国家自然科学基金(30771627)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：谭清甜黄显会刘帅帅焦晓军杨桂香更多>>
- 相关机构：华南农业大学中国农业大学更多>>
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- 突变型猪表皮生长因子在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2009年
- 使用α因子做为信号肽的酵母系统分泌表达猪表皮生长因子(pEGF)时,由于对信号肽末端Glu-Ala氨基酸残基切除不完全,表达产物是Glu-Ala-pEGF和pEGF的混合物。本研究为了获得单一表达的pEGF产物,对pEGF基因进行适当的突变修改,构建缺失Glu-Ala重复基因序列的重组载体。把重组载体pPIC9-pEGF1-48电转化毕赤酵母,用同位素标记随机引物斑点杂交法筛选多拷贝整合转化子,并诱导大量表达。用硫酸铵沉淀及超滤的方法浓缩和纯化蛋白,并用Bradford检测方法对蛋白浓度进行了初步测定。结果表明,构建的重组载体经过BglⅡ线性化后稳定转入毕赤酵母中,转化子表型主要为MutS型;筛选的多拷贝MutS型转化子经诱导后成功表达约6000的pEGF1-48蛋白,经检测蛋白表达水平约为34mg/L。
- 王秋华杨桂香汪洋于文刚蒋红霞
- 关键词：猪表皮生长因子毕赤酵母硫酸铵沉淀
- 重组毕赤酵母高密度发酵表达猪表皮生长因子及其纯化鉴定被引量：2
- 2011年
- 采用高密度发酵法在5.5 L发酵罐中对pPIC9-pEGF/GS115重组毕赤酵母Pichia pastoris菌株进行发酵,在培养至酵母菌体密度(D600 nm)约150时,以甲醇诱导目的蛋白表达,48 h后菌体密度达315,目的蛋白表达产量约300 mg/L.发酵上清液经0.45μm和截留相对分子质量30 000的超滤膜、亲和层析、透析后目的产物的纯度达90%以上.鉴定结果表明:纯化的表达产物pEGF对BALB/c 3T3细胞具有显著的增殖作用.
- 焦晓军黄显会刘帅帅谭清甜
- 关键词：猪表皮生长因子毕赤酵母高密度发酵纯化
