床菌株fimA基因变异性和表达频率及其重组表达产物的致炎作用被引量：2
- 2005年
- 目的了解牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)fimA基因变异性,构建fimA基因原核表达系统,鉴定其表达产物(rFimA)的致炎作用,检测FimA在Pg临床菌株中表达频率,了解FimA与慢性牙周炎的关系。方法采用高保真PCR从6株Pg临床菌株中扩增fimA基因并测定其核苷酸序列。构建fimA基因原核表达系统,制备rFimA兔抗血清。采用Western blot鉴定rFimA抗原性和免疫反应性。建立ELISA检测38株Pg临床菌株FimA表达情况和97例慢性牙周炎患者212份龈下菌斑标本中的FimA。检测rFimA诱导人脐静脉内皮EVC-304细胞分泌IL-1I、L-8、TNF-α和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的作用。结果6株Pg临床菌株fimA基因核苷酸序列完全相同。所构建的原核表达系统rFimA产量高达细菌总蛋白的50%左右。rFimA可与Pg全菌抗血清发生结合反应,免疫家兔可获得高效价抗体。94.7%(36/38)菌株和91.5%(194/212)龈下菌斑标本ELISA结果阳性。1和10μg的rFimA作用EVC-304细胞48 h,其分泌的IL-1α水平升高(P<0.05);但作用12 h即可出现高水平的ICAM-1(P<0.05),未发现有诱导IL-8和TNF-α的作用(P>0.05)。结论fimA基因序列保守,在Pg临床菌株中有很高的表达频率。rFimA有良好的抗原性和免疫反应性,可作为Pg血清学检测试剂盒和Pg疫苗的候选抗原。rFimA有较强的诱导细胞分泌ICAM-1的作用。
- 陈莉丽吴梦婕严杰
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌克隆表达致炎作用
- 慢性牙周炎龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌胶原酶水平与牙周病变程度的关系被引量：2
- 2006年
- 目的检测慢性牙周炎(chronicperiodontitis,CP)患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis,Pg)胶原酶基因prtC及其产物PrtC,了解PrtC水平与牙周病变程度的关系,确定PrtC诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用。方法采用SDSPAGE检测原核表达系统重组PrtC(rPrtC)表达和NiNTA亲和层析法提取的rPrtC纯度。rPrtC免疫家兔获得抗血清。建立多重PCR检测56例CP患者209牙位的龈下菌斑标本中Pg16SrDNA和prtC基因。建立ELISA检测上述标本中的PrtC,并分析PrtC水平与牙周病变程度的关系。采用ELISA检测rPrtC诱导人脐静脉内皮细胞EVC304分泌IL1α、IL8和TNFα的作用。结果rPrtC表达产量约占细菌总蛋白的50%。提纯的rPrtCSDSPAGE后仅见单一的蛋白条带。96.1%(201209)和92.3%(193209)的龈下菌斑标本分别Pg16SrDNA和prtC基因PCR阳性,91.4%的龈下菌斑标本(191209)PrtCELISA阳性。重度CP龈下菌斑标本中PrtC含量明显高于轻度和中度CP标本(P<0.05),但轻度和中度、中度和重度CP标本之间PrtC含量差异无统计学意义(P>0.05)。1μg的rPrtC作用EVC304细胞24h后,5和10μg的rPrtC作用EVC304细胞12h后均可使EVC304细胞分泌的IL1α、IL8和TNFα水平明显增高(P<0.05)。结论Pg有很高的prtC基因携带率和表达率。CP牙周病变程度与龈下PrtC水平密切相关。rPrtC有直接诱导细胞合成并分泌IL1α、IL8和TNFα的活性。
- 楼永良陈莉丽胡美多阮萍严杰
- 关键词：慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌牙周病变
- 牙龈卟啉单胞菌菌毛相关外膜蛋白pgmA基因的克隆和表达被引量：3
- 2004年
- 目的 :克隆牙龈卟啉单胞菌 (Porphyromonasgingivalis,Pg) pgm A基因 ,构建 pgm A基因表达载体 ,鉴定其表达产物的免疫性。方法 :采用高保真 PCR分别从牙龈卟啉菌 ATCC332 77和 4 7A- 1菌株中扩增 pgm A基因 ,T- A克隆后测定核苷酸序列 ,构建 p ET32 a的 pgm A表达载体 ,在 E.coli BL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的 IPTG诱导表达 ,采用兔抗融合蛋白血清的 Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性 ,采用 ELISA检测 6 5株临床分离牙龈卟啉单胞菌与 Pgm A融合蛋白抗血清的反应情况。结果 :所克隆的牙龈卟啉单胞菌 ATCC332 77与 4 7A- 1菌株 pgm A基因的核苷酸序列同源性为 10 0 %,与报道的相应核苷酸序列同源性为 98.98%,氨基酸序列同源性高达99.18%。p ET32 a- pgm A- BL2 1DE3系统的 Pgm A融合蛋白表达量为细菌总蛋白的 5 0 %左右。Pgm A融合蛋白免疫家兔能获得相应抗体并与 Pgm A蛋白发生结合反应。 ELISA结果证实 92 .3%的牙龈卟啉菌临床菌株 (6 0 / 6 5 )能与Pgm A融合蛋白抗血清发生结合反应。结论 :本研究成功地构建了 Pg pgm A高效表达系统 ,所表达的 Pgm A融合蛋白有良好的免疫原性和免疫反应性 ,可作为 Pg检测试剂盒和 Pg疫苗的候选抗原。
- 庄春燕陈莉丽严杰孙伟莲
- 关键词：牙龈卟啉单胞菌PGMA克隆免疫学
