国家自然科学基金(81360146)
- 作品数：12 被引量：19H指数：3
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- 高表达衰老标记蛋白30对高钙诱导人晶状体上皮细胞株SRA01/04氧化应激的影响被引量：2
- 2019年
- 【目的】探讨在高钙诱导细胞氧化应激下,高表达衰老标记蛋白30(SMP30)对人晶状体上皮细胞(HLEC)株SRA01/04增殖活力及抗氧化能力的影响。【方法】实验分3组:SMP30高表达组(OE,实验组)、NCOE组(阴性对照组)及SRA01/04组(空白对照组)。用OE及NCOE慢病毒载体分别转染SRA01/04细胞。15 mmol/LCaCl2处理细胞24 h建立高钙诱导模型。BrdU法检测细胞增殖、超氧化物歧化酶(SOD)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)/总谷胱甘肽(T-GSH)法检测细胞氧化指标。【结果】荧光显微镜下可见各组转染细胞有大量绿色荧光蛋白(GFP)表达,转染效率接近80%,提示SMP30高表达SRA01/04细胞模型构建成功。在高钙状态下,OE组细胞相对增殖活力(3.89±0.20)和SOD活力(U/mg,47.5±4.3)均高于NCOE组(2.82±0.34、30.6±4.2)及SRA01/04组(2.96±0.25、26.8±1.5),OE组GSSG/T-GSH比值(2.36±0.51)低于NCOE组(16.36±2.48)及SRA01/04组(20.12±2.54),上述差异均有统计学意义(n=3,P<0.05),NCOE组与SRA01/04组相比差异均无统计学意义(n=3,P>0.05)。【结论】高表达SMP30增加SRA01/04(HLEC)细胞增殖活力、SOD活力及下降GSSG/T-GSH水平,提示SMP30在一定程度上可缓解高钙诱导细胞氧化损伤的进程,可能对HLEC有保护作用。
- 李松蔓陈曦韩子豪THU THU WIN AINT衷昕唐东永梁皓
- 关键词：人晶状体上皮细胞高钙氧化应激超氧化物歧化酶谷胱甘肽细胞增殖
- 急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞株SRA01/04中衰老标记蛋白30、Caspase-3、Ca2+-ATP表达的变化被引量：2
- 2019年
- 目的:探讨在急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞株SRA01/04内衰老标记蛋白30(SMP30)、Caspase-3、Ca^2+-ATP表达的变化。方法:通过慢病毒转染建立SMP30过表达(OE)组、过表达空载对照(NC-OE)组、SMP30沉默(KD)组及沉默空载(NC-KD)组SRA01/04细胞,RT-PCR和Western blotting检测SMP30含量鉴定细胞是否转染成功;用300μmol/L H2O2 作用2 h,构建急性氧化应激状态时,PCR检测各组细胞SMP30基因的表达情况,Western blotting检测各组细胞SMP30、Caspase-30和Ca^2+-ATP蛋白的表达量。结果:在正常状态时,OE组SMP30基因及其蛋白表达量高于NC-OE组(P<0.05),KD组的SMP30基因及其蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。OE组及KD组细胞SMP30基因表达量均出现增加(P<0.05),与正常状态时相比,急性氧化应激状态时OE组细胞SMP30蛋白表达上调(P<0.05);正常状态时,OE组Caspase-3蛋白表达量低于NC-OE组,KD组Caspase-3蛋白表达量高于NC-KD组(P<0.05)。急性氧化应激状态时,OE组Caspase-3蛋白表达量低于NC-OE组,KD组Caspase-3蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时OE组Caspase-3蛋白表达量低于正常状态时;KD组的Caspase-3蛋白表达量高于正常状态时KD组(P<0.05)。在正常状态时,OE组Ca^2+-ATP蛋白表达量高于NC-OE组,KD组Ca^2+-ATP蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时,OE组Ca^2+-ATP蛋白表达量高于NC-OE组,KD组Ca^2+-ATP蛋白表达量低于NC-KD组(P<0.05)。在急性氧化应激状态时OE组的Ca^2+-ATP蛋白表达量高于正常状态时(P<0.05)。结论:在急性氧化应激状态时,SMP30含量出现反应性增加,过表达SMP30可能对人晶状体上皮细胞株SRA01/04具有抗氧化、抗凋亡、增加钙调节活性的作用。
- AINT THU THU WIN李松蔓韩子豪陈曦唐东永蒋林志梁皓
- 关键词：CASPASE-3
- 高钙状态对人晶状体上皮细胞株SRA01/04氧化应激水平的影响被引量：2
- 2017年
- 目的探讨高钙培养对人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)株SRA01/04氧化应激水平的影响。方法选取处于对数生长期的HLEC均匀接种96孔板(每孔2×10~3个细胞),对照组:正常培养的HLEC,实验组:正常培养的HLEC+CaCl_2(3 mmol·L^(-1)、5 mmol·L^(-1)、7 mmol·L^(-1)、9 mmol·L^(-1)、11 mmol·L^(-1)、13 mmol·L^(-1)、15 mmol·L^(-1)、17 mmol·L^(-1)、19 mmol·L^(-1))培养0 h、12 h、24 h、36 h,采用CCK-8法检测各组细胞存活率。利用定量检测试剂盒测量细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、总谷胱甘肽(total-glutathione,T-GSH)含量及氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)/T-GSH比值的变化。结果 3 mmol·L^(-1)、5 mmol·L^(-1)、7 mmol·L^(-1)CaCl_2处理SRA01/04细胞24 h,细胞存活率随CaCl_2浓度增高先呈显著下降趋势,当浓度增高到9 mmol·L^(-1)后细胞存活率又逐渐恢复,各实验组HLEC活力差异有统计学意义(P<0.05)。对照组细胞活力(0.592±0.055)与15 mmol·L^(-1)CaCl_2组(0.293±0.020)细胞活力相比差异有统计学意义(t=7.811,P<0.05)。CaCl_2引起HLEC凋亡的最合适浓度和作用时间为15 mmol·L^(-1)处理24 h。与对照组相比,15 mmol·L^(-1)CaCl_2处理24 h后,细胞核碎裂、溶解,细胞内SOD活力增高(t=-6.417,P<0.05),T-GSH含量下降(t=13.816,P<0.05),GSSG/T-GSH比值增高(t=-4.396,P<0.05)。结论 CaCl_2诱导的高钙状态抑制HLEC的活力,引起细胞内SOD活力和GSSG含量增加,诱发并加剧细胞内氧化应激反应。
- 陈曦韩子豪李舒凝李松蔓李艳玮梁皓
- 关键词：高钙人晶状体上皮细胞细胞活力
- IGF-1基因多态性与高度近视相关性的Meta分析(英文)
- 2015年
- 目的:应用Meta分析探讨IGF-1基因2个多态性位点(rs6214和rs12423791)与高度近视易患性的关系。方法:两名作者独立检索Pub Med、EMBASE、中国期刊全文数据库(CNKI)从建库到2014-03-12发表的文献,合并效应采用比值比和95%可信区间进行评价,Meta分析软件运用Rev Man5.2和Stata 12.0。结果:五篇病例对照研究进入Meta分析,包括病例组2585例,对照组3327例,各基因模型均显示两个位点基因多态性与高度近视易患性无显著相关性。结论:现有证据表明,尚不能认为IGF-1两个位点rs6214A/G,rs12324791G/C基因多态性与高度近视有关联性。
- 胡美霞梁晟崎杨帆梁皓杜毅谭少健
- 关键词：基因多态性高度近视IGF-1基因
- 钙调素在正常人及不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞中的表达被引量：1
- 2014年
- 目的检测钙调素(calmodulin,CaM)在正常人及不同年龄白内障患者晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)中的表达情况,探讨CaM与白内障发生发展的关系及其表达在白内障患者中是否有年龄相关性。方法收集18~28岁角膜移植患者的正常晶状体前囊膜12例,1~18岁(儿童组)、>18~45岁(青年组)、>45~60岁(中年组)、>60岁(老年组)白内障患者手术中环形撕除的晶状体前囊膜各12例,经固定、脱水、包埋、切片处理,间接免疫荧光方法检测CaM的表达量,拍照,IPP 6.0计算CaM的荧光值,SPSS 16.0进行统计学分析。结果 CaM在LEC中有表达,且主要表达在细胞浆,细胞核也有少量表达。同年龄组相比,青年组白内障患者LEC中CaM的表达量(0.507±0.288)高于正常组(0.297±0.007),差异有统计学意义(F=17.448,P=0.021);儿童组(0.624±0.207)、青年组(0.507±0.288)、中年组(0.704±0.168)、老年组(0.561±0.288)白内障患者间LEC中CaM的表达比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 CaM在人LEC的表达与白内障的发生发展相关,可能是晶状体损伤白内障发生的一个标志,CaM在白内障LEC中表达无年龄相关性。
- 赖伟霞梁皓谭少健李霞邹文进蒋林志
- 关键词：钙调素白内障晶状体上皮细胞免疫荧光
- 不同轴向透明角膜切口对低角膜散光度数白内障患者术后视力及角膜散光的影响被引量：3
- 2018年
- 目的探讨不同轴向透明角膜切口对低角膜散光度数白内障患者超声乳化术后视力及角膜散光的影响。方法选取术前角膜散光≤0. 5 D的98例(100眼)白内障患者,均行白内障超声乳化术,根据术前角膜散光轴位将其分成3组,A组29例(30眼)行陡轴切口,B组33例(33眼)行平坦轴切口,C组36例(37眼)行中间轴切口。记录术前、术后1周、1个月、3个月的裸眼视力、矫正视力及角膜散光度大小和轴向变化,并采用Jaffe矢量分析法计算角膜术源性散光(SIA)。结果在术后1周、1个月、3个月,3组裸眼视力和矫正视力比较,差异均无统计学意义(均P> 0. 05)。术后1个月及3个月,A组角膜散光均低于B组及C组(均P <0. 05)。术后1周、1个月及3个月时,3组SIA比较差异均无统计学意义(均P> 0. 05)。A组术前与术后各时间点的角膜散光轴向比较,差异无统计学意义(均P> 0. 05),B、C两组术前与术后各时间点的角膜散光轴向比较,差异有统计学意义(均P <0. 05)。结论当白内障患者术前角膜散光≤0. 5 D时,选择陡轴向的切口可获得较佳的术后裸眼视力及矫正视力,且角膜散光度更小,术后轴位较稳定,能获得更好的视觉质量。
- 唐雪珊杨勇梁皓
- 关键词：白内障透明角膜切口散光轴位角膜散光视力
- 低表达衰老标记蛋白30对高钙状态下人晶状体上皮细胞增殖和氧化的影响被引量：1
- 2020年
- 目的:探讨高钙状态下衰老标记蛋白30(SMP30)低表达对人晶状体上皮细胞(LECs)系SRA01/04增殖、氧化应激的影响。方法:设计3条干扰SMP30靶向基因RGN表达的RNAi序列(KD1~3),以空载序列为阴性对照组(NCKD),构建慢病毒载体并感染SRA01/04细胞,同时以未感染的SRA01/04细胞作空白对照组(CON)。RT-PCR筛选干扰效率最高的慢病毒载体用于后续实验。采用含15mmol/L CaCl2的完全培养基处理细胞24h模拟发生白内障时人LECs的病理状态,通过BrdU-Elisa法检测细胞增殖活力,并检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性及氧化型谷胱甘肽/总谷胱甘肽(GSSG/T-GSH)水平以评估细胞氧化应激水平。结果:成功构建KD1~3及NCKD慢病毒载体,感染SRA01/04细胞效率约80%。三种慢病毒载体(KD1~3)敲减效率分别为93%、60%、74%,故选择KD1慢病毒载体进行后续实验。高钙状态下,KD1组细胞相对增殖活力和SOD活力[(2.42±0.08)和(11.69±0.52U/mg)]均低于NCKD组[(2.95±0.08)和(31.10±2.24U/mg)]和CON组[(2.96±0.25)和(26.33±1.04U/mg)],GSSG/T-GSH比值(70.80±2.34)高于NCKD组(15.93±3.47)和CON组(20.05±2.45)(均P<0.05),而NCKD组与CON组上述指标均无差异(P>0.05)。结论:高钙状态培养下,RGN-RNAi慢病毒载体介导的SMP30低表达SRA01/04细胞增殖活力及抗氧化应激能力减弱,提示SMP30可能具有调控细胞增殖、抗氧化应激的保护作用。
- 李松蔓韩子豪Aint Thu Thu Win陈曦梁皓
- 关键词：人晶状体上皮细胞细胞增殖白内障
- 有晶状体眼虹膜固定型人工晶状体植入术后远期人工晶状体脱位临床分析被引量：2
- 2015年
- 目的探讨有晶状体眼虹膜固定型有晶状体眼人工晶状体(phakic intraocular lens,PIOL)植入术后远期人工晶状体脱位、移位情况及原因分析。方法对我中心2005至2013年开展的Verisyse PIOL植入术矫正高度近视患者52例(104眼)进行术后平均6.5 a随访性研究,对其中发生PIOL脱位、移位患者的临床资料进行回顾性分析。结果 104眼中8眼发生PIOL不全脱位,其中1眼是因为拳头打伤颞侧晶状体袢脱落,2眼因皮球打伤眼睛致一侧晶状体袢脱落,1眼因撞击后出现鼻侧晶状体袢脱落,2眼是搬动重物一侧晶状体袢脱落,1眼是自然分娩后出现双侧晶状体袢脱落并PIOL脱落入前房,1眼是夹持虹膜部位退行性改变致晶状体脱位。7眼发生PIOL下移,下移程度>0.5 mm,其中晶状体袢单侧下移2眼,双侧下移5眼。8眼PIOL脱位中6眼行PIOL再固定术,2眼行PIOL取出术。结论 PIOL脱位与术后眼部外力及外伤、眼压波动、手术时固定虹膜组织的程度不够、所夹取的虹膜组织发生脱色素和退行性变有关,PIOL本身有自身的重量,长期作用会发生向下移位或襻脱离。
- 张莹谭少建李霞刘彩娟梁皓
- 关键词：有晶状体眼人工晶状体植入术晶状体脱位
- 过氧化氢诱导的急性氧化应激对人晶状体上皮细胞形态、生存率及衰老标记蛋白30(SMP30)表达的影响被引量：5
- 2017年
- 目的探讨过氧化氢诱导的急性氧化应激对人晶状体上皮细胞形态、生存率及衰老标记蛋白30(senescence marker protein30,SMP30)表达的影响。方法采用不同浓度过氧化氢(0μmol·L^(-1)、100μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、300μmol·L^(-1))处理人晶状体上皮细胞24 h,建立不同浓度急性氧化应激模型,通过光镜观察、MTT分析细胞形态、生存率,Western blot检测SMP30蛋白的表达情况。结果不同浓度过氧化氢处理细胞24 h后,100μmol·L^(-1)处理组和200μmol·L^(-1)处理组细胞密度、生长活力下降,细胞形态改变,开始出现变圆变大的细胞,胞体拉长,边界不清;300μmol·L^(-1)处理组细胞密度明显降低,细胞出现破碎,溃解。随着过氧化氢浓度的增高,细胞生存率逐渐下降,各处理组与对照组(0μmol·L^(-1))间相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。在对照组及100μmol·L^(-1)处理组、200μmol·L^(-1)处理组晶状体上皮细胞SMP30蛋白相对表达量分别为0.273±0.055、0.464±0.058、0.442±0.050,100μmol·L^(-1)处理组、200μmol·L^(-1)处理组SMP30蛋白的表达均较对照组提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05),100μmol·L^(-1)处理组和200μmol·L^(-1)处理组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论在急性氧化应激状态下人晶状体上皮细胞形态改变,生存率下降,SMP30蛋白表达上调,SMP30蛋白可能参与晶状体上皮细胞急性氧化应激损伤过程。
- 李舒凝陈曦张鸿侃蒋林志梁皓谭少健
- 关键词：人晶状体上皮细胞
- 急性氧化应激初期人晶状体上皮细胞株SRA01/04中衰老标记蛋白30抗氧化作用的研究被引量：2
- 2019年
- 目的初步探讨衰老标记蛋白30(senescence marker protein 30,SMP30)的增加对处于急性氧化应激初期的人晶状体上皮细胞株SRA01/04的保护作用。方法将处于对数生长期的SRA01/04接种于96孔板,分别使用含150μmol·L^(-1)、200μmol·L^(-1)、250μmol·L^(-1)、300μmol·L^(-1)、350μmol·L^(-1)、400μmol·L^(-1)、450μmol·L^(-1)H2O2的培养基作用2 h,CCK-8法选取最佳H2O2浓度;使用慢病毒对SRA01/04进行转染建立SMP30高表达模型,实验分3组:SMP30过表达(overexpression,OE)组、SMP30过表达相应空载(negative control over expression,NCOE)组及对照(control,CON)组。通过超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)定量检测试剂盒、氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione,GSSG)/总谷胱甘肽(total glutathi-one,T-GSH)测定试剂盒测量细胞内SOD活力及GSSG/T-GSH比值的变化。结果经分析,建立模型的最佳H2O2浓度为300μmol·L^(-1)。在此浓度下,与CON组(5. 783±0. 192) U·mg^(-1)及NCOE组(5. 837±0. 182) U·mg^(-1)相比,OE组细胞内SOD活力升高,为(10. 251±0. 110) U·mg^(-1);与CON组(29. 943±0. 241)及NCOE组(30. 037±0. 433)相比,OE组细胞内GSSG/T-GSH比值(20. 990±0. 342)降低;差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。结论当SRA01/04处于H2O2诱导的急性氧化应激初期时,SMP30表达的增加可通过增加SOD活力和降低GSSG/T-GSH比值,加强SRA01/04的抗氧化能力。
- 韩子豪李松蔓李艳玮陈曦张鸿侃蒋林志梁皓
- 关键词：人晶状体上皮细胞超氧化物歧化酶谷胱甘肽
