重庆市卫生局科研项目(2010-1-16)
- 作品数：6 被引量：33H指数：4
- 相关作者：甘华杨孟雪沈清汤为学周加军更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第一医院遵义医学院附属医院遵义医学院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局科研项目博士科研启动基金贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脂多糖对2型糖尿病肾病患者单核细胞TLR4水平及NF-κB,Notch1表达的影响被引量：9
- 2012年
- 目的:探讨2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者外周血单核细胞Toll样受体4(toll-like receptor,TLR4)的表达及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对其的影响,以了解炎症性免疫反应在DN中的可能作用机制。方法:收集30例2型DN尿毒症患者,10例早期2型DN患者和20例健康志愿者。采用外周血流式细胞术检测单核细胞TLR4的表达,并分离其外周血单个核细胞(PBMC),用LPS干预24 h,收集PBMC和上清液。分别采用Western印迹检测PBMC内TLR4,NF-κB p65和Notch1蛋白表达;免疫荧光检测NF-κB p65蛋白表达。ELISA法检测外周血血清及LPS干预后细胞上清液IL-6浓度。免疫比浊法检测血清CRP水平。结果:2型DN患者外周血单核细胞的TLR4荧光强度值、IL-6和CRP水平均高于正常对照组[TLR4荧光强度值:2型DN尿毒症患者2.8±0.9、早期2型DN患者3.4±0.7、正常对照组1.6±0.7;IL-6:2型DN尿毒症患者(84.8±20.7)pg/mL、早期2型DN患者(63.20±14.4)pg/mL、正常对照组(11.0±2.0)pg/mL;CRP:2型DN尿毒症患者(5.4±2.8)mg/L;早期2型DN患者(3.7±1.7)mg/L、正常对照组(1.7±0.7)mg/L,均P<0.01],LPS干预后2型DN患者PBMC的TLR4,NF-κB P65蛋白表达和IL-6水平明显高于正常对照组(P<0.05),早期2型DN患者PBMC以上指标水平均高于DN尿毒症患者,且2型DN患者NF-κB p65的表达存在核转移现象,但与正常对照组比较Notch1蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:DN患者体内可能存在单核细胞功能紊乱,这种功能紊乱可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关,与Notch1信号通路无关。
- 杨孟雪甘华沈清
- 关键词：2型糖尿病单核细胞TOLL样受体4NF-ΚB
- 慢性肾功能不全通过下调ABCA1表达影响巨噬细胞内胆固醇含量被引量：2
- 2013年
- 目的探讨慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量的变化及ATP结合盒受体A1(ATP binding cassettetransporter-A1,ABCA1)的表达情况。方法选取2010年8月至2012年3月重庆医科大学第一附属医院住院的慢性肾功能不全(chronic renal failure,CRF)患者30例和健康对照组20例。分离外周血单核细胞诱导贴壁巨噬化,油红O染色鉴定,应用酶法测定巨噬细胞内胆固醇含量,应用real-time PCR与Western blot方法测定细胞ABCA1的mRNA及蛋白表达。结果慢性肾功能不全患者巨噬细胞内胆固醇含量明显高于健康对照组(P<0.01),ABCA1在慢性肾功能不全患者巨噬细胞中的mRNA与蛋白表达显著低于健康对照组(P<0.01)。结论慢性肾功能不全患者巨噬细胞的胆固醇含量明显增加,胆固醇含量增加与慢性肾功能不全患者ABCA1的表达下调有关。
- 周加军甘华刘彩欣陈力学汤为学
- 关键词：ABCA1胆固醇含量慢性肾功能不全
- 肥胖症伴糖尿病患者血清对人源单核细胞TLR4/NF-κB信号通路的影响被引量：11
- 2014年
- 目的:探讨肥胖及伴糖尿病患者血清对人源单核细胞Toll样受体4/转录因子-κB(Toll-like receptor 4/nuclear factor-κB p65,TLR4/NF-κB p65)信号通路的活化作用,了解炎症性免疫反应在肥胖症中的可能作用机制。方法:正常对照组、单纯性肥胖组、肥胖伴糖尿病组每组20例,分离受试者血清,分别用各组血清干预THP-1细胞48 h后,Western印迹和免疫荧光检测THP-1细胞内NF-κB p65蛋白表达;RT-PCR检测TLR4 mRNA的表达;ELISA检测外周血血清干预后细胞培养上清单核细胞趋化因子-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)浓度。结果:单纯性肥胖组、肥胖伴糖尿病组血清干预THP-1细胞后,细胞内NF-κB p65磷酸化蛋白、TLR4 mRNA表达水平较正常对照组均有增高,且肥胖伴糖尿病患者高于单纯性肥胖患者(P<0.05),肥胖症患者NF-κB p65的表达存在核转移现象。正常对照组、单纯性肥胖组和肥胖伴糖尿病组血清孵育THP-1细胞48 h后,培养液上清中MCP-1的浓度分别为(26.4±3.9),(45.8±10.0),(58.0±15.3)pg/mL,肥胖症患者患者明显高于正常对照组,且肥胖伴糖尿病患者明显高于单纯肥胖患者(P<0.05)。结论:单纯性肥胖及肥胖的糖尿病患者的血清可不同程度地诱导单核细胞功能紊乱,这种功能紊乱可能与TLR4/NF-κB信号通路的激活有关。
- 杨孟雪杨波李显文甘华高琳李思成
- 关键词：肥胖症糖尿病炎症TOLL样受体4转录因子-ΚB
- 1,25-(OH)_2D_3及LPS对2型糖尿病肾病尿毒症患者单核细胞维生素D受体表达的影响被引量：5
- 2011年
- 目的探讨1,25-(OH)2D3及TLR4配体(脂多糖,LPS)对2型糖尿病(T2DM)和糖尿病肾病(diabetic ne-phropathy,DN)尿毒症患者血清干预的单核细胞维生素D受体(VDR)表达的影响,进一步探索1,25-(OH)2D3在T2DM和DN炎症性免疫反应中的作用。方法分离研究对象(健康对照组、T2DM组和DN尿毒症组)外周血血清,孵育THP-1单核细胞,然后于含或不含10-7mol/L的1,25-(OH)2D3培养液中培养48 h后,再用终浓度为1μg/ml的LPS干预24 h,收集单核细胞和培养上清。采用RT-PCR检测VDR mRNA表达,Western blot、免疫荧光检测THP-1单核细胞内VDR蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清IL-6和IL-10浓度。结果与正常对照组比较,在LPS的刺激下T2DM组和DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR mRNA水平下调[对照组(0.99±0.25);T2DM组(0.65±0.24);DN尿毒症组(0.62±0.27),P<0.05];DN尿毒症组THP-1单核细胞内VDR蛋白表达比正常对照组和T2DM组显著下调[对照组(0.48±0.05);T2DM组(0.50±0.06);DN尿毒症组(0.20±0.01),P<0.01],且LPS增强以上患者血清孵育的THP-1单核细胞炎症细胞因子IL-6的分泌[对照组(15.13±1.61);T2DM组(24.06±2.92);DN尿毒症组(70.77±5.48),P<0.05];而1,25-(OH)2D3可部分阻断上述作用。结论 LPS能下调T2DM和DN尿毒症患者单核细胞VDR mRNA和蛋白的表达,引起促炎和抗炎细胞因子失调。1,25-(OH)2D3可部分逆转LPS的作用,对T2DM和DN尿毒症可能具有一定的保护作用。
- 杨孟雪甘华沈清陈丹燕汤为学杨梅
- 关键词：2型糖尿病糖尿病肾病尿毒症1,25-(OH)2D3维生素D受体
- 不同方式血液透析对维持透析病人巨噬细胞ATP结合盒受体-1水平的影响被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨不同方式血液透析对维持透析病人巨噬细胞ATP结合盒受体-1表达水平的影响。方法:2010年8月至2012年3月,选取重庆医科大学第一附属医院长期规律透析的慢性肾衰患者60例,按不同血液净化方式分为2组:普通血液透析(hemodialysis,HD)组、血液透析滤过(hemodiafiltration,HDF)组,每组30例,同时选取健康体检者20例为对照组。分离外周血单核细胞诱导贴壁巨噬化,油红O染色鉴定为巨噬细胞,应用real-time PCR与Western blot方法测定细胞ATP结合盒受体A1(ATP-binding cassette receptor A1,ABCA1)、核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的mRNA及蛋白表达。结果:HD、HDF 2组患者巨噬细胞中ABCA1 mRNA与蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),并且HDF组患者巨噬细胞ABCA1 mRNA与蛋白表达高于HD组(P<0.05)。HD、HDF 2组患者NF-κB mRNA与蛋白表达高于对照组(P<0.01,P<0.05),HDF组较HD组NF-κB mRNA与蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:维持透析患者巨噬细胞的胆固醇外流功能明显降低,这种下调与透析病人NF-κB的表达增加有关,透析滤过可以增加透析病人ABCA1的表达。
- 周加军刘彩欣甘华王建敏林莉陈力学
- 关键词：核转录因子-KB血液透析滤过
- 2型糖尿病患者CD14^+CD16^+单核细胞的水平及其对LPS和IL-15刺激的反应被引量：5
- 2012年
- 目的:研究2型糖尿病(T2DM)患者外周血CD14+CD16+单核细胞的比例及脂多糖(LPS)联合白细胞介素15(IL-15)对其的影响,以了解炎症性免疫反应在T2DM中的可能作用机制。方法:对28例T2DM患者和20例健康志愿者外周血用流式细胞术检测CD14+CD16+单核细胞的比例,并分离其外周血单个核细胞(PB-MC),用LPS和IL-15干预4 h,收集PBMC和培养上清。分别采用Western blotting检测PBMC内STAT5和p-STAT5蛋白表达。免疫荧光检测p-STAT5蛋白表达,ELISA法检测外周血25-羟维生素D3[25(OH)D3]和IL-6浓度,免疫比浊法检测其外周血C-反应蛋白(CRP)水平,ELISA法检测LPS和IL-15干预后细胞培养上清IL-6和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度。结果:T2DM组外周血CD14+CD16+单核细胞数量明显高于正常对照组(P<0.01),并与血清CRP和IL-6水平呈正相关(r=0.394,P<0.05和r=0.741,P<0.01),与25(OH)D3浓度呈负相关(r=0.409,P<0.01),且25(OH)D3水平与CRP和IL-6水平均呈负相关(r=-0.479和r=-0.774,均P<0.01),LPS联合IL-15刺激后PBMC的p-STAT5蛋白表达水平和PBMC培养上清IL-6、MCP-1浓度明显高于正常对照组(P<0.01),且T2DM患者p-STAT5的表达存在激活现象。结论:T2DM患者体内存在单核细胞功能紊乱,这种功能紊乱可能与活性维生素D3不足有关,二者可能参与了T2DM患者体内免疫炎症反应并与微炎症互为因果,从而导致了T2DM及其并发症的发生发展;其作用机制可能与STAT5信号通路的激活有关。
- 杨孟雪甘华沈清汤为学
- 关键词：脂多糖类白细胞介素15
