国家自然科学基金(81360161)
- 作品数：8 被引量：6H指数：1
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- 相关机构：云南省第一人民医院昆明医科大学美国波士顿大学更多>>
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- 两种重编程系统诱导人牙源性多潜能干细胞的对比研究
- 2017年
- 目的对比研究两种人牙源性多潜能干细胞重编程体系的特点。方法分别利用STEMCCA慢病毒/饲养层和仙台病毒/基质胶两种重编程系统,将人根尖乳头干细胞重编程为iPS细胞,比较两种方法的诱导效率、诱导工作量、iPS细胞非整倍体核型比例、外源性基因消除难易程度等情况。结果STEMCCA重编程体系需要制备饲养层细胞MEF,重编程效率约为0.1%,后期经Cre-Loxp酶切技术可得到无外源性转录基因的iPS细胞。仙台病毒重编程体系为无饲养层培养,基质胶制备方便、标准统一,重编程效率约为0.7%,明显高于STEMCCA系统(P<0.05),外源性病毒和转录基因经自然传代后逐渐消除。结论与STEMCCA系统相比,仙台病毒/基质胶体系更适于人牙源性iPS细胞的诱导。
- 谭小兵徐静舒孙贵虎宋俊呈戴青原
- 关键词：多潜能干细胞干细胞慢病毒属重编程仙台病毒
- 两种方法诱导人iPSCs分化为心肌细胞的对比
- 2017年
- 目的对比研究两种方法诱导人牙源性i PSCs分化为心肌细胞的效率.方法 EB法和单层培养法将人DPSCs-i PSCs诱导分化为心肌细胞,比较心肌细胞的生物学特征、分化时间,流式细胞仪检测心肌细胞的特异性标记物TNNT2阳性率.结果 2种方法得到的心肌细胞具有自我搏动的特性,分化时间:EB法(23.33±1.45)d多于单层培养法(10.33±0.88)d,P<0.05,分化效率:EB法(10.0±1.73)%低于单层培养法(88.67±2.60)%,P<0.05.结论单层培养法诱导时间短、分化效率高,是人牙源性i PSCs分化为心肌细胞的适合方法.
- 戴青原孙贵虎徐静舒谭小兵
- 关键词：分化心肌细胞
- 人牙源性多能干细胞重编程前后微小RNAs差异表达谱系分析被引量：1
- 2017年
- 目的对比研究两种人牙源性多能干细胞重编程前后微小RNAs(mi RNAs)差异表达,交集分析、筛选特异性mi RNAs。方法利用仙台病毒将人牙髓干细胞(DPSCs)和根尖乳头干细胞(SCAP)重编程为诱导性多潜能干细胞(i PSCs),提取总RNA,mi RNAs标记、杂交,扫描芯片、读取图像,筛选差异表达mi RNAs,交集分析。结果人DPSCs和SCAP均可重编程为i PSCs。mi RNAs芯片分析结果显示人DPSCs重编程后有68个差异表达mi RNAs(倍数>10),其中37个表达上调,31个表达下调;人SCAP重编程后有107个差异表达mi RNAs(倍数>10),其中68个表达上调,39个表达下调。二者取交集,均上调的有mi R-302e,下调的有mi R-29b-3p、mi R-181b-5p、mi R-4328、mi R-22-5p、mi R-145-5p、mi R-4324、let-7b-5p、mi R-181a-5p、mi R-27b-3p(倍数>10)。结论人DPSCs和SCAP重编程为i PSCs过程中有多种mi RNAs参与,多数与细胞周期、上皮-间充质转化、转化生长因子β信号通路等相关。
- 谭小兵戴青原
- 关键词：诱导性多潜能干细胞牙髓干细胞重编程微小RNAS
- 两种人牙源性iPSCs的重编程效应及生物学特性比较被引量：1
- 2018年
- 目的比较两种人牙源性iPSCs的重编程效应及其生物学特性。方法原代培养人牙髓干细胞(DPSCs)和根尖乳头干细胞(SCAP),仙台病毒重编程系统将两种细胞诱导为诱导性多潜能干细胞(iPSCs),比较两种iPSCs的形态、重编程效率及时间,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SeV及外源性转录基因的表达。结果人DPSCs、SCAP均重编程为iPSCs,具有典型ES样克隆形态,重编程效率分别为(0.68±0.02)%、(0.7±0.01)%,差异无统计学意义(P>0.05);重编程时间分别为(26.0±2.1)、(27.0±1.4)d,差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR结果显示,两种iPSCs无外源性病毒或转录基因序列的表达。结论人DPSCs和SCAP可重编程为无病毒、无转录基因iPSCs,是iPSCs的理想来源。
- 郭宇徐静舒戴青原谭小兵
- 关键词：诱导性多潜能干细胞仙台病毒重编程
- RNA复制子诱导人牙源性多潜能干细胞的研究
- 2017年
- 目的研究一种高效安全的人诱导性多潜能干细胞(Induced pluripotent stem cells,i PSCs)重编程新体系,为牙源性组织再生提供安全的干细胞来源。方法体外培养人根尖乳头干细胞(Stem cells from apical papilla,SCAP),Simplicon RNA复制子为载体,人重组玻连蛋白作为底物,将人SCAP重编程为i PSCs。免疫荧光染色检测i PSCs特异性标记物的表达,畸胎瘤形成实验检测i PSCs分化能力,RT-PCR确认其外源性基因序列的沉默。计算人SCAP-i PSCs的重编程效率。结果人SCAPi PSCs具备典型的ES样克隆形态,Oct4、Nanog、Sox2、SSEA-4均为染色阳性。i PSCs植入SCID小鼠体内6周形成畸胎瘤,HE染色显示包含所有三胚层来源组织,RT-PCR显示人SCAP-i PSCs特异性表达干细胞标记物,不再表达外源性基因序列。重编程效率为0.17%~0.20%。结论结果得到的人SCAP-i PSCs安全性能和诱导效率较高,是理想的牙源性组织再生的干细胞来源。
- 谭小兵徐静舒郭宇肖艳戴青原
- 关键词：RNA重编程诱导性多潜能干细胞
- 人牙髓干细胞和根尖乳头干细胞体外分化能力的对比研究被引量：4
- 2017年
- 目的对比研究人牙髓干细胞(DPSCs)和根尖乳头干细胞(SCAP)的体外生长特性、增殖及矿化能力。方法采用酶消化法体外培养人DPSCs和SCAP,诱导分化培养基诱导细胞成骨/成牙本质向分化,流式细胞仪检测特异性标记物,茜素红染色检测矿化程度,逆转录PCR(RT-PCR)检测分化标记物表达。结果人DPSCs和SCAP为成纤维细胞样贴壁生长,SCAP增殖率较高;两种细胞表达特异性间充质干细胞(MSCs)标记物:CD34、CD45(-),CD90、CD105、CD146(+),基质细胞抗原1(STRO-1)、八聚体转录因子4(OCT-4)(+),SCAP特异性标记物CD24(+)。成骨诱导3周可形成明显钙化结构,SCAP钙化能力较强。成骨诱导2周2种细胞均可表达分化标记物:骨涎蛋白、骨钙素、牙本质涎磷蛋白,且随诱导时间表达逐渐增加。结论人DPSCs和SCAP均具有间充质干细胞典型特征,可分化为成牙本质样细胞,是牙源性组织工程的可靠干细胞来源。
- 谭小兵郭宇刘佳徐静舒戴青原
- 关键词：牙髓干细胞牙根尖牙再矿化
- 人胚胎干细胞和诱导性多功能干细胞饲养层细胞的制备方法被引量：1
- 2014年
- 目的建立一种能维持人胚胎干细胞（ESC）和诱导性多功能干细胞（iPSC）生长的饲养层细胞的标准制备方法。方法选取受孕12．5-14．5d的CF-1雌鼠，原代培养的鼠胚胎成纤维细胞（MEF）经丝裂霉素C处理后作为饲养层细胞，观察其维持人ESC和iPSC的生长情况；同时研究不同培养器具所需细胞数量，制备高质量饲养层细胞。结果经丝裂霉素C处理后，MEF可很好维持人ESC和iPSC的生长，使其保持自我更新能力和未分化状态；控制铺板的细胞密度，可得到高质量饲养层细胞。结论本实验得到的饲养层细胞能很好支持人ESC和iPSC生长，可作为饲养层细胞制备的标准方法使用。
- 谭小兵George T-J Huang
- 关键词：人胚胎干细胞饲养层细胞
- 人牙源性iPSCs 3种培养底物的比较
- 2017年
- 目的对比研究3种人牙源性诱导性多能干细胞(iPSCs)培养底物的特点。方法使用3种底物培养人牙源性iPSCs:小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、基质胶和重组人玻连蛋白(VTN-N),对比iPSCs的生长情况。结果 3种底物的制备时间分别为14、3、1h,三者间差异有统计学意义(P<0.05);iPSCs重编程时间分别为(30±1.6)、(26±2.1)、(27±1.4)d,其中MEF组明显多于其他两组(P<0.05);重编程效率分别为0.3%±0.03%、0.56%±0.08%、0.7%±0.02%(P<0.05)。3种底物均能较好支持iPSCs生长,使其保持未分化状态。结论重组人玻连蛋白无异源性动物组分,制备简便、标准可控、重编程时间较短,是目前理想的支持iPSCs生长的底物。
- 谭小兵刘佳郭宇徐静舒戴青原
- 关键词：小鼠胚胎成纤维细胞
