浙江省自然科学基金(LY12H10004)
- 作品数：7 被引量：28H指数：3
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- 相关机构：温州医学院附属第一医院温州医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 同时检测人多瘤病毒和巨细胞病毒PCR技术的建立及在肾移植受者中的初步应用被引量：2
- 2013年
- 建立同时检测人多瘤病毒(BKV)和巨细胞病毒(CMV)载量的实时定量荧光PCR技术(FQ-PCR),并探讨其在肾移植术后感染监测中的应用。选择BKV和CMV核酸保守性序列作为靶基因,PCR扩增靶片段与质粒pcD-NA3.1(+)连接。通过测序技术对进行克隆筛选。提取质粒并采用10倍梯度稀释(5×103～107拷贝/mL)作为BKV和CMV核酸序列的标准品,并评价其灵敏度;采用对比正常人DNA、BKV阳性质控和CMV阳性质控评价其特异性;通过对标准品DNA分别进行批内和批间各20次重复实验,以其循环阈值(Ct)的变异系数(CV)评价其精密度。对480例肾移植受者外周血样本,进行FQ-PCR检测BKV和CMV DNA拷贝数,检测FK506血药浓度,并对两者进行相关性分析。重组质粒经测序检测显示含有靶BKV和CMV核酸序列。所建立的FQ-PCR方法,其最低检测下限均为5.0×103拷贝/mL的DNA标准品。正常人DNA的BKV和CMV拷贝数检测为阴性,而阳性对照能够发现荧光值显著变化,证实为针对靶DNA的特异性扩增;重复性检测显示批内差异分别为3.44%(BKV)和2.23%(CMV),批间差异分别为4.98%(BKV)和3.76%(CMV)。肾移植患者CMV感染的阳性率为27.08%(130/480),明显高于BKV的阳性率(13.33%,64/480,P<0.05),并且感染程度与免疫抑制剂FK506用量呈正相关。建立的同时检测BKV和CMV两种病毒载量的FQ-PCR方法具有快速、重复性好、灵敏的优点,可为临床监测肾移植术后病毒感染提供技术平台。
- 张纯武陈孝倩白永恒潘晓东王斯璐蔡勇夏鹏吴存造陈必成
- 关键词：巨细胞病毒多瘤病毒荧光定量PCR肾移植
- 基因分型方法在ABO疑难血型鉴定中的应用被引量：8
- 2013年
- 目的:探讨基因分型方法在ABO疑难血型鉴定中的临床应用。方法:通过序列特异性聚合酶链扩增技术(PCR-SSP)和基因测序对10例ABO疑难血型标本进行基因分型。同时以610例ABO血型正反定型结果相符标本作为基因分型对照组。结果:10例ABO正反定型结果不符的ABO疑难血型标本需通过高分辨的基因分型,发现为cis-AB01 3例、B(A)04 2例,cis-AB02、B(A)02、Bel03、Bw12和Ael05各1例,与基因测序比对结果一致。610例ABO血型正反定型结果相符标本的基因分型结果与血清学定型结果完全相符,ABO基因分型为A型占28.69%,B型占27.54%,AB型占8.2%,O型占35.57%;其中以O1型基因频率最高占32.87%,A2最低0.66%。结论:PCR-SSP分型可用于ABO血型的鉴定,而且可以了解亚型;针对稀有血型的PCR-SSP和测序方法对稀有疑难血型的确认起决定性作用。
- 张纯武王本泉刘彪谢作听吴存造张行蔡勇夏鹏陈必成
- 关键词：ABO血型基因型测序
- 药物代谢酶CYP3A5基因多态性与肾移植术后他克莫司和环孢素A早期临床疗效的相关性被引量：7
- 2014年
- 目的研究细胞色素P-450酶(CYP)家族中CYP3A5基因多态性与肾移植术后他克莫司(Tac)和环孢素A(Cs A)早期临床疗效的相关性,为其个体化治疗提供依据。方法选取2012.08-2013.04期间肾移植受者74例,其中术后口服给予Tac+吗替麦考酚酯胶囊(MMF)+甲泼尼松龙三联用药的43例,给予Cs A+MMF+甲基强的松龙三联用药的31例。术前应用序列特异性引物-PCR(SSP-PCR)检测受者CYP3A5基因型;分别采用ELISA和化学发光法检测全血Tac和Cs A浓度,监测术后2周及1,2,3和6个月血药浓度/剂量比(c/D);同时用己糖激酶法检测血糖、肌酐酶法检测肌酐、尿素酶法检测尿素氮和尿酸酶法检测尿酸水平。结果 74例肾移植受者中,CYP3A5*1/*1型占9.5%,CYP3A5*1/*3型占48.6%,CYP3A5*3/*3型占41.9%。按其表型可分为CYP3A5表达型(包括CYP3A5*1/*1型和CYP3A5*1/*3型)和不表达型(CYP3A5*3/*3型),分别占58.1%和41.9%。Tac受者中CYP3A5表达型在术后2周及1,2,3和6个月时c/D中位值分别为25.49,49.64,53.72,51.93和44.5;CYP3A5不表达型受者则分别为65.48,100.84,99.54,123.01和133.21;前者均明显低于后者(P<0.05)。对于CYP3A5不表达型受者,Tac的起始剂量(0.1 mg·kg-1)偏大,术后早期肾功能恢复较表达型慢,存在一定的肾毒性损伤。而CYP3A5基因型与Cs A疗效无明显相关性,Cs A受者上述各时间点血药浓度、血糖、肌酐、尿素氮和尿酸等CYP3A5表达型和CYP3A5不表达型均无显著性差异。结论 CYP3A5不表达型受者使用常规Tac 0.1 mg·kg-1的起始剂量存在一定程度的药物过量,CYP3A5表型是影响Tac肾移植术后受者早期疗效的因素之一。而CYP3A5基因型与术后早期Cs A的疗效无相关性。
- 潘晓东陈文伟倪晓洁王瑾珺吴存造蔡勇夏鹏郑少玲陈必成
- 关键词：肾移植细胞色素P450CYP3A5他克莫司环孢素A
- HLAMatchmaker软件在HLA配型中的应用原理及前景被引量：2
- 2013年
- 随着分子生物学技术的发展,HLA基因序列、氨基酸序列及蛋白质晶体空间结构逐步明确,使得可以运用计算机生物信息方法在移植术前HLA配型中发挥更为有效的作用。HLAMatchmaker软件是基于Excel软件开发,通过对供、受者HLA抗原氨基酸序列上的eplets进行比较,寻找合适的供者,提高移植术后受者生存率。运用此软件分析可避开基因错配位点,让群体反应性抗体高敏感性受者亦能接受移植。本文就HLAMatchmaker软件在HLA配型中的应用原理及前景展开综述。
- 张行潘晓东陈文伟吴存造蔡勇夏鹏杨亦荣郑少玲陈必成
- 关键词：HLAMATCHMAKER表位群体反应性抗体
- 他克莫司对肾移植受者血脂的影响及其与GNB3基因C825T多态性的相关性研究被引量：8
- 2014年
- 目的研究他克莫司血药浓度对肾移植受者血脂的影响及其与G蛋白β3亚单位（GNB3）基因825T等位基因（GNB3C825T）多态性的相关性。方法81例肾移植受者依据他克莫司浓度分为普通浓度组（31例）和低浓度组（50例），免疫抑制方案均为联合应用甲泼尼龙（MP）、他克莫司、吗替麦考酚酯（MMF）及巴利昔单抗。统计受者移植后1、3、6和12个月的血清总胆固醇和甘油三脂水平；并且利用快速的序列特异性聚合酶链反应方法检测人GNB3C825T单核苷酸多态性，分析GNB3C825T多态性与他克莫司治疗后高血脂发生率的关系。结果两组术前总胆固醇和甘油三酯水平的差异无统计学意义（P〉0．05），排除发生急性排斥反应的受者后，两组术后3、6、12个月时甘油三脂水平的差异有统计学意义（P〈0．05），两组血胆固醇水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。81例中，T／C基因型者高甘油三脂血症发生率为22．0％（9／41），C基因型者为27．3％（6／22），T基因型者为33．3％（6／18），高甘油三脂血症发生情况与GNB3基因多态性无明显相关（P=0．647）。结论他克莫司影响。肾移植术后的甘油三酯水平，与其浓度正相关；高甘油三脂血症发生率与GNB3C825T单核苷酸多态性相关不显著。
- 吴存造杨亦荣潘晓东郭勇倪晓洁孙贤斌夏鹏
- 关键词：肾移植他克莫司高胆固醇血症高甘油三酯血症
- 移植受者人巨细胞病毒感染研究进展被引量：1
- 2013年
- 人巨细胞病毒(HCMV)是移植术后受者最易感染的机会性病毒之一。随着新型免疫抑制剂和抗病毒药物的研发,以及预防治疗和预先治疗的广泛应用,移植受者HCMV感染情况已经发生了显著变化。但HCMV感染仍然是引起移植受者近期和远期病变和死亡的重要因素。本文对HCMV感染基础研究、诊断技术和治疗的最新进展进行了综述。
- 梁勇潘晓东吴存造陈必成
- 关键词：人巨细胞病毒
- FK506对肝移植术后血脂影响及高脂血症和GNB3基因C825T多态性的关系被引量：1
- 2014年
- 目的研究不同FK506血药浓度对肝移植术后血脂的影响及术后高脂血症发生与GNB3 C825T多态性的关系。方法将58例乙肝后肝硬化肝移植患者依据FK506浓度分为高浓度(A组)和低浓度(B组),统计患者肝移植术后1、3、6、12个月血清总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)的水平,评价FK506浓度差异对术后血脂的影响;并利用快速的序列特异性聚合酶链反应(SSP-PCR)方法,检测人GNB3 C825T单核苷酸多态性,分析GNB3 C825T多态性与肝移植FK506治疗后高血脂发生率的相关性。结果两组患者组内术前与术后1年的TG水平差异有统计学意义(A组P<0.001,B组P=0.049),而TC水平差异无统计学意义(A组P=0.060,B组P=0.436)。两组术后1年的TG水平差异显著(P=0.002),但两组高血脂发生率及TC水平差异不显著(P分别为0.207和0.317),GNB3 C825T多态性与FK506治疗后高血脂发生率相关不显著(P=0.91)。结论 FK506影响肝移植术后TG的水平并与其浓度正相关;术后1年高脂血症发生率与FK506血药浓度不显著,与GNB3 C825T单核苷酸多态性相关也不显著。
- 吴存造廖毅杨亦荣郭勇孙贤斌陈必成夏鹏
- 关键词：普乐可复G蛋白Β3亚单位血脂
