国家自然科学基金(39870850)
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- GM-CSF-tk融合基因转导人神经母细胞瘤株SH-SY5Y的抗瘤作用被引量：1
- 2001年
- 目的 :将单纯疱疹病毒胸苷激酶和粒细胞 单核细胞集落刺激因子融合基因 (Lxpsp hGM CSF Hytk)转导人恶性神经母细胞瘤株SH SY5Y ,观察外源融合基因的表达及其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法 :FuGENE6介导将含融合基因的逆转录病毒表达载体和仅含潮霉素磷酸转移酶基因的对照载体分别转染逆转录病毒包装细胞系PA317。以适量病毒上清转导SH SY5Y ,RT PCR方法检测融合基因的存在 ;细胞因子依赖株TF 1的生长状况及丙氧鸟苷 (GCV)杀伤实验鉴定融合基因的表达。结果 :将重组病毒产生细胞PA317 GM CSF Hytk和PA317 Hy的病毒上清 2ml分别转导SH SY5Y ,6 0mg·L-1的潮霉素进行筛选 ,得到了稳定传代的阳性细胞集落SY5Y GMHytk ,SY5Y Hy。RT PCR检测阳性细胞集落中有外源的GM CSF存在。用阳性细胞集落上清培养TF 1细胞 ,细胞成活。SY5Y ,SY5Y GMHytk ,SY5Y Hy 3种细胞的生长曲线无明显差别 ,但用不同浓度GCV分别作用于此 3种细胞显示 :0 .0 3～ 30 0mg·L-1的GCV对SY5Y GMHytk有明显的杀伤作用 (IC50 =3mg·L-1) ,而对另外两种细胞几乎无毒性作用 (IC50 >30 0mg·L-1)。 30mg·L-1GCV作用 96h后可杀死 80 %以上的SY5Y GMHytk细胞。结论 :应用逆转录病毒介导 ,将融合基因GMCSF tk成功地导入了SH SY5Y肿瘤细胞株 ,并观察?
- 张骏王新娟张蕾许进力王笑健蔺新力
- 关键词：粒细胞巨噬细胞集落刺激因子胸苷激酶神经母细胞瘤
- 金雀异黄素对小鼠红白血病细胞系MEL的抑制作用被引量：3
- 2003年
- 选择小鼠红白血病细胞系MEL作为金雀异黄素 (genistein)的作用对象 ,以探讨其对MEL的抑制作用及其可能的作用机理 .MTT和生长曲线表明 ,金雀异黄素对MEL细胞具有很强的生长抑制作用 (半数最大抑制效应浓度IC50 为 7 12mg L) .流式细胞术显示 ,金雀异黄素能够使MEL细胞发生G2 M期阻滞 ,但是诱导MEL凋亡作用并不明显 .DNA凝胶电泳发现金雀异黄素能够造成MEL细胞DNA的损伤 .联苯胺染色显示金雀异黄素对MEL细胞具有很强的诱导分化作用 ,且这种作用是时间和剂量依赖性的 .RT PCR显示 ,金雀异黄素能够抑制MEL细胞中原癌基因c myc的表达 .生物流变学检测发现 :金雀异黄素作用后 ,MEL细胞表面电荷密度减少、渗透脆性增大。
- 钟兴兰王新娟姚伟娟李付英张蕾
- 关键词：金雀异黄素分化诱导生物流变学
- 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的克隆、表达及重新折叠被引量：6
- 2000年
- 目的 :人的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TNF relatedapoptosisinducingligand ,TRAIL)基因经扩增后 ,克隆在大肠杆菌中表达并重新折叠并获得有活性的TRAIL蛋白。方法 :用PCR的方法从人胎盘cDNA文库中扩增TRAIL基因 ,经序列分析鉴定 ,再克隆到原核表达载体 pET11a ,经E .coliBL2 1(DE3)表达 ,电泳鉴定后 ,柱层析纯化 ,重新折叠 ,流式细胞术等方法检测其促凋亡活性。结果 :得到了TRAIL基因 ,并构建了可在大肠杆菌中表达的载体 pET11 TRAIL1(含TRAILcDNA序列 418 933)及可在真核细胞中表达的载体pLNCX TRAIL2 (含TRAILcDNA序列 88 933)。取前者在E .coliBL2 1(DE3)中表达 ,经纯化 ,重新折叠得到了复性的TRAIL蛋白。检测其对人白血病细胞株Jurkat有诱导凋亡的作用。结论 :从人胎盘cDNA文库中扩增TRAIL基因 ,在大肠杆菌中表达、重新折叠、纯化后 。
- 王新娟吴时丽魏晓超蔺新力
- 关键词：基因表达肿瘤基因治疗肿瘤坏死因子TRAIL
