国家自然科学基金(30771666)
- 作品数：21 被引量：85H指数：5
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- 相关机构：河南师范大学新乡学院新乡医学院更多>>
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- 黄河鲤生长激素基因cDNA的克隆和原核高效表达被引量：3
- 2009年
- [目的]研究黄河鲤生长激素基因cDNA的克隆和原核高效表达。[方法]从黄河鲤脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增并克隆黄河鲤的生长激素(GH)基因cDNA,分析其核苷酸序列和推测的氨基酸序列。[结果]经克隆得到的黄河鲤生长激素基因的开放阅读框包括633个核苷酸,编码210个氨基酸,其中包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽。将GH成熟肽的cDNA扩增并克隆入表达载体pET-28a,在大肠杆菌BL21(DE3)表达N端含6个组氨酸的融合多肽。SDS-PAGE结果表明,0.1 mmol/L IPTG诱导表达的蛋白约为23.5 kD,其表达量超过蛋白总量的50%,主要为不溶性的包涵体。包涵体经尿素溶解和亲和层析,获得了单一蛋白条带。[结论]该研究克隆到黄河鲤的生长激素基因,构建其原核表达质粒,得到了高效表达的基因工程菌。
- 陈丽丽王松涛杜启艳常重杰
- 关键词：黄河鲤生长激素基因克隆原核表达
- 柠檬黄对泥鳅的急性毒性及遗传毒性实验被引量：19
- 2008年
- [目的]研究柠檬黄对泥鳅红细胞细胞核的毒性影响。[方法]以柠檬黄作为诱变剂,通过急性毒性实验研究了柠檬黄在不同浓度(7.482 08、.017 08、.590 09、.204 0和9.862 0 g/L)和不同染毒时间(81、62、4、324、0 h)条件下对泥鳅红细胞的损伤情况。[结果]柠檬黄对泥鳅的24 h半致死浓度LC50为8.594 0 g/L和48 hLC50为7.173 0 g/L,其安全浓度为1.515 0 g/L。柠檬黄在较低的浓度下(<0.094 7g/L)无明显的遗传毒性效应。达到一定浓度(>0.378 8 g/L)之后所诱导的微核率基本上随着浓度的加大和染毒时间的延长而增高,达到最高值后,开始下降。柠檬黄诱发的微核率与对照组相比达到显著或极显著差异水平。[结论]柠檬黄达到一定的浓度和染毒时间之后对泥鳅具有一定的遗传毒性。建议食品加工业在使用柠檬黄时,应严格限量使用。
- 杜启艳常重杰南平王友利
- 关键词：泥鳅红细胞微核柠檬黄
- 强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的毒性研究被引量：1
- 2011年
- 以大鳞副泥鳅为对象,研究了强力型油烟机清洁剂对其急性和生理毒性。急性毒性试验结果表明,强力型油烟机清洁剂对大鳞副泥鳅的24、48、96 h的半致死浓度(LC50)分别为6.692、6.190、5.908 mL/L;生理毒性试验结果表明,强力型油烟机清洁剂在一定程度上可抑制大鳞副泥鳅肝脏谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)的活性,随着处理时间的延长和浓度的增加活性逐渐降低。
- 常重杰杜启艳杨炀吴小华
- 关键词：大鳞副泥鳅急性毒性生理毒性
- 苏丹红I对泥鳅红细胞微核率和组织磷酸酶活性的影响被引量：11
- 2008年
- [目的]为明确苏丹红Ⅰ的危害提供试验依据。[方法]用不同浓度(0.312 5、0.625、1.25、2.50和5.00 mg/L)苏丹红Ⅰ处理泥鳅后8、162、4、32和40 h,观察带有微核的红细胞数,并测定肝脏、肌肉和肾脏组织中磷酸酶活性,研究苏丹红Ⅰ对泥鳅红细胞微核率和不同组织中磷酸酶活性的影响。[结果]泥鳅红细胞微核的自然发生率为1.128 3‰。经不同浓度苏丹红处理一定的时间后,泥鳅红细胞微核率较对照组均显著提高,最高达6.063 6‰。随着苏丹红Ⅰ浓度的提高,泥鳅红细胞微核率出现最高峰的时间也相应提前。染毒后各组织的酸性磷酸酶(ACP)活性迅速上升,而碱性磷酸酶(ALP)活性迅速下降。[结论]泥鳅红细胞微核率与苏丹红Ⅰ浓度大体上呈正相关,同时也有一定的时间效应。
- 杜启艳吴小华南平常重杰
- 关键词：微核
- 柠檬黄对大鳞副泥鳅的急性毒性及遗传毒性实验被引量：5
- 2009年
- 以柠檬黄作为诱变剂,研究了其对大鳞副泥鳅的急性毒性及遗传毒性效应。急性毒性实验测出了柠檬黄对大鳞副泥鳅的24h半致死浓度是9.931g/L,48h半致死浓度是8.670g/L,48h安全浓度是1.982g/L。然后研究了柠檬黄在不同浓度和染毒时间的条件下对大鳞副泥鳅红细胞的损伤情况,结果发现:在较低的浓度下(<0.1239g/L),柠檬黄诱导的微核率与自然发生率无明显的差异;达到一定浓度(>0.2478g/L)之后所诱导的微核率基本上随着浓度的加大和染毒时间的延长,微核率增高,达到最高值后,开始下降,诱发的微核率与对照组相比达到显著或极显著差异水平。可见在一定剂量范围之内的柠檬黄对大鳞副泥鳅无明显的遗传毒性效应,但达到一定的浓度和时间之后具有一定的遗传毒性,建议食品加工业在使用柠檬黄时,应严格限量使用,以免对人体健康造成危害。
- 杜启艳李宁宁崔俊丽常重杰
- 关键词：柠檬黄大鳞副泥鳅急性毒性遗传毒性微核
- 苏丹红Ⅲ对泥鳅胚胎发育的毒性研究被引量：3
- 2012年
- 为研究水体中苏丹红Ⅲ的毒性作用,以苏丹红Ⅲ为诱变剂,以泥鳅胚胎为试验材料,选择泥鳅胚胎发育的4个不同时期(胚胎隆起期、原肠胚中期、神经胚期、尾芽期)为开始处理时间,用0.085g/L(1/12LC50,24h)、0.057g/L(1/18LC50,24h)、0.038g/L(1/27LC50,24h)、0.025g/L(2/81LC50,24h)、0.017g/L(4/243LC50,24h)等5个质量浓度梯度,探讨了苏丹红Ⅲ对泥鳅胚胎发育的影响。结果表明:苏丹红Ⅲ对泥鳅各发育时期的孵化率均产生影响;最低质量浓度组(0.017g/L)的孵化率与对照组(自来水处理)相比无明显差异;原肠胚中期和神经胚期对苏丹红Ⅲ最为敏感,在次低质量浓度组(0.025g/L)即开始表现出差异。尾芽期时,在中质量浓度组即0.038g/L时即开始表现出差异。苏丹红Ⅲ对泥鳅胚胎具有明显的致畸作用,胚胎的主要致畸症状包括体态异常、胚体浑浊或解体等。苏丹红Ⅲ对尾芽期胚胎的致畸作用表现最为明显,在最低质量浓度组(0.017g/L)时即与对照组具有极显著差异;胚胎隆起期,在中质量浓度组(0.038g/L)时,开始与对照组产生差异;原肠胚中期和神经胚期,只有最低质量浓度组(0.017g/L)与对照组无差异,其余组与对照组有极显著差异。4个不同处理时期的半数有效致畸质量浓度(EC50)分别为0.056、0.044、0.039、0.049g/L。苏丹红Ⅲ对泥鳅胚胎的发育有明显的抑制、致畸、致死作用,表现出明显的毒性,这可为苏丹红Ⅲ的合理使用提供依据。
- 王君肖静王琼琼杜启艳常重杰
- 关键词：泥鳅胚胎发育毒性
- 泥鳅性腺发生和分化的组织学研究被引量：4
- 2008年
- 通过人工繁殖技术获得泥鳅幼体,采用石蜡显微切片技术对幼体性腺发生和分化的组织学特征进行了系统观察。结果表明泥鳅性腺发生于出膜后12d,40日龄卵巢开始分化,至55日龄卵巢分化完全;精巢于出膜后55d左右开始分化,100d左右分化完全。卵巢分化早于精巢。从性腺分化开始,将要发育为卵巢的性腺还表现为体积快速增大,向体腔中间靠拢,横截面变宽;而将要发育为精巢的性腺则呈两端尖中间稍突的梭形,增生并不明显。这些特征可能与雌雄性腺的发育及生殖细胞的分化速度有关,可以作为泥鳅性腺早期分化的形态特征。
- 杜启艳赵晓艳常重杰张晓亚
- 关键词：泥鳅性腺分化
- 大鳞副泥鳅生长激素基因cDNA克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2012年
- 从脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法克隆大鳞副泥鳅生长激素基因(pGH)cDNA。结果表明,克隆到的pGH的开放阅读框包括633 bp,编码210个氨基酸,其中包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽,GenBank注册号为DQ350432。把pGH成熟肽的cDNA插入真核表达载体pPIC3.5K,PCR技术、酶切和测序证明重组子中确实定向插入了pGH成熟肽片段;将重组的pPIC3.5K-pGH用SalⅠ酶切后,转化巴斯德毕赤酵母GS115,PCR技术筛选证明pGH已经整合到酵母染色体上。从而成功克隆大鳞副泥鳅生长激素基因cDNA,并构建了胞内真核表达载体pPIC3.5K-pGH。
- 陈丽丽王松涛杜启艳常重杰
- 关键词：大鳞副泥鳅生长激素真核表达载体
- 强力型油烟机清洁剂对泥鳅的毒性研究被引量：1
- 2010年
- [目的]评估强力型油烟机清洁剂的环境毒性。[方法]以泥鳅为试验动物,设置强力型油烟机清洁剂对其急性毒性和生理毒性试验,研究油烟机清洁剂对泥鳅的半数致死浓度及其对泥鳅肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性的影响。[结果]油烟机清洁剂对泥鳅具有明显的毒性。处理后泥鳅开始表现为兴奋不安地游动,而后反应迟钝,身体失去平衡,出现翻肚甚至死亡现象。油烟机清洁剂对泥鳅24、48、96h的半致死浓度分别为6.507、5.762、5.423ml/L。油烟机清洁剂在一定程度上可抑制泥鳅肝脏谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性,且均具有时间、剂量效应。[结论]油烟机清洁剂对水生生物的急性毒性和生理毒性表现出明显的时间、剂量效应。
- 常重杰吴小华董芳绢杜启艳
- 关键词：泥鳅急性毒性生理毒性
- 淇河鲫生长激素基因cDNA的克隆和原核高效表达被引量：2
- 2009年
- 从脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增并克隆到淇河鲫(Carassius auratus gibelio var)的生长激素(GH)基因cDNA,其GenBank注册号为DQ 350437。分析其核苷酸序列和推测的氨基酸序列,结果显示:克隆到的淇河鲫生长激素基因的开放阅读框(ORF)包括633个核苷酸,编码210个氨基酸,其中,包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽。把GH成熟肽的cDNA克隆入表达载体pET-28 a,在大肠杆菌BL21(DE3)表达N端含6个组氨酸的融合多肽。SDS-PAGE结果表明,0.1 mmol/LIPTG诱导表达的蛋白约为23.5 kD,其表达量超过蛋白总量的50%,主要为不溶性的包涵体。细菌裂解液沉淀溶于8 mol/L尿素后,用固定化金属配体亲和层析纯化,获得了分子量约为23.5 kD的单一蛋白带。
- 王松涛陈丽丽杜启艳常重杰
- 关键词：生长激素基因克隆原核表达
