国家自然科学基金(81270502)
- 作品数：8 被引量：12H指数：2
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- 相关机构：上海交通大学附属第六人民医院江苏大学附属人民医院更多>>
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- 泛素化及自噬参与蛋白降解及抗原提呈的研究进展
- 2014年
- 细胞内所有的蛋白质都在不断的被降解，并被新合成的蛋白质所取代。真核细胞内主要有两条蛋白降解途径，分别为泛素一蛋白酶体系统途径和白噬途径，两条途径都在维持细胞内稳态方面起着重要的作用。泛素-蛋白酶体系统是由泛素介导的一种高度复杂的蛋白降解机制，它通过一种特定的方式降解并再循环利用细胞内的蛋白，而自噬是一种自我降解过程，它通过溶酶体介导的方式降解蛋白。被降解的蛋白可以被提呈至MHCⅡ类分子或MHCⅠ类分子，从而激发有效的T细胞反应。此文就这两个途径参与蛋白降解及抗原提呈的相关研究进展进行综述。
- 宋琳琳汤正好臧国庆
- 关键词：自噬泛素-蛋白酶体系统蛋白质降解抗原提呈
- 强制泛素化HBcAg重组慢病毒诱导特异性免疫反应抑制HBV复制的实验研究
- 目的：采用四质粒包装系统获得高滴度的携带强制泛素化HBcAg（Ub-HBcAg）融合基因的重组慢病毒颗粒，探讨重组慢病毒LV-Ub-HBcAg在BALB/c小鼠体内诱导HBV特异性体液及细胞免疫反应的效果，比较LV-Ub...
- 戴胜兰
- 关键词：泛素核心抗原慢病毒
- 文献传递
- 慢病毒载体在基因工程中的应用被引量：1
- 2014年
- 慢病毒载体可有效转导分裂和非分裂的细胞，将大型基因片段插入宿主细胞染色质并维持长期稳定的转基因表达，是应用广泛的基因转移载体。此文对慢病毒载体的发展及其在基因治疗、诱导多能干细胞、细胞成像、转基因动物及动物模型等基因工程方面的应用进行综述。
- 戴胜兰汤正好臧国庆
- 关键词：慢病毒属基因工程基因治疗
- 慢病毒介导稳定表达HBcAg的P815/c细胞株的建立及鉴定被引量：1
- 2017年
- 研究旨在建立稳定表达HBcAg的P815/c細胞株,为评价针对HBcAg的乙肝疫苗的免疫效果提供体外感染的细胞模型。通过构建携带HBcAg基因的慢病毒表达载体质粒pLenti-Ubc-HBcAg-EGFP-3FLAG4RES-Puro,载体质粒携帯有加强型绿色荧光蛋白(eGFP)及嘌呤霉素(Puromycin)抗性标记基因,与包装质粒pLP1、pLP2以及包膜质粒pLP/VSVG共转染人胚肾293T细胞进行包装,得到携帯有HBcAg基因的重组慢病毒颗粒LV-HBcAg-Puro。经纯化、鉴定后转染小鼠肥大瘤细胞株P815细胞72h后,通过加入并维持2μg/mL的嘌呤霉素杀死未被有效感染的细胞,药物筛选约10 d后,免疫荧光及流式细胞仪检测表达GFP的细胞比例在98%以上,Western Blot可检测到转染后细胞内HBcAg的蛋白表达。成功构建稳定表达HBcAg基因的细胞株P815/C,为研究小鼠体内针对HBcAg的疫苗诱发的CTL反应提供了细胞杀伤实验的靶细胞。
- 戴胜兰卓萌汤正好臧国庆
- 关键词：慢病毒乙型肝炎核心抗原
- 强制泛素化HBcAg融合基因重组慢病毒对小鼠体内细胞毒性T细胞的诱导作用被引量：1
- 2013年
- 目的观察强制泛素化HBcAg（Ub-HBcAg）融合基因重组慢病毒（Lv）对小鼠体内细胞毒性T细胞（cIL）的诱导作用。方法包装重组LV、Ub及HBcAs基因分别获得LV-HBcAg及LV-Ub-HBcAg融合基因；选取Balb／c小鼠32只，分为磷酸盐缓冲液组（PIGS组，4只，200vLPBS）、LV组（4只，200uL PBS和2×107拷贝LV的混悬液）、慢病毒HBc鲰融合基因组（LV-HBcAg组，12只，200vLPBS和2X107拷贝LV-HBcAg的混悬液）、慢病毒Ub-HBcAg融合基因组（LV-Ub-HBcAs组，12只，200t,LPBS和2X107拷贝LV-Ub-HBcAg的混悬液），所有组别的小鼠均采用尾根部皮内注射。免疫后提取小鼠T细胞，流式细胞术双标法检测胞内IFN-γ水平，ELISA法检测T细胞培养液上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的分泌水平，CCK-8试剂盒检测T细胞增殖反应。结果LV-Ub-HBcAg组诱导的CTL数量高于LV-HBcAg组（t=2．30，P〈0．05）；LV-Ub-HBcAg组T细胞的增殖反应强于LV-HBcAg组（t=2．25，P〈0．05）；免疫后LV-Ub-HBcAg组分泌的IFN-γ（44．57±2．91pg／mL）和IL-2（152．77±12．39pg／mL）高于LV-HBcAg组分泌的IFN-γ（37．23±0．84pg／mL）和ID2（101．24±5．09pg／mL），差异均有统计学意义（t=2．12、2．66，P〈0．05），LV-Ub-HBcAg组和LV-HBcAg组细胞因子Ⅱ，4和IL-10分泌差异无统计学意义（t=0．83、1．00，P〉0．05）。结论LV-Ub-HBcAg能够有效刺激T细胞增殖、活化，促进Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的分泌。抗原强制泛素化能够促进抗原蛋白的有效提呈，诱导更高水平的免疫应答。
- 周丽芹卓萌陈小华余永胜臧国庆汤正好
- 关键词：CTL泛素
- CTP-HBcAg_(18-27)-Tapasin融合表达载体的构建及其表达和纯化被引量：2
- 2013年
- 目的构建CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合基因表达质粒并分离、纯化融合蛋白。方法以质粒pCMV-SPORT6中Tapasin基因为模板,设计一对引物,上游引物带有融合基因CTP-HBcAg18-27序列,进行PCR反应;PCR产物回收纯化克隆到质粒pREST-B中,双酶切及测序鉴定;将鉴定正确的质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达;镍柱亲和层析法纯化融合蛋白;Western blotting鉴定融合蛋白。结果由质粒pCMV-SPORT6 PCR扩增得到1 480 bp大小的条带,为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合序列;将其克隆到表达质粒pREST-B后经酶切、测序结果正确;表达质粒转化DE3后成功表达,经纯化得到52.3 KD的蛋白;Western blotting鉴定为CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合蛋白。结论成功构建了CTP-HBcAg18-27-Tapasin融合表达质粒,并成功表达,为进一步研究此融合蛋白的功能提供了实验基础。
- 刘红红陈小华周丽芹刘雪妮余永胜臧国庆汤正好
- 关键词：CTPTAPASIN融合蛋白
- CTP-Ub-HBcAg原核表达载体的构建及其表达被引量：1
- 2014年
- 目的构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白的表达。方法以质粒pcDNA3.1(-)-Ub-HBcAg中的Ub-HBcAg融合基因为模板设计引物,上游引物带有CTP基因序列,进行PCR扩增,PCR产物克隆到原核表达质粒pMAL-c2x中,菌落PCR阳性克隆测序鉴定,鉴定正确的质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并进一步通过直链淀粉树脂亲和层析法纯化融合蛋白,Western blotting鉴定。结果 PCR扩增得到820 bp大小的条带,为CTP-Ub-HBcAg融合序列。该序列被克隆至表达质粒pMAL-c2x中,阳性克隆菌落测序正确,并在DE3中获得诱导表达。Western blotting鉴定为70 KD的CTP-Ub-HBcA融合蛋白。结论构建CTP-Ub-HBcAg原核表达载体并成功表达,为进一步研究该融合蛋白的功能提供了实验基础。
- 宋琳琳卓萌唐余燕陈小华余永胜汤正好臧国庆
- 关键词：CTPHBCAG融合蛋白
- 乙型肝炎病毒感染者体内树突细胞及树突细胞疫苗研究现状
- 2012年
- 树突细胞（DC）是目前已知功能最强的专职抗原提呈细胞（APC），为当前抗肿瘤、抗病毒等疾病免疫治疗研究的热点。近年来，对DC疫苗的探索和研究为多种疾病的免疫治疗提供了新的治疗前景。此文就DC在慢性乙型肝炎中的研究现状进行综述。
- 周丽芹汤正好
- 关键词：树突细胞DC疫苗肝炎乙型
