河北省自然科学基金(C2010000532)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：焦保华何心郑克彬田伟梁朝辉更多>>
- 相关机构：河北医科大学第二医院更多>>
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- shRNA Notch2对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响被引量：2
- 2011年
- 目的:探讨稳定转染基因Notch2短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)对胶质瘤细胞株U251生长、增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体法将构建插入Notch2-shRNA和无意义shRNA(Negative-shRNA)的重组表达质粒分别转染人脑胶质瘤U251细胞,建立稳定长效转染的细胞株;应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测Notch2-shRNA对U251细胞中Notch2表达的影响及相关蛋白表达的变化;MTT法检测其细胞增殖的影响;FCM法检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:稳定转染Notch2-shRNA后,U215细胞中Notch2 mRNA和蛋白的表达明显受到抑制;干扰组细胞从第5天开始增殖明显降低(P<0.05);干扰组细胞的凋亡率为(15.14±4.26)%,明显高于Negative-shRNA组的(2.70±1.45)%和未转染组的(2.10±1.72)%(P<0.05);Notch2-shRNA干扰组细胞S期细胞所占百分比为(23.1±3.4)%,明显低于转染Negative-shRNA组的(41.2±6.9)%和未转染组的(53.2±7.8)%(P<0.01),而干扰组G1期细胞所占百分率为(51.8±3.9)%,显著高于转染Negative-shRNA组的(38.9±9.7)%和未转染组的(25.2±7.7)%(P<0.05);与转染Negative-shRNA组和未转染组相比,干扰组细胞中p21和p27蛋白表达量上调,而细胞周期蛋白cyclinD1和微型染色体维持蛋白2(minichromosome maintenance 2 protein,MCM2)的表达量下调。结论:Notch2shRNA能有效抑制U251细胞中Notch2的表达和细胞的增殖,为脑胶质瘤基因治疗提供了新的靶点。
- 何心焦保华郑克彬田伟梁朝辉
- 关键词：神经胶质瘤
- shRNA靶向干扰Notch2对人脑胶质瘤细胞株U251的影响
- 2010年
- 目的研究Notch2信号对人脑胶质瘤细胞株U251的增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法应用脂质体将pGFP-V-RSNotch2shRNA干扰质粒导入胶质瘤细胞株U251后,应用MTT法检测细胞增殖变化、流式细胞仪检测转染效率、细胞凋亡和细胞周期的改变、RT-PCR和Westenblot检测Notch2基因的抑制效果和干扰后细胞周期、凋亡相关蛋白的表达改变。结果 pGFP-V-RSNotch2shRNA干扰质粒转染效率为86.68%±2.54%,转染后在mRNA水平和蛋白水平均发生Notch2的表达抑制,与无关序列组和未转染组相比干扰组细胞自第5天开始增殖明显减慢(P<0.05),干扰组G0/G1期细胞百分数(68.2%±1.29%)显著高于无关序列组和未转染组(35.8%±2.37%和47.7%±1.03%,P<0.01),而干扰组G2/S期细胞(20.4%±1.56%)显著低于无关序列组和未转染组(49.1%±3.65%和35.4%±2.42%,P<0.05),干扰组凋亡率显著升高(P<0.05)。细胞周期、凋亡相关蛋白P21上调,cy-clinD1、p-Rb下调。结论 Notch2靶向干扰能够显著抑制U251细胞株的增殖、阻滞细胞周期、增加凋亡。
- 何心焦保华郑克彬田伟
- 关键词：胶质瘤
