湛江市科技攻关计划项目(2007C07004)
- 作品数：2 被引量：5H指数：2
- 相关作者：许琴英徐建华朱家勇金小宝李素芹更多>>
- 相关机构：广东医学院广东药学院更多>>
- 发文基金：湛江市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 基因工程技术在抗菌肽研究应用中的作用被引量：2
- 2012年
- 抗菌肽具有抗菌谱广、热稳定性好、抗菌机制独特、不易产生耐药性等优点,有望成为抗生素最理想的替代品。然而,由于传统方法获得抗菌肽产量低、费时长、费用昂贵,无法实现大规模生产,这成为制约抗菌肽进入实际应用的最大障碍。因此,通过基因工程技术获得抗菌肽成为最为经济、科学的方法。现就抗菌肽的分类、作用机制及获取抗菌肽的方法等方面进行综述。
- 李素芹许琴英
- 关键词：抗菌肽基因工程
- 抗菌肽Defensin真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的 构建家蝇幼虫抗菌肽的真核表达载体,并检测它在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达情况.方法 以pUCm-T/Defensin为模板,设计带His标签特异引物,扩增C-末端融合6×His标签的Defensin基因的cDNA全长编码区序列,将其克隆至pcDNA3.1（＋）真核表达载体.经酶切及测序鉴定后,以阳离子脂质体Lipofect AmineTM 2000转染CHO细胞,G418抗性筛选稳定转染的阳性克隆细胞,以RT-PCR分析其mRNA的转录情况,通过Ni-NTA琼脂糖柱层析纯化目的蛋白并以Western免疫印迹鉴定蛋白质表达情况.结果 构建了pcDNA3.1 （＋）-Defensin-His表达质粒,建立了稳定转染的CHO细胞系.RT- PCR从阳性克隆CHO细胞系中扩增出320 bp大小的目的片段,从转录水平证实pcDNA3.1（＋）-Defensin-His重组细胞株表达了Defensin基因.Western免疫印迹检测可见相对分子质量为10000的阳性条带,表明Defensin-His在该细胞系中成功表达.结论 成功构建了质粒pcDNA3.1（＋）-Defensin-His,并获得了稳定表达的CHO-Defensin细胞株,有利于进一步研究家蝇幼虫抗菌肽Defensin基因的生物学功能.
- 许琴英朱家勇金小宝徐建华
- 关键词：基因表达真核细胞中国仓鼠卵巢细胞
