辽宁省自然科学基金(20032062)
- 作品数：8 被引量：18H指数：2
- 相关作者：朱悦王丰朱海涛孙德日王锋更多>>
- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 嗅鞘细胞促进脊髓损伤轴突再生机制的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨体外培养嗅鞘细胞的生物学特性与嗅鞘细胞促脊髓半横断大鼠轴突再生作用的关系。方法用改良的Nash法培养嗅鞘细胞,进行长时间连续观察,将鉴定后的细胞移植于成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,在4周时取材,应用p75、NF200和GAP43免疫组化染色等方法判断轴突再生情况。结果体外细胞培养观察发现嗅鞘细胞生长由散在分布逐渐趋向集中,并具有一定的规律性。移植术后4周,p75染色显示移植的嗅鞘细胞仍然存活,主要分布在损伤区周围,且p75阳性嗅鞘细胞呈条索状分布,与GAP43阳性着色神经纤维有共同分布区域。NF200和GAP43阳性神经纤维末端向嗅鞘细胞分布区偏转,而对照组并未见上述现象。结论嗅鞘细胞这种特有的生长方式在体内、外表现一致,与该细胞促进轴突再生的作用相关。
- 孙德日朱悦朱海涛王峰
- 关键词：脊髓损伤嗅鞘细胞轴突再生
- Nogo-P4对神经干细胞分化成神经元样细胞的影响被引量：2
- 2007年
- 目的观察Nogo-P4对神经干细胞分化成神经元样细胞是否存在抑制作用。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,分为A、B、C和D组,在神经干细胞分化过程中分别加入0μmol/L、2μmol/L、4μmol/L和6μmol/L的Nogo-P4,免疫荧光标记神经元样细胞,计数神经元样细胞分化比率,使用Image-ProPlus5.0软件测量神经元样细胞神经突长度。结果神经干细胞分化第3d,A-D各组神经元样细胞平均神经突长度分别为97.80±6.97μm、88.25±5.83μm、80.54±6.75μm和79.31±6.57μm;神经元样细胞比率分别为(35.82±6.53)%、(35.31±6.11)%、(38.97±5.79)%和(34.75±5.61)%。A-C组神经突长度随着Nogo-P4浓度的升高而下降,P<0.05;C、D组神经元样细胞神经突长度较A组缩短约17%;各组神经元样细胞分化比率无显著差异。结论Nogo-P4对神经干细胞分化过程中形成的神经元样细胞具有神经突生长抑制作用,对神经元样细胞分化比率无影响。
- 王丰朱悦
- 关键词：神经干细胞
- 嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。
- 朱海涛朱悦孙德日
- 关键词：嗅鞘细胞脊髓损伤硫酸软骨素蛋白聚糖
- 簇集蛋白在大鼠急性脊髓损伤组织中的表达及其意义被引量：1
- 2005年
- 目的 探讨簇集蛋白 (clusterin)在急性脊髓损伤组织中的表达及其在继发性脊髓损伤中可能发挥的重要作用。方法 采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠脊髓急性损伤模型 ,通过苏木素 伊红 (HE)染色及免疫组织化学染色观察损伤组和假手术组伤后 0. 5、1、3、7、14、2 1d脊髓损伤组织变性坏死及簇集蛋白的表达情况。结果 损伤组在伤后 1d簇集蛋白阳性表达开始增加 ,约在伤后 7d达到高峰 ,之后表达逐渐减少 ,伤后2 1d趋于稳定 ,随时间延长存在动态变化过程 ,并与脊髓损伤程度相一致。损伤组在伤后 1、3、7、14、2 1d簇集蛋白表达与假手术组及正常对照组差异有统计学意义 (P <0 . 0 1) ;假手术组及正常对照组伤后各时间点均有簇集蛋白阳性表达 ,但表达随时间延长无动态变化过程。结论 簇集蛋白在急性脊髓损伤组织中表达明显增加 ,并可能通过补体调节、抗凋亡及热休克蛋白活性等机制减轻继发性脊髓损伤。
- 李良满朱悦
- 关键词：阳性表达蛋白急性脊髓损伤手术继发性法制
- 嗅神经鞘细胞移植治疗实验性脊髓损伤的研究被引量：2
- 2007年
- 目的:观察移植体外培养的嗅神经鞘细胞(OEC)对大鼠脊髓左半侧横断伤的治疗作用。方法:将应用改良Nash法培养的OECs移植到成年大鼠T10脊髓左半侧横断处,8周后分别采用改良Tarlov法运动学功能评分、辣根过氧化物酶(HRP)顺行示踪、透射电镜观察、P75免疫组织化学染色及HE染色等方法,观察动物的运动功能、脊髓再生的轴突和髓鞘、OEC的存活和脊髓损伤程度。结果:8周时治疗组运动学功能评分高于对照组(P<0.05);治疗组再生轴突穿越损伤区,对照组则无再生轴突穿越;超微结构显示治疗组轴突数量多于对照组,且髓鞘的完整性强于对照组,OEC表现为星形胶质细胞样和雪旺氏细胞样两种,包绕轴突髓鞘;免疫组化染色显示移植后8周OECs仍然存活,在损伤区均匀、散在分布;损伤后8周脊髓损伤区有胶质瘢痕及空洞形成。结论:移植的嗅神经鞘细胞可促进大鼠运动功能的恢复、脊髓轴突的再生和髓鞘的重塑。
- 王锋朱悦孙德日朱海涛
- 关键词：嗅神经鞘细胞原代培养脊髓损伤轴突
- RNA干扰沉默神经干细胞Nogo-66受体基因阻断Nogo-66抑制神经突生长作用的研究被引量：6
- 2007年
- 目的检测Nogo-66是否对大鼠脊髓来源神经干细胞分化形成的神经元具有神经突生长抑制作用,以及其抑制作用是否可以通过沉默Nogo-66受体(Nogo-66 receptor,NgR)基因的方法进行阻断。方法体外培养大鼠脊髓来源神经干细胞,经小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染以沉默NgR基因表达,用免疫荧光法和Western blot检测神经干细胞在转染前后NgR基因的表达。取神经干细胞分为四组,均在含10%胎牛血清的培养基中分化。对照组不加干预因素;Nogo-P4组在分化过程中加入Nogo-66的活性片段Nogo-P4;siRNA组神经干细胞经siRNA转染使NgR基因表达沉默后开始分化;siRNA加Nogo-P4组神经干细胞经siRNA转染后在含有10%胎牛血清和Nogo-P4的培养基中分化。免疫荧光法标记分化形成的神经元,测量神经突长度,比较各组神经突长度的变化。结果悬浮培养的细胞形成典型的神经球,经免疫荧光检测Nestin表达阳性。加入10%胎牛血清分化1周后,可观察到神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白质和髓鞘碱性蛋白标记阳性的细胞。siRNA转染后24h,大部分神经干细胞NgR基因染色转为阴性,Western blot检测神经干细胞NgR基因表达显著降低,NgR基因阻断效率为90.35%±3.10%。神经干细胞分化第3天形成的神经元神经突长度在对照组为97.80±6.97μm,Nogo-P4组为80.54±6.75μm,siRNA组为92.14±7.27μm,siRNA加Nogo-P4组为94.01±8.37μm。Nogo-P4组与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.01),对照组、siRNA组和siRNA加Nogo-P4组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Nogo-66对神经干细胞分化形成的神经元有神经突生长抑制作用,可以通过RNA干扰技术使神经干细胞NgR基因表达沉默,并阻断Nogo-66抑制神经突生长的作用。
- 王丰朱悦
- 关键词：神经干细胞RNA干扰
- 神经干细胞分化过程中NgR表达的变化被引量：1
- 2008年
- 目的检测大鼠脊髓来源神经干细胞分化过程中NgR的表达情况。方法悬浮培养法培养大鼠脊髓来源的神经干细胞,形成神经球后,以免疫荧光法鉴定神经干细胞,检测神经球及其分化后不同时间点、不同细胞亚型的NgR表达情况。结果神经干细胞分化前和分化第1天所有细胞都显著表达NgR,NgR表达阳性率在分化第2天降至82.1%±4.14%,分化第3天降至最低点35.3%±4.31%。分化后形成的细胞中只有神经元和少量未分化细胞表达NgR,星形胶质细胞和少突胶质细胞不表达NgR。结论在神经干细胞分化成星形胶质细胞和少突胶质细胞的过程中NgR基因表达被关闭,而在其分化成神经元的过程中则始终表达NgR。
- 王丰朱悦
- RNA干扰对离体大鼠神经干细胞NgR基因表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)对离体大鼠神经干细胞的Nogo-66受体(Nogo-66 recep-tor,NgR)基因表达的影响。方法设计并合成3条大鼠NgR基因mRNA的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siR-NA)转染体外培养的神经干细胞,免疫荧光及Western blot检测NgR表达。结果siRNA可以成功的转染神经干细胞,3条siRNA不同程度的阻断了神经干细胞的NgR基因表达,阻断效率随时间延长逐渐下降。阻断效果最好的1条siRNA在转染后第5d仍能保持(85.22±3.1)%高阻断效率。结论应用RNAi可以高效率的使大鼠神经干细胞的NgR基因表达沉默。
- 王丰朱悦
- 关键词：RNA干扰神经干细胞
