目的研究RKIP低表达对肝星状细胞(HSC)在细胞外基质上黏附功能的影响。方法通过RKIP的RNAi腺病毒载体感染HSC细胞株LX-2,实验分为RKIP的RNAi组(RKIP-RNAi-AD)和阴性对照组(NC-RNAi-GFP-AD)。Western印迹方法确定病毒感染后验证外源RKIP在细胞内表达情况。采用matrigel、Ⅰ型胶原及纤维连接蛋白包被的24孔板模拟肝纤维化病理状态下ECM成分的改变,将腺病毒干预后的LX-2以1.0×105/ml的浓度接种到包被后24孔板上,37℃培养1 h后,甲醛固定,结晶紫染色。200倍纤维镜下观察并计数黏附的细胞数。结果 RKIP的RNAi组较对照组蛋白表达减少(0.29±0.06 vs 0.73±0.14,P<0.05)。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的低表达促进细胞在matrigel上的黏附(170±25 vs 66±12,P<0.05)。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的低表达促进细胞在I型胶原上的黏附(200±25 vs 82±13,P<0.05)。与NC-RNAi-GFP-AD对照组相比,RKIP在HSC的低表达促进细胞在纤维连接蛋白上的黏附(276±28 vs 96±17,P<0.05)。结论 SiRNA靶向RKIP可以促进HSC在胶原基质上的粘附。
