国家自然科学基金(30771608)
- 作品数：4 被引量：23H指数：3
- 相关作者：余旭平于洪涛竺春郑新添刘晓宁更多>>
- 相关机构：浙江大学龙岩学院杭州市畜牧兽医局更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 羊抗鸡酶标二抗用于鹅血清抗体检测的研究被引量：4
- 2010年
- 通过比较鸡IgG与鹅IgG的相似性,探讨羊抗鸡酶标二抗用于检测鹅血清抗体的可行性。用辛酸-硫酸铵盐析法提纯鸡、鸭、鹅、小鼠、兔、猪、羊的IgG,比较上述动物IgG粗提物的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱,并用蛋白免疫转印法定性检测上述动物血清IgG与羊抗鸡酶标二抗的结合情况;然后用直接ELISA方法分析不同动物血清分别与抗鸡酶标抗体和抗鹅酶标抗体结合程度的差异;最后用间接ELISA方法比较两种酶标抗体对同一鹅群大肠杆菌抗体的检测结果。结果表明,鸡、鸭、鹅IgG具有较大的相似性,都能够与抗鸡酶标二抗结合;羊抗鸡酶标二抗可以替代抗鹅酶标二抗来检测鹅的血清抗体。
- 于洪涛胡东建余旭平
- 关键词：酶联免疫吸附试验
- 鹅圆环病毒重组核衣壳蛋白的原核表达被引量：8
- 2008年
- 根据已发表的鹅圆环病毒GoCV-yk1株的序列,设计引物扩增出全长核衣壳蛋白基因(Cap),用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达载体pET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳检测未见到目的蛋白条带。应用生物信息学分析确定Cap蛋白的核定位信号区域,新设计一对引物扩增出不包含核定位信号序列编码区的核衣壳蛋白基因,将截短Cap基因克隆入pET-28a进行融合表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot检测,截短Cap蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为27.6ku,表达产物以包涵体形式存在,其表达量可以达菌体总蛋白的18.3%。截短Cap蛋白的高效表达为鹅圆环病毒ELISA检测方法的建立和进一步开展GoCV致病性及其免疫机制的探索奠定了基础。
- 余旭平胡东建郑新添竺春刘晓宁于洪涛
- 关键词：圆环病毒核衣壳蛋白基因核定位信号原核表达
- 鸽圆环病毒浙江株全基因组的克隆及序列分析被引量：10
- 2009年
- 鸽圆环病毒（Pigeon circovrius,PiCV）是圆环病毒科的一个成员,是一种免疫抑制性病原,鸽子感染圆环病毒后可以出现昏睡、嗜眠、厌食、体重减轻、呼吸窘迫等症状。本研究应用建立的PCR方法,检测了从浙江省5个鸽场采集的样品,结果在杭州某鸽场检测到阳性。进一步设计引物分段PCR扩增、克隆并测定了2株鸽圆环病毒的全基因组序列,分别命名为PiCV-zj1和PiCV-zj2,序列的GenBank登录号为DQ090945和DQ090944。基因组序列分析表明,PiCV-zj1及PiCV-zj2全长均为2039bp,具有圆环病毒共同的与病毒复制相关的茎环结构和Rep蛋白保守基序等特征,与已发表的国外11株鸽圆环病毒序列在全基因组核苷酸水平有86%~89.1%的同源性,在Rep和外壳蛋白的氨基酸水平分别有92.1%~94.7%和76.6%~81.4%的同源性。应用PHYLIP方法作进化树分析并应用bootstrap重复1000次进行检验,结果显示：10个欧美株组成一个大的分支,而浙江株和澳洲株各自独立分支。这是我国首次检测确认鸽圆环病毒的存在,并测定了2株PiCV病毒的全基因组序列。
- 余旭平竺春郑新添母安雄于洪涛
- 关键词：圆环病毒全基因组序列
- 鹅圆环病毒竞争PCR检测方法的建立被引量：3
- 2013年
- 建立了基层临床定量检测鹅圆环病毒DNA的竞争PCR方法。以含有鹅圆环病毒(GoCV)全长基因组的pMDT-GoCV-yk01质粒为模板,PCR扩增出长度为625 bp的片段,克隆到pGEM-T Easy载体,获得目标模板,命名为pGoCV625-T;同时,构建与目标模板DNA有相同引物结合区、扩增片段长度为300 bp的竞争模板,克隆于pMD18-T,获得竞争模板,命名为pGoCV300-T。用定量竞争模板pGoCV300-T与系列倍比稀释的定量目标模板pGoCV625-T进行竞争PCR扩增,利用二者PCR产物的荧光强度(IOD)比值与目标模板浓度对数值间的关联性建立标准竞争曲线,推算出直线回归方程,建立GoCV竞争PCR方法。结果表明,竞争模板与目标模板共扩增的最低检测限为1.0μl1.0×104拷贝。初步应用试验结果表明,该方法可定量检测GoCV阳性鹅法氏囊组织中的GoCV DNA。
- 林蕾袁海霞田敬郭婧刘晓宁孙红霞余旭平
