国家公益性行业科研专项(201003012)
- 作品数：16 被引量：83H指数：5
- 相关作者：程龙飞万春和陈红梅施少华傅光华更多>>
- 相关机构：福建省农业科学院中国农业科学院上海兽医研究所扬州大学更多>>
- 发文基金：国家公益性行业科研专项国家现代农业产业技术体系建设项目福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸿雁源鸭甲肝炎病毒Ⅰ型的分离与鉴定被引量：3
- 2012年
- 为了对一起死亡率高达91．3％、急性死亡的鸿雁病例进行病原学分析，通过细菌分离排除法和病毒分离方法获得致鸭胚死亡病毒（暂命名为FJ-017株）。该病毒无血凝活性，用鹅细小病毒、番鸭细小病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭甲肝炎病毒1型、鸭瘟病毒、鸭坦布苏病毒特异引物分别进行扩增，电泳结果显示，仅鸭甲肝炎病毒1型引物可扩增出条带。将扩增产物回收后克隆，序列分析表明FJ-017株与22株DHAV-1参考株的同源率为93．5％-99％，而与DHAV-2和DHAV-3参考株的同源性均为79．9％。遗传进化分析表明FJ-017株与DHAV-1关系密切，在进化树中共处一分支，表明FJ-017株为鸭甲肝炎病毒1型，此为国内外首次报道。
- 施少华陈红梅陈珍傅光华万春和程龙飞黄瑜
- 关键词：鸿雁
- 番鸭源小鹅瘟病毒和番鸭细小病毒的结构蛋白及其抗原性被引量：9
- 2015年
- 应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP1、VP2和VP3三种结构蛋白均可被同源抗血清识别,而异源抗血清均不能识别VP1蛋白;免疫番鸭血清和感染耐过番鸭血清识别的条带无明显区别.可见,MDGPV和MDPV的抗原性差异主要体现在VP1蛋白上.
- 刘伟刘伟程晓霞
- 关键词：番鸭细小病毒结构蛋白抗原性
- 乌鬃鹅α干扰素基因的克隆及生物信息学分析被引量：2
- 2013年
- 采用RT-PCR方法从乌鬃鹅肝脏中扩增α干扰素(Interferon,IFN-α)基因片段,将扩增片段克隆到pMD18-T载体上,经PCR和双酶切鉴定为阳性后进行序列测定,并用生物信息学软件Lasergene v7.1 DNAStar和在线分析方法对IFN-α基因的核苷酸序列及其氨基酸序列进行了生物信息学分析,同时与GenBank中登录的鸡、鸭和鹅IFN-α基因核苷酸序列进行同源性比较分析。结果表明,所扩增的IFN-α基因编码完整的开放阅读框,基因长度为576 bp,与鸡、鸭与鹅IFN-α基因核苷酸序列同源性在72.0%～99.7%,遗传进化树显示鸡、鸭、鹅IFN-α因在遗传进化上各处一支。乌鬃鹅IFN-α基因的克隆及生物信息学分析为进一步研究鹅干扰素抗病毒的作用机理奠定基础。
- 陈红梅万春和程龙飞傅光华施少华傅秋玲黄瑜
- 关键词：克隆生物信息学分析
- 鹅源坦布苏病毒的分离及初步鉴定被引量：21
- 2012年
- 从表现神经症状、软脚的雏鹅中分离到1株病毒,暂命名为GD06株,经RT-PCR检测初步认定所分离到的病毒为坦布苏病毒。序列分析表明,GD06株与鹅源坦布苏病毒JS804株的核苷酸同源性高达99.8%,与鸭源坦布苏病毒(WR株、BYD-1株和SD株)核苷酸同源性分别为99.1%、99.8%和99.8%;与鸡源坦布苏病毒FQ-C1株的同源率高达98.5%;与坦布苏病毒和以色列火鸡脑膜炎病毒的同源性分别为88.3%和76.1%,系统进化分析表明,GD06株病毒与坦布苏病毒共处同一分支。
- 施少华傅光华万春和程龙飞陈红梅黄振洲黄瑜
- 抗鹅IgG单克隆抗体的研制及其特性研究
- 2015年
- 为制备抗鹅IgG二抗用于鹅病血清学诊断，以纯化的鹅血清IgG免疫BALB／c小鼠，通过杂交瘤技术获得6株能稳定分泌抗鹅IgG的单克隆抗体（MAb）细胞株，命名为Go-1A6、Go-6A4、Go-3G11、Go-5D1、Go-688以及Go-5G5。抗体效价测定显示，细胞上清的ELISA效价为1：1600—1：4000，腹水ELISA效价为1：51200～1：204800。Westernblot分析发现，Go-5D1和Go-688与鹅IgG轻链反应，而其他4株与鹅IgG重链反应。交叉反应表明，这些MAb除了与鹅以及鸭IgG反应外，与鸡、鹌鹑、羊、牛、猪以及狗IgG不反应。间接免疫荧光试验结果显示Go-3G11和Go-6A4具有良好的反应性。结果表明，研制的MAb能为水禽疫病血清学诊断提供二抗试剂，具有一定的应用价值。
- 邵红霞史荣华郭卉吕亚楠涂飞钱琨金文杰叶建强秦爱建
- 关键词：单克隆抗体ELISAWESTERNBLOT间接免疫荧光试验
- 密码子优化型鹅细小病毒病毒样颗粒的表达与鉴定
- 2012年
- 根据昆虫细胞密码子的偏嗜性,对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP2基因的密码子进行优化,利用Bac-to-Bac表达系统构建了表达优化VP2基因的重组杆状病毒,通过感染昆虫细胞(Sf9)获得病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。SDS-PAGE分析显示Sf9细胞中出现了65 kDa的蛋白条带,间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay,IFA)和Western blot结果均证实表达产物能与鼠抗GPV VP2抗体发生特异性反应,说明其具有良好的免疫反应性。同时,试验结果还证明,密码子优化后的GPV VP2基因在昆虫细胞中表达量得到了提高,明显高于野生型VP2基因。透射电镜观察纯化后的昆虫细胞表达产物,可见直径约30 nm的VLPs,表明密码子的优化并不影响VP2蛋白的组装。本研究为进一步研制诊断抗原以及新型GPV疫苗等奠定了基础。
- 陈宗艳李传峰高景鹏朱英奇王玢瑸杨宗伟刘光清
- 关键词：鹅细小病毒VP2密码子优化杆状病毒表达系统病毒样颗粒
- 我国小鹅瘟研究进展及成就被引量：18
- 2014年
- 小鹅瘟是导致雏鹅死亡的常见疾病之一,可造成巨大经济损失,严重危害养鹅业的发展。为了科学认识和积极防控小鹅瘟,我国同行进行了长期不懈的研究,取得了一系列原创性成果。在全世界率先发现并鉴定了小鹅瘟病毒,并对其变异特点进行了遗传进化分析,基本调研清楚了小鹅瘟在我国的发生区域和流行规律。在传统检测技术的基础上,引入免疫学技术和分子生物学技术,建立了一系列快速检测新方法;研制成功高免血清、种鹅用弱毒疫苗、雏鹅用弱毒疫苗和细胞适应弱毒株培育的新型疫苗,使我国小鹅瘟得到了有效的控制。这些成果和进展为我国小鹅瘟的研究与防治奠定了基础。
- 金文杰吕亚楠王芳朱良全秦爱建丁家波
- 关键词：小鹅瘟
- 鹅源鸭1型甲肝病毒的分离与鉴定被引量：2
- 2012年
- 2012年广东省某鹅场发生一种以肝脏出血为主要病变特征的传染病。从病死鹅肝脏中分离到1株病毒(命名为GD-01),该病毒能在96h内致死10日龄番鸭胚。人工感染8日龄雏番鸭后,濒死前出现角弓反张,病变为肝脏出血。应用鸭1型甲肝病毒特异性引物对GD-01进行RT-PCR检测,可扩增到约199bp目的条带。经RT-PCR鉴定和遗传进化分析证实该病毒分离株为鹅源鸭1型甲肝病毒。
- 陈红梅施少华程龙飞傅光华万春和黄瑜
- 鸭疫里默氏杆菌血凝素基因的克隆、表达及其蛋白的定位分析
- 2012年
- 为研究鸭疫里默氏杆菌(R.anatipestifer)血凝素蛋白的功能,本实验克隆表达了鸭疫里默氏杆菌血凝素基因,并对其蛋白定位进行了分析。根据鸭疫里默氏杆菌CH3株血凝素基因序列设计一对特异性引物,采用PCR扩增不同血清型鸭疫里默氏杆菌的血凝素基因,进行序列测定与分析。结果表明其血凝素基因全长1 059 bp,编码352个氨基酸。不同血清型鸭疫里默氏杆菌血凝素间的氨基酸同源性为94.1%～100%,与黄杆菌3519-10株血凝素的氨基酸同源性为68.0%～68.9%。采用表达的血凝素蛋白免疫鼠血清和鸭抗鸭疫里默氏杆菌阳性血清对血凝素在细菌中的定位分析表明,鸭疫里默氏杆菌血凝素可能不是一种膜蛋白,而是存在于胞浆中的一种蛋白。
- 屠晶胡青海于圣青丁铲韩先干朱寅玉王小兰苗双卢凤英
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌血凝素原核表达
- 影响A型流感病毒样颗粒包装及释放的关键结构蛋白研究被引量：5
- 2011年
- 【目的】流感病毒样颗粒在病毒学研究和新型疫苗开发方面发挥着巨大作用。本研究旨在建立一种简便的包装病毒样颗粒的方法来阐明影响流感病毒样颗粒包装及释放的关键结构蛋白。【方法】构建同时表达HA、NA和M1 3个蛋白,同时表达HA和NA两个蛋白以及只表达HA蛋白的真核表达质粒,然后转染293 T细胞,检测细胞培养上清血凝效价初步判断是否包装并释放出病毒样颗粒,并采用透射电子显微镜观察病毒样颗粒的形态。【结果】表达HA和NA或表达HA、NA和M1蛋白的真核表达质粒转染293 T细胞后,检测细胞上清血凝价均为24;而转染单独表达HA蛋白质粒的细胞上清没有血凝活性。电镜观察表明单独表达HA蛋白没有可见的病毒样颗粒,而表达上述两个或3个蛋白均可观察到病毒样颗粒。【结论】本研究采用同时表达多个结构蛋白的真核表达载体来研究病毒样颗粒包装及释放的必须蛋白,研究结果表明M1在病毒样颗粒包装及释放过程中是非必须蛋白,而NA和HA蛋白是影响流感病毒样颗粒形成及释放的关键蛋白。
- 张树梅黄海碧颜丕熙滕巧泱闫丽萍徐大伟呼和巴特尔李泽君
- 关键词：HANA
