江苏省教育厅自然科学基金(Q1114020)
- 作品数：4 被引量：13H指数：2
- 相关作者：姜秀英朱江朱艳曹广力贡成良更多>>
- 相关机构：江苏省徐州医药高等职业学校苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省教育厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- His-猪生长激素融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化被引量：7
- 2005年
- 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建出能利用Ni-NTAAgarose柱一步纯化表达产物的重组质粒pPGH020。探讨了大肠杆菌中重组猪生长激素的最佳表达条件和纯化方法,制备并纯化了兔抗pGH抗体。SDS鄄PAGE和Westernblot的分析结果表明,26.5kD处有包括His·Taq、thrombin位点序列和pGH序列的融合蛋白特异条带。凝胶扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌胞浆蛋白的17.3%左右。
- 朱江曹广力姜秀英王雪峰朱艳邓忠斌李新平沈颂东马泓冰贡成良
- 关键词：猪生长激素基因大肠杆菌表达抗体IGG
- His-猪生长激素融合基因在Bm-N细胞和蚕体内的表达与纯化被引量：2
- 2005年
- 用构建的带有His-Tag pgh融合基因的重组杆状病毒Bm-BacPAK6-pgh研究了Bm-BacPAK6- pgh在家蚕细胞(Bm-N)和蚕体内的表达,并对蚕体表达产物进行了纯化.SDS-PAGE电泳分析显示,重组病毒Bm-BacPAK6-pgh在Bm-N细胞、蚕体中得到了融合表达,Wemrn blot分析表明,Bm-N细胞、蚕体中表达的融合蛋白与大肠杆菌表达的猪生长激素具有相同的抗原性.Bm-BacPAK6-pgh在Bm-N细胞内的表达始于24h,而蚕体中的表达始于72h,二者的表达峰分别在96h和120h.经40%饱和度硫酸铵盐析和Ni -NTA Agarose亲和柱二步纯化可获得SDS-PAGE电泳纯的具有抗原性的重组猪生长激素融合蛋白.
- 姜秀英朱艳彭建明曹广力朱江
- 关键词：猪生长激素融合基因BIN家蚕细胞电泳分析蚕体
- 重组猪生长激素抗体的制备与纯化
- 2006年
- 为了获得重组猪生长激素抗体,对重组猪生长激素融合基因的真核表达产物进行免疫印迹(Western blot)检测,将利用DNA重组技术构建的重组质粒pPGH020在大肠杆菌(E.coli)BL21中进行诱导表达.表达产物经Ni+亲和层析柱纯化,获得纯化的重组猪生长激素融合蛋白.然后以此为抗原免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,抗体再经硫铵沉淀、透析和亲和层析纯化.Western印迹结果表明,该纯化抗体显示了良好的免疫反应,其灵敏度比兔抗rpGH抗血清提高50倍,为猪生长激素融合基因在真核细胞的表达及功能鉴定奠定了基础.
- 姜秀英朱江
- 关键词：免疫印迹免疫多克隆抗体
- 6×His-猪生长激素融合基因在家蚕生物反应器中的表达被引量：5
- 2004年
- 将通过PCR技术改建并去除了信号肽的猪生长激素cDNA基因克隆入转移载体pBacPAK His1,构建了重组转移载体pPGH0 30 ,进而将pPGH0 30与线性化病毒Bm BacPAK6共转染BmN细胞 ,成功获得了猪生长激素重组杆状病毒Bm BacPAK6 pgh。感染重组病毒的细胞可溶性蛋白SDS PAGE和Western blot分析结果显示 ,感染细胞蛋白电泳带的 2 5kD处有 1条猪生长激素特异带。Bm BacPAK6 pgh的BmN细胞培养液接种家蚕 5龄幼虫和蛹 ,感病幼虫与蛹血淋巴的SDS PAGE和Western blot分析结果表明 ,6×His 猪生长激素融合基因在家蚕体内得到了表达 ,特异性条带大小约为 2 5kD。
- 朱江姜秀英曹广力朱艳彭建明李新平沈颂东贡成良
- 关键词：猪生长激素融合基因家蚕生物反应器
