国家自然科学基金(30771654)
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
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- 拟态弧菌溶血素基因的克隆测序与生物信息学分析被引量：2
- 2010年
- 目的对拟态弧菌安徽分离株HX4（V.mimicus HX4株）的全长溶血素基因（vmh）进行克隆测序和生物信息学分析，为表达溶血素蛋白（VMH）奠定基础。方法采用PCR法扩增V.mimicus HX4菌株全长vmh基因，将其克隆至pMD18-T vector并进行测序，应用生物信息学软件分析vmh基因的同源性及其编码蛋白的分子特征。结果V.mimicus HX4菌株vmh基因全长序列2235bp，编码由744个氨基酸组成的分子量约为82．85kDa的VMH蛋白。V.mimicus HX4菌株vmh基因的核苷酸序列和氨基酸序列与参考株相应序列的同源性分别介于98．9％-99．1％和96．6％～97．3％。VMH蛋白N端前25个氨基酸组成信号肽，7～27位氨基酸之间存在一个跨膜区域，蛋白二级结构中无规卷曲含量最高，达39．52％，其次为α-螺旋和β-折叠，分别占25．81％和26．75％，p转角含量最低，仅占7．93％。VMH蛋白含有多个T细胞和B细胞抗原表位，同时存在T、B细胞抗原表位的区域最有可能位于肽链第86—95、193～211、419—440和459～501位区段。结论拟态弧菌VMH蛋白是一种高度保守的毒素蛋白，对HX4菌株vmh基因及其编码蛋白信息特征的了解，有助于进一步表达VMH蛋白。
- 王评评李槿年邵士慧
- 关键词：溶血素基因克隆测序生物信息学分析
- 拟态弧菌外膜蛋白OmpU基因的原核表达及其免疫保护性研究被引量：9
- 2008年
- 自行构建的pMD18T-OmpU重组克隆质粒经BamHI/EcoRI双酶切后,定向插入原核表达质粒pGEX-4T-1中构建重组表达质粒pGEX-4T-1-OmpU。将重组表达质粒转化至大肠杆菌E.coliBL21进行IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE电泳及Western-blot分析显示,以包涵体形式表达的GST-OmpU融合蛋白的分子量约为62.9kD,可与鼠抗拟态弧菌外膜蛋白(Omps)免疫血清发生特异性反应,提示重组OmpU保留了天然Omps的抗原性。用纯化的融合蛋白免疫昆明系小鼠,以50LD50拟态弧菌(5×108CFU/mL)攻击,小鼠的免疫保护率为60%(9/15)。表明OmpU是拟态弧菌的保护性抗原之一,具有研发成为外膜蛋白基因工程亚单位苗的潜在价值。
- 李小飞李槿年季晶晶余为一
- 关键词：拟态弧菌原核表达免疫保护性
- 拟态弧菌OmpU抗原表位的预测与多表位疫苗分子的设计被引量：4
- 2008年
- 以拟态弧菌安徽分离株OmpU基因序列为基础,应用DNAStar Protean软件联合采用多种方法对OmpU的二级结构、柔性、亲水性、表面可能性和抗原指数等方面进行分析,预测OmpU的抗原表位,并以此设计多表位疫苗分子序列。结果表明,拟态弧菌OmpU至少含有9个B细胞表位,其中第24～31、56～66、93～111、123～129、183～198、253～258和275～287共7个区段的平均抗原指数较高。使用AAY接头以epitope5-epitope7-epitope2-epitope6-epitope3-epitope4-epitope1排列方式串联的多表位序列最接近原蛋白构象,各表位间相对独立,抗原性参数也较好,可作为研制多表位疫苗的候选分子序列。
- 季晶晶李槿年
- 关键词：拟态弧菌抗原表位多表位疫苗分子设计
