山东省科技攻关计划(2004GG2202107)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：陈春燕孔德晓贾继辉刘永曹倩更多>>
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- 高三尖杉酯碱白血病多药耐药细胞系K562/HHT的诱导及米非司酮逆转耐药的研究被引量：7
- 2007年
- 目的:研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导的白血病多药耐药细胞株耐药机制以及米非司酮(RU486)逆转其耐药效应。方法:采用反复短期暴露并逐渐增加HHT浓度的方法建立白血病多药耐药细胞系K562/HHT,MTT法检测K562/HHT细胞对化疗药物的敏感性及RU486对该细胞的细胞毒效应,RT-PCR法检测细胞MDR1基因、葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的表达,流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量,免疫组化法检测细胞Bcl-2、Bax、caspase-3的表达状况。结果:成功诱导出多药耐药细胞系K562/HHT,K562/HHT较其亲代细胞K562对HHT、阿霉素、长春新碱、依托泊苷的耐药性分别提高462.6、2.8、1183.4、2.6倍,K562/HHT细胞MDR1基因、GCS基因、P-糖蛋白和Bcl-2/Bax比值明显高于K562细胞(P<0.05),caspase-3表达、柔红霉素积累量明显低于K562细胞(P<0.05)。10μmol/L的RU486对K562/HHT细胞无明显杀伤(存活率94.67%±2.48%),该浓度RU486可不同程度地逆转K562/HHT细胞对上述化疗药物的耐药性,RU486作用后K562/HHT细胞caspase-3表达、柔红霉素积累量明显高于作用前(P<0.05),Bcl-2/Bax比值明显低于作用前(P<0.05)。结论:白血病细胞系K562在HHT的作用下可形成多药耐药细胞系K562/HHT,其耐药性的形成与P-糖蛋白、GCS、Bcl-2/Bax比值及caspase-3等机制有关,RU486可通过提高细胞内药物积累、调节Bcl-2/Bax比值和caspase-3的表达逆转此细胞的耐药性。
- 刘永陈春燕孔德晓王琳琳曹倩贾继辉
- 关键词：高三尖杉酯碱米非司酮多药
- 高三尖杉酯碱诱导的白血病耐药细胞基因表达谱的变化
- 2009年
- 目的探讨高三尖杉酯碱（HHT）诱导的人白血病细胞耐药相关分子。方法在前期建立的HHT诱导的人白血病多药耐药细胞株K562／HHT的基础上，采用基因芯片技术比较K562／HHT细胞、其亲本K562细胞以及用耐药逆转剂米非司酮（RU486）作用后的K562／HHT（K562／HHT／RU486）细胞三者基因表达谱的差异，选择在这三种细胞中呈动态变化的骨髓细胞X染色体上酪氨酸激酶（BMX）基因用RT—PCR和Westernblot法在转录和翻译水平进行验证，进而转染BMX基因到K562和K562／HHT细胞，观察BMX过表达时这两种细胞内柔红霉素（DNR）含量的变化，确定BMX是否在K562／HHT细胞耐药形成中发挥作用。结果耐药细胞K562／HHT与其亲本K562细胞相比，共有117个基因表达有显著差异，其中57个基因表达明显上调，60个基因表达明显下调，耐药细胞K562／HHT中多药耐药基因mdr-1表达明显上调；K562／HHT／RU486细胞与K562／HHT细胞相比，13个基因表达明显上调，37个基因表达明显下调。这些差异表达的基因涉及耐药、细胞信号传导、细胞分化、细胞增殖、转录调节以及离子转运等。基因NM-001721（BMX）、NM-031459（SESN2）、NM-033642（FGF13）和AL049309（SFRS12）在两组芯片中的表达均有显著差异。其中BMX基因在K562／HHT细胞中的表达与K562细胞相比，明显上调，在K562／HHT／RU486细胞则较K562／HHT细胞减低。进一步用RT—PCR和Westernblot法检测得到了相同的结果。RT—PCR和Westernblot证实BMX质粒转染的K562及K562／HHT细胞BMX表达均上调，流式细胞术检测到K562及K562／HHT细胞内DNR含量荧光强度分别为79．28±4．04和29．84±2．67，均较转染前荧光强度158．52±8．08和58．58±6．53显著减低。结论BMX在高三尖杉酯碱诱导的人白血病多药耐药细胞株K562／HHT耐药性产生中发挥作用。
- 于晓林刘永王涓冬孔德晓陈春燕
- 关键词：K562细胞多药高三尖杉酯碱基因BMX
- 高三尖杉酯碱联合IFNα-2b可促进白血病源性树突状细胞成熟被引量：4
- 2009年
- 目的:研究高三尖杉酯碱(HHT)、干扰素α-2b(IFNα-2b)和两者联合(HHT+IFNα-2b)对白血病源性树突状细胞(DCs)的促成熟作用。方法:在白血病多药耐药细胞K562/A02中加入细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4,7d后Wright-Gimsa染色观察细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞免疫表型的变化,同种混合淋巴细胞反应、CTL杀伤效应、细胞因子IL-12的分泌来评价此白血病源性DC的成熟程度,然后在上述白血病源性DC中分别加入HHT、IFNα-2b和HHT+IFNα-2b,3d后以上述同样方法检测它们对此白血病源性DC的促成熟作用。结果:K562/A02细胞在rhGM-CSF和rhIL-4作用7d后,CD83、HLA-DR和CD86分子的表达分别为(65.50±8.40)%、(32.00±4.32)%和(18.65±3.20)%,经HHT作用后这3种分子的表达升高到(85.36±8.42)%、(39.58±7.68)%和(35.53±4.35)%;经IFNα-2b作用后升高到(87.15±7.59)%、(40.53±6.30)%和(38.45±6.42)%;经HHT+IFNα-2b联合作用后升高到(94.38±6.59)%、(52.75±8.51)%和(42.98±9.87)%,与作用前相比差异均显著。经HHT、IFNα-2b和HHT+IFNα-2b作用后具有典型DC形态的细胞增多。经HHT和IFNα-2b作用的DC均可刺激T细胞产生较强的增殖效应,诱导产生的CTL对靶细胞K562/A02的杀伤率明显增强且当效靶比为20:1时杀伤效率最强,IL-12分泌明显增高。结论:HHT和IFNα-2b对白血病源性DC有促成熟作用,且两者联用时作用最强。
- 孔德晓陈春燕王涓冬于晓林
- 关键词：高三尖杉酯碱干扰素Α-2BK562/A02细胞
- 米非司酮逆转K562/A02细胞多药耐药的研究被引量：9
- 2007年
- 目的研究孕激素拮抗剂米非司酮对白血病多药耐药细胞 K562/A02的逆转作用及其机制。方法 MTT 法检测米非司酮作用72 h 后 K562/A02细胞增殖及其对阿霉素杀伤敏感性的变化;流式细胞术检测米非司酮作用前后 K562/A02细胞表面 P 糖蛋白的表达和细胞内柔红霉素的浓度;免疫组化法观察米非司酮作用前后 K562/A02细胞凋亡相关蛋白 bcl-2、Bax、caspase-3的表达;RT-PCR 检测米非司酮作用后对 K562/A02细胞内葡萄糖神经酰胺合成酶(GcS)mRNA 表达的影响。结果2.5、5.0和10.0μmol/L 米非司酮不抑制 K562/A02细胞的增殖,但上述浓度的米非司酮作用后K562/A02细胞对阿霉素的敏感性较前分别增强了1.68、4.17和10.71倍。K562/A02细胞表面 P 糖蛋白的表达为(49.03±5.32)%,10 μmol/L 米非司酮作用72 h 后降低到(28.60±2.13)%(P<0.01);K562/A02细胞内柔红霉素的浓度为(61.07±8.61)%,而10 μmol/L米非司酮作用后升高到(92.72±3.48)%(P<0.01)。经10 μmol/L 米非司酮作用后,bcl-2蛋白表达由(56±9)%降低到(37±6)%(P<0.05);Bax 蛋白由(40±5)%升高到(87±10)%(P<0.01);caspase-3蛋白则由(36±7)%升高到(89±6)%(P<0.01)。RT-PCR 结果显示 K562/A02细胞 GcS mRNA 的表达较K562细胞明显升高,10 μmol/L 米非司酮能明显降低 K562/A02细胞内 GcS mRNA 的表达。结论米非司酮可逆转白血病 K562/A02细胞的多药耐药,且具有剂量依赖性。10 μmol/L 米非司酮能明显逆转白血病 K562/A02细胞的多药耐药,其机制与降低 P 糖蛋白的水平,调节凋亡相关蛋白 bcl-2、Bax、caspase-3的表达,降低 GcS mRNA 有关。
- 孔德晓陈春燕许复郁贾继辉
- 关键词：米非司酮多药耐药蛋白
- 源于细菌DNA的寡核苷酸对K562/A02细胞来源的树突细胞促成熟作用被引量：1
- 2007年
- 目的研究源于细菌 CpG 基序的寡核苷酸和含细菌短磷酸二酯骨架的寡核苷酸对K562/A02细胞来源的树突细胞(DC)的促成熟作用。方法联合应用细胞因子 rhGM-CSF 和 rhIL-4诱导 K562/A02细胞成为 DC。7 d 后以瑞特-姬姆萨染色观察细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞免疫表型的变化,用同种混合淋巴细胞反应、细胞毒性 T 淋巴细胞(CTL)杀伤活性检测、IL-12和 IL-6的分泌实验评价 DC 的成熟程度。然后在 DC 中分别加入源于细菌 CpG 基序的寡核苷酸 CpG2006以及含细菌短磷酸二酯骨架的寡核苷酸 A-ODN 和 T-ODN,处理3 d 后再次检测该 DC 成熟度。结果K562/A02细胞可在细胞因子 rhGM-CSF 和 rhIL-4联合作用下分化成为 DC,免疫表型检测发现 CD83、HLA-DR 和 CD86分子的表达分别为(65.5±8.4)%、(32.0±4.3)%和(18.6±3.2)%,经 CpG2006作用后表达升高到(88.9±3.6)%、(53.9±3.2)%和(39.9±7.3)%;经 A-ODN 作用后升高到(97.0±5.3)%、(63.9±7,3)%和(40.2±7.4)%;经 T-ODN 作用后升高到(93.3±4.6)%、(58.3±5.6)%和(36.2±6.8)%,与作用前相比差异均有统计学意义。经 CpG2006、A-ODN 和 T-ODN 作用后具有典型DC 形态的细胞增多。上述3种寡核苷酸处理的 DC 均可刺激 T 细胞产生较强的增殖效应、诱导产生的 CTL 对靶细胞 K562/A02的杀伤率明显增强,IL-6和 IL-12分泌明显增高。结论源于细菌 CpG 基序的寡核苷酸以及含细菌短磷酸二酯骨架的寡核苷酸对白血病源性 DC 有促成熟作用。
- 于晗孔德晓牛建花刘永贾继辉陈春燕
- 关键词：寡核苷酸类树突细胞
- 源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病效应的研究
- 2007年
- 目的:研究源于细菌CpG基序的寡核苷酸激活单核/巨噬细胞抗白血病细胞的作用。方法:用血细胞分离机从健康人外周血分离并诱导出单核-巨噬细胞,流式细胞仪检测细胞表面CD14分子和CD16分子表达状况。设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)和不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)分别作用于单核/巨噬细胞,MTT法检测经寡核苷酸作用后,单核/巨噬细胞抗白血病K562细胞的效应,用ELISA法检测其分泌细胞因子IL-12、TNF-α的表达。结果:从健康人外周血分离并成功诱导出单核/巨噬细胞,证实CpG-ODN作用于单核/巨噬细胞,可显著增强单核/巨噬细胞体外抗白血病细胞的作用,同时能促进单核/巨噬细胞分泌细胞因子IL-12、TNF-α。结论:源于细菌CpG-ODN可增强单核/巨噬细胞介导的抗白血病细胞作用,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。
- 陈春燕王红艳曹倩肖颖王琳琳张荣梅贾继辉
- 关键词：寡核苷酸类巨噬细胞白血病K562细胞
