国家自然科学基金(81272986)
- 作品数：18 被引量：43H指数：4
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- 微小RNA-7对人神经母细胞瘤侵袭和转移能力的影响被引量：7
- 2013年
- 目的探讨微小RNA-7（miR-7）对神经母细胞瘤侵袭和转移能力的影响。方法将化学合成的miR-？在阳离子脂质体Lipofectamine2000的介导下，瞬时转染人神经母细胞瘤细胞株，实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测细胞中miR-7表达水平；黏附实验和Transwell小室实验检测体外癌细胞游走和侵袭能力；裸鼠转移模型检测体内癌细胞转移能力。结果化学合成miR-7转染神经母细胞瘤后，miR-7表达上调1128．3倍（P〈0．01），细胞黏附能力下降51．3％（P〈0．01），细胞侵袭能力下降52．9％（P〈0．01），裸鼠体内转移能力下降。结论miR-7转染细胞后能抑制瘤细胞的侵袭和转移能力。
- 张桓瑜鹿洪亭董蒨杨传民郝希伟苏南
- 关键词：神经母细胞瘤
- CXCL12及AMD3100对神经母细胞瘤细胞增殖及转移的影响
- 2013年
- 目的探讨CXCL12（SDF-1，基质细胞衍生因子-1）对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞体外增殖及迁移的影响及CXCL12受体拮抗剂AMD3100对其阻断作用。方法用浓度为100ng／mlCXCL12刺激人神经母细胞瘤细胞系QDDQ-NM、SK—N-SH、SH—SY5Y三组细胞，MTT法检测CXCL12对神经母细胞瘤细胞增殖的促进作用。用不同浓度的CXCL12（0、30、50、100ng／m1）诱导三组细胞，Transwell体外趋化迁移实验检测三组神经母细胞瘤细胞迁移能力，再用100ng／mlAMD3100孵育三组细胞后应用CXCLl2诱导，Transwell体外趋化迁移实验检测三组神经母细胞瘤细胞迁移能力的变化。结果MTT结果示在一定时间范围内，CXCL12可促进QDDQ-NM、SH—SY5Y神经母细胞瘤细胞增殖，效果随着时间的延长而增强，在48h时，促进增殖效应达最大，与空白调零组及空白对照组比较有明显差异（P〈0．05）。Transwell体外趋化侵袭实验表明：CXCL12可促进QDDQ-NM、SHSY5Y神经母细胞瘤细胞的迁移能力，迁移细胞数明显高于对照组（P〈0．05），在一定范围内，CXCLl2为50g／ml时作用最强（P％0．01）；且AMD3100均可抑制三组细胞迁移能力（P〈O．05）。结论CXCR4-CXCLl2生物学轴在神经母细胞瘤细胞增殖及嗜器官特异性转移侵袭过程中发挥了重要作用，而AMD3100可阻断神经母细胞瘤的增殖、侵袭能力。
- 姜忠关鸽陈鑫王莉张虹江布先董蒨
- 关键词：趋化因子CXCL12神经母细胞瘤肿瘤转移
- miR-203靶定CAMTA1基因调控神经母细胞瘤细胞的迁移能力被引量：1
- 2014年
- 目的本研究旨在探讨miR-203在神经母细胞瘤组织中的表达水平及其在神经母细胞瘤细胞迁移过程中的作用机制。方法在神经母细胞瘤细胞中转染miR-203抑制剂，通过Transwell迁移实验研究其对迁移的影响。利用生物信息学技术预测miR-203的靶基因，并应用荧光报告基因检测、实时荧光定量PCR及WesternBlot对靶基因进行验证。采用siRNA干扰技术抑制靶基因CAMTA1的表达，共转染miR-203抑制剂及CAMTA1 siRNA，验证miR-203是否是通过靶基因影响细胞迁移。最后应用荧光定量PCR方法检测原发性和转移性神经母细胞瘤样本中miR-203的表达。结果神经母细胞瘤细胞系SH-SY-5Y和SK-N-SH中抑制miR-203表达后，与转染miR抑制剂对照相比，细胞迁移数目分别降低了41．34％和37．86％（P〈0．05）。miR-203能够直接靶向结合CAMTA1mRNA的野生型圳TR，转染miR-203抑制剂后，SH-SY-5Y和SK-N-SH细胞中内源性CAMTA1蛋白表达分别是转染miR阴性对照的2．13和1．78倍。（P〈0．05）。转染过表达CAMTA1质粒，SH-SY-5Y和SK-N-SH细胞迁移数目分别下降了25．27％和19．48％（P〈0．05）。在SH-SY5Y细胞中，同时共转miR-203抑制剂和CAMTA1 siRNA，与单纯转染miR-203抑制剂相比，细胞迁移能力增高了19．37％和（P〈0．05），与单纯转染抑制剂对照组相比，无统计学差异（P〈0．05）。与原发性神经母细胞瘤相比，在转移性神经母细胞瘤中，miR-203表达水平更高（P〈0．05）。结论miR-203与神经母细胞瘤样转移性相关，并且能够通过靶定CAMTAl基因影响神经母细胞瘤细胞的迁移能力。
- 刘志洋刘伟伟孙梅陈鑫韩芦芦董蒨
- 关键词：神经母细胞瘤RNA小分子干扰
- MiR-483-3P下调RIOK3蛋白表达促进神经母细胞瘤的增殖和迁移被引量：1
- 2016年
- 目的探讨microRNA-483-3P(miR-483-3P)对神经母细胞瘤细胞的增殖、侵袭及迁移能力的影响,预测并验证miR-483-3P的靶基因及其对靶基因的影响。方法 miRNA微阵列芯片结果发现miR-483-3P在神经母细胞瘤中表达上调,差异倍数显著,并居于差异表达miRNA的首位。利用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将化学合成的miR-483-3P inhibitor、miR-483-3P inhibitor的阴性对照序列分别瞬时转染人人神经母细胞瘤SH-SY-5Y细胞株中,RT-qPCR技术检测各组中miR-483-3P的表达水平,CCK-8法检测各组癌细胞的增殖情况,Transwell小室实验检测各组癌细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学软件预测miR-483-3P的靶基因并用荧光素酶报告基因检测实验、Western blot实验加以验证。结果与癌旁正常组织相比,miR-483-3P在神经母细胞瘤中高表达(P<0.01);与阴性对照组相比,癌细胞转染miR-483-3P inhibitor后,miR-483-3P表达显著下调(P<0.01),细胞的增殖情况和体外迁移能力均降低(P<0.05)。生物信息学软件预测出RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后荧光酶活性升高(P<0.01)。与阴性对照组相比,当细胞转染了miR-483-3P inhibitor后在蛋白质水平RIOK3表达升高(P<0.01)。结论.RIOK3是miR-483-3P的靶基因之一,miR-483-3P能下调RIOK3的表达并显著促进神经母细胞瘤细胞的增殖和体外迁移。
- 李晓鹿洪亭董蒨郝希伟赵静刘铭
- 关键词：神经母细胞瘤细胞增殖靶基因
- 手术联合OPEC方案化疗对神经母细胞瘤患儿免疫功能及预后的影响被引量：1
- 2020年
- 目的探讨手术联合OPEC方案化疗对神经母细胞瘤(NB)患儿免疫功能及预后的影响。方法收集2016年1月—2018年12月本院收治的80例NB患儿资料,依据是否行手术治疗分为观察组(41例)和对照组(39例)。对照组仅接受OPEC方案(长春新碱+顺铂+依托泊苷+环磷酰胺)化疗;观察组在接受OPEC方案化疗后行手术治疗,两组均化疗6个疗程。检测两组患儿治疗前后细胞免疫指标(TTL、THL、TSL、CD4^+/CD8^+、NK细胞)和体液免疫指标(免疫球蛋白IgA、IgG、IgE、IgM)的水平。观察两组治疗期间的药物不良反应,并进行随访,统计患儿死亡情况。结果治疗后,两组患儿的TTL、CD4^+/CD8^+水平明显下降,THL、TSL、NK细胞水平明显上升,差异均有统计学意义(P<0.05),且观察组TTL、THL、CD4^+/CD8^+、NK细胞水平明显高于对照组,TSL水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组患儿IgA、IgG、IgE、IgM水平明显下降,且观察组显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患儿1年、2年生存率分别为80.00%、53.33%,对照组分别为63.64%、45.46%,经Log-rank检验,两组患儿的生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论手术联合OPEC方案化疗可减轻OPEC方案单独化疗对NB患儿免疫功能下降的影响,且不增加预后不良的风险,对于NB的治疗具有积极意义。
- 周宇翔唐湘莲黄召肖雅玲
- 关键词：神经母细胞瘤免疫预后
- miR-93对神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响及机制研究被引量：10
- 2015年
- 目的研究miR-93对神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移能力的影响及可能的分子机制。方法收集13例确诊的神经母细胞瘤患儿原发部位和转移部位组织样本，利用实时定量PCR的方法检测样本中miR-93的表达水平。在神经母细胞瘤细胞SH—SY5Y和SH—N-SH细胞中转染miR-93mimic，转染24h后利用实时定量PCR技术检测SH—SY5Y和SH—N-SH中miR-93的表达水平。利用Transwell侵袭实验检测过表达miR-93后对细胞侵袭能力的影响。利用体外划痕实验检测过表达miR-93对细胞迁移能力的影响。利用Western blot方法检测过表达miR-93mimic后SH—SY5Y和SH-N-SH细胞中MYCN蛋白表达水平。在Targetscan中找出可能与miR-93作用的MYCN的3’UTR序列，设计合成野生型与突变型MYCN的3’UTR的PCR引物，构建野生型与突变型荧光素酶报告载体，用X-tremeGENE将荧光素酶报告载体分别与miR-93mimic共转染到SH—SY5Y细胞中，用双荧光素酶检测试剂盒检测荧光素酶活性，验证miR-93对MYCN的靶向调控作用。结果与原发性神经母细胞瘤相比，miR-93在转移瘤中表达显著降低。过表达miR-93后SH—SY5Y和SH—N-SH细胞侵袭和迁移能力显著降低。过表达miR-93后，SH-SYSY和SH-N-SH细胞内MYCN蛋白表达下调。荧光素酶活性检测表明miR-93能够抑制MYCN的荧光素酶活性。结论MiR-93能够通过负调控MYCN而抑制神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移能力。
- 陈鑫韩芦芦姜忠郝希伟段于河张虹董蒨
- 关键词：神经母细胞瘤肿瘤转移荧光素
- 微小RNA-335通过靶定人类表皮生长因子3调控乳腺癌细胞的侵袭被引量：4
- 2015年
- 目的 观察微小RNA（miR）-335在乳腺癌细胞侵袭中的作用.方法 分别在Basallike类型正永用生化细胞MCF10A和Luminal A乳腺癌细胞MCF7中抑制和过表达miR-335的含量,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的改变;利用生物信息学网站预测miR-335靶基因,并用荧光报告基因检测实验验证;应用miR-335抑制剂及靶基因siRNA单转染和共转染,验证miR-335是否通过靶基因执行功能.最后利用实时荧光定量聚合酶链反应检测在35例原发性乳腺癌组织中miR-335的表达水平.结果 在MCF10A内敲减miR-335,细胞发生侵袭的数目由对照组51个增加到实验组的67个,促进细胞侵袭的能力（P＜0.05）.在MCF7中过表达miR-335后,由对照组侵袭数目51个降至实验组43个,抑制细胞侵袭的能力（P＜0.05）.miR-335能够靶向结合人类表皮生长因子3（ERBB3）的mRNA的3＇-非翻译区（3＇-UTR）,抑制ERBB3 mRNA及蛋白水平表达（P＜0.05）.敲减ERBB3后能够恢复miR-335低表达造成的细胞侵袭能力的降低（P＜0.05）.miR-335在原发性乳腺癌组织中表达为正常组织的0.75,呈显著低表达（P＜0.01）.结论 在原发性乳腺癌组织样本中,miR-335低表达,并且通过靶向ERBB3影响细胞的侵袭能力.
- 刘志洋刘伟伟贾萍陈鑫董蒨
- 关键词：乳腺癌
- 神经母细胞瘤不同侵袭能力细胞株的建立及研究被引量：2
- 2013年
- 目的建立同一患儿神经母细胞瘤（NB，neuroblastoma）细胞系来源的不同侵袭能力的细胞株，探讨CXCR4（趋化因子受体4）的表达水平对神经母细胞瘤细胞株体外侵袭能力的影响。方法采用有限稀释法，从人神经母细胞瘤细胞系（QDDQ-NM）中获得5株CXCR4表达水平不同的单克隆细胞株，应用免疫组化和Rrr_PCR检测细胞株CXCR4蛋白和CXCR4mRNA的表达水平，Tran—swell体外趋化侵袭实验检测5株细胞株趋化侵袭能力的差异。结果CXCR4在细胞株QDDQ-NM1中的表达（94．20±4．19）明显高于细胞株QDDQ-NM5（79．58±5．10），P〈0．05；CXCIⅥmRNA在QDDNM1中的表达（2．26±0．23）明显高于细胞株QDDKvNM5（1．83±0．08），Pd0．05。QD—NM1的体外趋化侵袭能力（54±4）明显强于QDDQ-NM5（45±1．58），P〈0．05，其与CXCR4蛋白和CXCR4mRNA表达水平呈正相关。结论同一患儿神经母细胞瘤细胞系中的细胞具有异质性，不同细胞株的侵袭能力不同，神经母细胞瘤细胞株高度的体外侵袭能力与CXCR4的高表达呈高度相关性。
- 陈鑫董蒨于倩倩鹿洪亭杨传民张虹
- 关键词：CXCR4受体趋化因子神经母细胞瘤肿瘤转移
- miR-144通过靶定ITGβ1调控神经母细胞瘤的侵袭转移被引量：2
- 2017年
- 目的 本研究旨在探讨miR-144对神经母细胞瘤的侵袭和转移的影响,并探索miR-144是否通过靶定ITGβ1调节神经母细胞瘤的侵袭和转移.方法 利用生物信息学技术预测miR-144的靶基因ITGβ1,应用荧光报告基因检测以及荧光定量PCR、Western Blot实验对靶基因进行验证.在神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-BE分别瞬时转染化学合成的成熟双链miR-144和靶基因敲降质粒及对照质粒,建立过表达miR-144细胞模型和靶基因敲降细胞模型.通过 Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的体外侵袭和转移能力.结果 Transwell实验结果表明,在神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和SK-N-BE中过表达miR-144后,细胞的侵袭数目分别为41±2和55±2,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）.抑制ITGβ1基因的表达后,体外划痕实验结果表明,过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞的转移能力分别下降了65.45%和75.41%（P〈0.01）.荧光报告基因检测结果显示过表达miR-144后,含有结合位点的荧光报告质粒的相对荧光量降低了37.11%（P〈0.01）,而将结合位点进行基因突变后miR-144对靶基因的抑制作用消失.过表达miR-144后,与对照组相比,SH-SY5Y和SK-N-BE细胞内的ITGβ1 mRNA水平分别降低了40%和43%,Western Blot检测结果显示,ITGβ1蛋白水平分别降低了39%和40%.结论 miR-144通过靶定ITGβ1基因抑制神经母细胞瘤的侵袭和转移过程.
- 吴翮徐升公红磊韩芦芦陈鑫
- 关键词：神经母细胞瘤
- miR-338—3p对神经母细胞瘤增殖和侵袭的抑制作用被引量：5
- 2013年
- 目的探讨microRNA-338—3p（miR-338—3p）对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH和SK-N-MC增殖、侵袭和迁移能力的影响，miR靶基因的确定及靶基因功能的研究。方法miRNA芯片结果发现miR在神经母细胞瘤中低表达，利用实时定量PCR验证其结果。利用脂质体Lipofectamine TM2000将miR-338—3pmimics和miR-338—3p的反义寡核苷酸链（ASO）以及对照质粒分别瞬时转染SK-N-SH和SK-N-MC两种细胞系，MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学技术预测miR-338—3p的靶基因，并应用EGFP荧光报告载体实验，实时荧光定量P（’R和Westernblot实验对靶基因进行验证。并利用实时定量PCR检测神经母细胞瘤中靶基因的表达。最后，将靶基因的敲降质粒和过表达质粒以及对照空质粒分别瞬时转染细胞，MTT法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验来检测细胞的体外侵袭和迁移能力。结果实时定量PCR显示与癌旁正常组织相比，miR-338-3p在神经母细胞瘤细胞中低表达（P〈0．01）；癌细胞转染miR-338-3pmimics后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是减弱的（P〈0．01），而在转染了miR-338-3p的AS（3封闭miR-338—3p的表达后，细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比是增强的（P〈0．01）。利用生物信息学方法将RAB14基因作为miR-338—3p的候选靶基因，EGFP荧光报告载体实验显示过表达miR-338—3p可以抑制含有miR-338-3p结合位点的报告载体的荧光量（P〈0．01），而将结合位点的碱基进行突变后miR-338-3p对靶基因3’UTR的抑制作用则消失。实时荧光定量PCR和Westernblot结果表明过表达miR-338-3p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制RAB14的表达（P〈0．01），而用ASO抑制miR-338—3p的表达后RAB14的水平升高（P〈0．01）。实时定量PCR
- 鹿洪亭董蒨陈鑫张虹郝希伟韩芦芦
- 关键词：神经母细胞瘤细胞增殖微RNAS
