天津市自然科学基金(11JCZDJC20800)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：陈伟强赵小玲陈敏芳闫俊孙思明更多>>
- 相关机构：军事医学科学院河北联合大学南方医科大学更多>>
- 发文基金：天津市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗日本血吸虫Sjp40鸡卵黄抗体的制备及其生物学特性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的制备抗日本血吸虫蛋白(Sjp40)鸡卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin Y,IgY),以期为日本血吸虫病的免疫学诊断提供一种特异性强、灵敏度高的优势抗体。方法以纯化的Sjp40抗原免疫健康SPF级产蛋鸡,初次免疫2周后开始每日收集的鸡蛋为样本,采用水稀释硫酸铵沉淀法从鸡蛋中初步提取抗Sjp40 IgY,进一步经透析袋、DEAE-FF阴离子交换柱纯化IgY。用SDSPAGE、Western Blot及ELISA对纯化后的抗Sjp40 IgY进行分析鉴定。结果纯化的特异性抗Sjp40IgY,抗体效价1∶106。相对分子质量为180 kDa,SDS-PAGE可见有2条主要蛋白带,分别约为66kDa和35 kDa,并可被Sjp40特异性识别。结论成功制备具有良好免疫反应性、特异性强、灵敏度高的抗Sjp40特异性IgY抗体。
- 闫俊赵小玲陈伟强孙思明周晓红陈敏芳张艳淑
- 关键词：卵黄抗体日本血吸虫病
- 抗TNF-α骆驼化人源sdAbs库的构建及筛选
- 2013年
- 目的探索有效的抗体稳定性改构策略,筛选制备抗肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)稳定、高亲和力人源抗体。方法基于定点突变技术和核糖体展示技术,对人源抗体片段VH进行骆驼化稳定性改构,构建骆驼化人源单域抗体(single-domain antibodyies,sdAbs)库,以TNF-α作为筛选抗原,筛选特异骆驼化人源sdAbs。结果以前期构建的人源VH/K基因库为模板扩增VH基因;采用定点突变方法,将VH基因FR2中的4个疏水性氨基酸突变为亲水性氨基酸构建人源骆驼化sdAbs基因库;基于核糖体抗体库技术,构建用于核糖体展示的sdAbs基因库;经体外转录翻译后,以重组TNF-α作为筛选抗原,采用亲和富集法淘选特异性抗体基因;将筛选富集mRNA的RT-PCR基因产物克隆,并在原核系统pET-22b(+)/BL21(DE3)中实现可溶性表达,表达产物经ELISA鉴定,确认具有极高ELISA值的阳性克隆12、40,其序列分析表明是全新的抗TNF-α人源sdAbs;抗原特异性结合活性实验显示两者均可以特异性识别TNF-α,而不能与狂犬病毒糖蛋白和BSA结合,表明它们是特异针对TNF-α的人源基因工程抗体,而且均有很好的抗原浓度依赖性。结论该研究将抗体稳定性的定向改造法和进化方法相结合,筛选得到了具有较好抗原特异性和良好稳定性的人源抗体,为稳定性人源抗体的制备提供了理论依据及技术基础。
- 王俪蒙陈伟强张素娟王尚王静王涛乔海晅赵小玲
- 关键词：人源抗体单域抗体肿瘤坏死因子Α
