中国博士后科学基金(200801273)
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 相关作者：段广才张荣光王琛范清堂孙楠更多>>
- 相关机构：郑州大学郑州市第七人民医院河南科技大学更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 大肠杆菌肠毒素基因突变体在乳酸菌中的表达与免疫学鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础。方法从前期构建的质粒p BV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体p NZ8110连接。用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从重组菌株中提取p NZ8110-mlt63,用于电转化Lactococcus lactis NZ3900菌株;经质粒双酶切和测序,鉴定重组菌株L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63。采用nisin诱导重组乳酸菌表达m LT63,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 mlt63 PCR扩增产物长度与预期相符;重组菌株鉴定结果显示L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63构建正确;Western blot分析在重组菌株中检出2条mlt63表达的蛋白带,分子量分别为10 k D和40 k D。结论本研究首次将mlt63基因克隆至乳酸乳球菌中,并表达出具有抗原活性的蛋白,鉴于目前亟需安全有效的黏膜免疫佐剂,本研究发现将对该领域研究产生重要影响,对胃肠感染性疾病口服疫苗研究具有促进作用。
- 王琛尹光辉尹光辉李健李健张荣光
- 关键词：乳酸乳球菌肠毒素基因重组免疫佐剂
- 幽门螺杆菌hspA-ureB融合基因在乳酸菌中的表达被引量：1
- 2016年
- 目的构建融合表达幽门螺杆菌(H.pylori)抗原Ure B与Hsp A的乳酸乳球菌(L.lactis)菌株,为H.pylori感染的疫苗和免疫诊断研究奠定基础。方法从前期构建的hsp A-ure B融合基因克隆菌株E.coli TB1/p MAL-c2x-hsp Aure B中提取质粒,用PCR方法从质粒中扩增hsp A-ure B基因,将扩增产物经限制性酶切后与表达载体p NZ8110连接,用于转化E.coli MC1061菌株,从转化子中提取重组质粒p NZ8110-hsp A-ure B,用电穿孔法将其转入L.lactis NZ3900菌株中,用乳链菌素诱导hsp A-ure B表达,应用PAGE分析表达产物。结果 hsp A-ure B基因的PCR扩增产物长度为2 085 bp,酶切、PCR和测序鉴定结果均显示L.lactis表达系统构建正确,PAGE分析未能确定融合基因表达条带。结论首次以L.lactis为宿主菌成功构建H.pylori 2种抗原的融合表达系统,研究发现对H.pylori口服疫苗和诊断技术发展具有重要意义。
- 张荣光孙楠段广才彭晓燕陈帅印范清堂
- 关键词：乳酸乳球菌热休克蛋白尿素酶幽门螺杆菌
- 幽门螺杆菌HspA乳酸菌疫苗构建及免疫反应性鉴定被引量：2
- 2013年
- 目的探讨幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中的克隆表达及免疫反应性。方法利用基因重组技术构建乳酸乳球菌重组子NZ3900/pNZ8110-hspA;绘制生长曲线,观察hs-pA插入对乳酸乳球菌重组子生长影响及乳酸链球菌素(Nisin)对重组子生长影响;采用钠十二烷基硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测HspA在乳酸乳球菌中的表达;应用western-blot鉴定重组子表达HspA的免疫反应性。结果成功扩增出幽门螺杆菌河南分离株(MEL-Hp27)的hspA基因,构建了hspA基因的乳酸乳球菌原核表达系统(NICE);细菌生长曲线显示hspA的插入未对乳酸乳球菌重组子的生长产生影响,除10 ng/mL Nisin对重组子生长影响较小外,20～100 ng/mL nisin对重组子的生长均有明显抑制;SDS-PAGE和Tricine SDS-PAGE检测均未观察到HspA条带;western-blot鉴定结果显示乳酸乳球菌表达的HspA抗原蛋白具有良好免疫反应性。结论HspA在乳酸乳球菌中的少量表达影响重组菌生长。
- 张小娟王新彩段广才张荣光
- 幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白在乳酸菌中的表达及免疫活性被引量：2
- 2017年
- 目的构建表达幽门螺杆菌(H.pylori)中性粒细胞激活蛋白A(NapA)的重组乳酸乳球菌菌株,为研究NapA作为疫苗抗原和免疫调节剂的应用效果奠定基础。方法用PCR方法从H.pylori基因组DNA中扩增napA基因,将napA经Nae I和SphⅠ双酶切与表达载体pNZ8110连接,用电穿孔法转入乳酸乳球菌菌株NZ3900中,并通过SDS-PAGE和Western blots分析鉴定napA表达产物。结果扩增的nap A基因长度为435 bp,构建的重组乳酸乳球菌经nisin诱导可表达分子量约为19 kD的重组蛋白,表达量约占菌体总蛋白量的12.4%,该重组蛋白可被小鼠抗H.pylori血清识别。结论成功构建了表达NapA的重组乳酸乳球菌菌株,该菌株在H.pylori口服疫苗和黏膜免疫调节研究中具有应用潜力。
- 彭晓燕张荣光段广才孙楠王琛张凌寒
- 关键词：乳酸乳球菌幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白免疫活性免疫调节
- 幽门螺杆菌金属蛋白酶基因生物信息学分析被引量：5
- 2019年
- 目的测定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)金属蛋白酶(metalloprotease,Mtp)基因mtp编码区核苷酸序列,采用生物信息学方法分析其编码蛋白(Mtp)的结构特征和生物学功能。方法用PCR方法从Hp MEL-Hp27菌株基因组DNA中扩增mtp基因,并通过基因测序获得mtp基因序列,运用生物信息学软件分析其编码的蛋白Mtp的氨基酸序列、理化性质、跨膜区、信号肽、糖基化和磷酸化位点、空间结构以及抗原表位。结果 MEL-Hp27mtp基因编码区长615bp,编码204个氨基酸;生物信息学分析显示mtp基因在不同菌株间的同源性为91%～98%,其编码的Mtp蛋白为一种性质不稳定、偏碱性、亲水蛋白;该蛋白无跨膜区和信号肽,含有糖基化和磷酸化位点;二级结构中α螺旋占52.45%,延长链占16.67%,β转角占4.41%,无规则卷曲占26.47%;三级结构分析显示Mtp为球形低分子质量蛋白;该蛋白含有M48蛋白家族特征性结构域、B淋巴细胞和CTL淋巴细胞相关抗原表位。结论 Hp Mtp为小分子碱性亲水性蛋白,定位于胞质或胞核,可能参与细胞信号传递、功能调控和Hp感染免疫及其致病过程。
- 余飞艳张惠娟张荣光王琛王海燕何梦雅范清堂段广才
- 关键词：幽门螺杆菌金属蛋白酶生物信息学磷酸化位点抗原表位
