辽宁省科技厅基金(2009225008-13)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
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- NK4基因重组慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达被引量：4
- 2011年
- 目的构建共表达人NK4基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒载体,转染人高侵袭转移肝癌细胞LM3(HCCLM3),观察其转染效率及表达情况。方法采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(IRES)-EGFP中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带NK4基因的质粒pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。以不同感染复数(MOI)的重组慢病毒感染293T细胞,筛选最适MOI,以最适MOI重组慢病毒感染HCCLM3细胞,观察转染效率。Western blot法测定细胞中NK4蛋白表达水平。结果成功构建共表达NK4基因和EGFP基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108 TU/mL。重组慢病毒感染HCCLM3细胞筛选其最适MOI为7。转染后HCCLM3细胞中可见明显的NK4蛋白表达,而未转染细胞中无NK4蛋白的表达。结论成功构建了NK4基因的重组慢病毒载体,有效地转染HCCLM3细胞后可高表达NK4蛋白。
- 李霏李松林尹元琴
- 关键词：NK4慢病毒载体基因转染
