福建省科技计划项目(2011R1025-8)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：程龙飞万春和陈红梅施少华傅光华更多>>
- 相关机构：福建省农业科学院福建农林大学更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目福建省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭RLRs和IFN基因SYBRGREENⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
- 2015年
- 首次建立以 GAPDH 为内参，同时检测鸭 RIG-I 、MDA5、IFN-α和 IFN-γ等4种 mRNA 相对表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR 方法（RT-FQ-PCR）。以目的基因的克隆质粒为标准品，建立标准曲线，并进行熔解曲线、重复性及稳定性分析。该方法 Ct 值线性范围为12．0～32．0；目的基因（RIG-I 、MDA5、IFN-α、IFN-γ）和内参基因（GAPDH）的扩增效率均在95％～105％，其相关系数均在0．99以上；扩增产物的熔解曲线都只出现1个特异性单峰，无引物二聚体或其他非特异性产物生成，RIG-I 、MDA5、IFN-α、IFN-γ和 GAPDH 的 Tm 值依次为（81．9±0．33）、（81．9±0．32）、（93．6±0．23）、（81．8±0．28）、（87．8±0．24）℃，其敏感度均达到100 copies·μL－1，重复性和稳定性好，为从 mRNA 水平上深入研究 RIG-I 样受体、干扰素与鸭机体免疫功能相关性奠定了基础。
- 陈翠腾傅光华黄瑜傅秋玲万春和程龙飞陈红梅施少华
- 关键词：RIG-I干扰素实时荧光定量PCR
- 鸭坦布苏病毒囊膜E蛋白的原核表达被引量：2
- 2014年
- 利用RT-PCR方法扩增鸭坦布苏病毒分离株(WR株)全长E蛋白基因,克隆到pEASY-T3载体中,经Bam HI和XhoI酶切后将目的片段连接入pET-32a载体,构建原核表达重组质粒pET-E。表达质粒转化入感受态细胞BL21(DE3)后,经IPTG诱导后表达出鸭坦布苏病毒E蛋白,并以包涵体的形式存在,Westernblotting试验呈阳性,表明E蛋白有很好的反应原性。
- 施少华程龙飞傅光华陈红梅万春和傅秋玲林建生黄瑜
- 关键词：E基因原核表达
- 种番鸭源禽坦布苏病毒分离鉴定及基因组序列分析被引量：3
- 2014年
- 种番鸭是否感染禽坦布苏病毒颇受国内学者关注。本研究于国内外首次自表现产蛋下降的种番鸭卵巢中分离获得1株病毒(命名为WYZLJ-1359株),经RT-PCR方法鉴定为禽坦布苏病毒。经比较分析该病毒与我国其他禽源分离株全基因组序列表明,种番鸭源分离株WYZLJ-1359主要分子特征未出现变异,与2010年以来我国分离的其他禽源分离毒株的核苷酸序列同源性均在98.4%以上,且亲缘关系非常近,遗传距离均在1.8%以下,远低于与2000年以前分离的坦布苏病毒分离株之间的遗传距离。以上结果表明,我国禽坦布苏病毒感染的宿主在不断增加,但病毒在不同品种家禽的传播过程中遗传较为稳定,基因组未出现基因的缺失或插入等变异现象。
- 傅光华陈红梅黄瑜万春和傅秋玲程龙飞施少华林建生
- 关键词：种番鸭基因组
- 检测鸭坦布苏病毒乳胶凝集试验的建立及初步应用被引量：6
- 2014年
- 以制备的鸭坦布苏病毒单克隆抗体致敏乳胶,建立检测鸭坦布苏病毒抗原的乳胶凝集方法。经优化后确定其最佳致敏抗体量为300μg、最佳致敏时间为3h、致敏温度为37℃。以乳胶凝集试验和RT-PCR对73份自然感染病例进行检测,分别检出阳性27、31份,两者检出的阳性符合率为87.1%。本方法快速、简便,适用于基层应用。
- 施少华万春和傅光华程龙飞陈红梅傅秋玲林建生黄瑜
- 关键词：乳胶凝集试验病毒抗原
- 鸭坦布苏病毒感染对鸭免疫器官指数和体液免疫的影响
- 2014年
- 鸭坦布苏病毒是近年来在我国发现的可引起种（蛋）鸭高热、采食量和产蛋量骤降的新病毒。本研究以麻鸭为动物模型，测定麻鸭感染鸭坦布苏病毒后，其免疫器官指数、重组H5亚型禽流感病毒灭活疫苗和鸡新城疫病毒弱毒活疫苗诱导产生的抗体水平。结果表明，鸭坦布苏病毒感染会侵害麻鸭的免疫器官，第1～3d脾脏明显肿大，第7～10d试验组胸腺指数极显著低于对照组，第1～14d法氏囊出现萎缩；与仅免疫疫苗的对照组鸭相比，感染鸭坦布苏病毒后再注射疫苗的试验组鸭产生抗体的时间延迟、抗体的峰值降低，抗体下降加快，且在整个试验期内产生的抗体水平均低于对照组鸭的抗体水平，表明鸭坦布苏病毒感染可抑制鸭对灭活疫苗和弱毒疫苗的体液免疫应答能力。
- 陈翠腾傅光华黄瑜程龙飞陈红梅万春和傅秋玲施少华林建生
- 关键词：免疫器官指数抗体体液免疫
