目的探讨沉默HBx基因对HepG2.2.15细胞脂质代谢相关基因表达的影响。方法设立空白对照组(HepG2.2.15细胞)、阴性对照组(HepG2.2.15细胞转染阴性HK质粒)、shHBx转染组(HepG2.2.15细胞转染shHBx质粒)和HepG2组(HepG2细胞)。构建针对HBx基因的shHBx质粒,转染HepG2.2.15细胞,荧光显微镜及Western blot检测转染质粒24～96 h绿色荧光蛋白和HBx蛋白的表达以确定质粒的最佳干扰时间,根据结果予油酸钠刺激细胞,甘油三酯(TG)检测细胞脂肪变程度,RT-PCR检测固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)mRNA的表达,Western blot检测肝X受体α(liver x receptor alpha,LXRα)及脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)蛋白的表达。结果成功构建shHBx质粒并转染HepG2.2.15细胞;与空白对照组和阴性对照组比较,shHBx转染组HBx蛋白表达明显下降,于转染后48～72 h表达最低[(0.337±0.042)vs(0.577±0.032),(0.333±0.032)vs(0.654±0.049),P<0.01],差异有统计学意义;随着油酸钠处理时间延长,各组TG含量、SREBP-1c mRNA水平、LXRα和FAS蛋白表达均逐渐增加,与空白对照组和阴性对照组比较,同一时间点,shHBx转染组和HepG2组中表达较低[TG:(26.51±1.98)μg/mgvs(37.16±6.32)μg/mg;SREBP-1c:0.418±0.051 vs 0.516±0.037;LXRα:0.463±0.047 vs 0.630±0.026;FAS:0.463±0.047 vs 0.630±0.017,P<0.01],差异有统计学意义,而shHBx转染组与HepG2组相比水平近似,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HBx在HepG2.2.15细胞脂变中具有重要作用,可能通过调节LXRα、FAS、SREBP-1c表达影响肝细胞脂代谢。
